Фототромбоза является быстрым, минимально-инвазивной техники для стимулирования малого и четко обозначенной миокарда в областях, представляющих интерес в сильно воспроизводимым образом. Он особенно подходит для изучения клеточных и молекулярных ответов, лежащие в основе пластичности мозга у трансгенных мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Фототромботического ишемии: малоинвазивной и воспроизводимые фотохимические Кортикальная Модель Поражение исследований Мышь ход
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Фототромботического модель удара направлена вызывать ишемическое повреждение в данной области коры посредством фото-активации ранее вводили светочувствительным красителем. После освещения, краситель активизируется и вырабатывает синглетного кислорода, который повреждает компоненты эндотелиальные клеточные мембраны с последующей агрегации тромбоцитов и образование тромбов, которые в конечном итоге определяет прерывание местного кровотока. Этот подход, первоначально предложенный Розенблюм и El-Саббан в 1977 году, был позже улучшена Уотсона в 1985 году в головном мозге крыс и установить основе текущей модели. Кроме того, повышение доступности линий трансгенных мышей также способствовало повышению интереса со фототромбоза модели. Вкратце, фоточувствительный краситель (Бенгальский Розовый) вводят внутрибрюшинно и поступает в кровь. При освещении источник холодного света, краска активируется и вызывает повреждение эндотелия с активацией тромбоцитов и тромбоз, в результате чего местныепрерывание кровотока. Источником света может быть применен на неповрежденную черепа без необходимости трепанации черепа, что позволяет таргетинга любой области коры интереса к воспроизводимым и неинвазивным способом. Затем мышь зашивается и позволил, чтобы проснуться. Оценки ишемического повреждения могут быть быстро достигнуто путем трифенил-тетразолия хлорида или крезиловый окрашивание фиолетовым. Этот метод вызывает инфаркт небольшого размера и строго определенной границы, которая является весьма выгодным для точной характеристики клеток или функциональных исследований. Кроме того, оно особенно подходит для изучения клеточных и молекулярных ответов, лежащие в основе пластичности мозга у трансгенных мышей.
Введение
В начале 21 века, ишемического инсульта является разрушительным расстройство, которое представляет собой вторую причину долгосрочной инвалидности 1 и второй причиной смертности во всем мире, в котором инсульт приходится примерно 5,7 миллиона случаев смерти в 2004 году 2. Несмотря на многие усилия, которые были размещены, до сих пор нет эффективного лечения для улучшения функционального восстановления после инсульта. Животных моделях инсульта широко применяются в области инсульт исследований, поскольку они позволяют моделирование патофизиологии ишемического повреждения и проверки эффективности различных стратегий нейропротекторное в естествен....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Предварительно хирургии
- Взвесить Бенгальский Розовый в 1,5 мл пробирку и не растворяется в стерильном солевом растворе до достижения конечной концентрации 15 мг / мл. Фильтр стерилизуют через 0,2 мкм фильтр и хранить его в темном месте при комнатной температуре до двух месяцев.
- Стерилизовать всех хирургических инструментов в автоклаве. Хирургической области следует продезинфицировать менее чем за один час до начала операции.
- Запишите вес тела мыши, чтобы корректировать дозу бенгальским розовым, который будет введен. Мы вводили 10 мкл / г веса животного в женских мышей CD1 12 недель в настоящем протоколе. Количество Бенгальский Розовы....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Этот протокол будет производить корковое поражение, что уже видно на вскрытие коре невооруженным глазом (фиг.1А-1С). Фототромботического поражение развивается в поверхностных и глубоких слоях коры, в которой ткань является достаточно прозрачной, чтобы фото-активации бенгальский розовый. Измерение степени инфаркта мозга может быть выполнена быстро гистологического окрашивания трифенилсвинца тетразолием хлорид (ТТК) на свежей ткани или крезиловым фиолетовым после фиксации в 4% параформальдегида (PFA). До .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Модификации и замены
Из-за своего пика поглощения при 562 нм, зеленый лазерный луч из отфильтрованного ксеноновой дуговой лампы был первоначально выбран для облучения фоточувствительных бенгальским розовым. Хотя лазер-опосредованного возбуждения еще использовался recently5, она может быть заменена лампа холодного света, которые также обеспечивают красителя возбуждения 10,15. Холодный свет оптических волокон легче манипулировать и дешевле, чем лазерные источники. Тем не менее, следует.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Мы благодарим Annalisa Buffo для предложений проницательный и комментарии, и Маурицио Grassano, Марина Boido и Эрмира Pajaj для стрельбы. Эта работа финансировалась FP7-MC-214 003-2 (Мария Кюри Начальная подготовка сети AXREGEN) и Compagnia ди Сан-Паулу, gliarep проекта.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Растворы и химикаты | |||
| Rose Bengal | Sigma, Италия | 330000 | |
| Isoflurane Vet | Merial | 103120022 | |
| Betadine | Asta Medica | ||
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| Surgical material and equipment | |||
| флуосорберный фильтр | Аппарат Havard | 340415 | |
| волоконно-оптический осветитель мощностью 150 Вт | Фотонный | PL3000 | |
| Регулятор температуры для пластины TCAT-2DF | Аппарат Havard | 727561 | |
| стереотаксический прибор | Stoelting | 51950 | |
| Операционный микроскоп | Takagi | OM8 | |
| Грелка | |||
| Кислород и газообразный | |||
| Хирургические инструменты Мировой | прецизионный инструмент | Метчики по оптическому волокну и маска изготавливаются на заказ |
Ссылки
- Lopez, A. D., Mathers, C. D., Ezzati, M., Jamison, D. T., Murray, C. J. Global and regional burden of disease and risk factors. Lancet. 367, 1747-1757 (2001).
- Mathers, C. D., Boerma, T., Ma Fat, D. Global and regional causes of death. Br. Med. Bull. 92, 7-32 (2009).
- Rosenblum, W. I., El-Sabban....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
