Цель состоит в том, чтобы произвести артериовенозного свища, который является простым и воспроизводимым. Этот метод не использует швов или клея клея. Таким образом, образцы могут быть использованы с наименьшим количеством посторонних материалов для анализа.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Технические аспекты свища аортокавальной мышь
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Технические аспекты создания артериовенозной фистулы у мышей обсуждаются. Под общим наркозом, брюшной надрез, и аорты и нижней полой вены (НПВ) подвергаются. Проксимальных инфраренальной аорты и дистальной аорты расчленены для размещения зажима и прокол иглой, соответственно. Особое внимание уделяется, чтобы избежать вскрытия между аортой и нижней полой вены. После зажима аорты, 25 G игла используется для прокалывания обе стенки аорты в НПВ. Окружающей соединительной ткани используется для гемостатических сжатия. Успешное создание AVF покажет пульсирующего артериального кровотока в нижней полой вене. Дальнейшее подтверждение успешного AVF может быть достигнуто путем послеоперационного ультразвуковой допплерографии.
Введение
Наиболее распространенным вариантом выбрали для заместительной почечной терапии у больных с терминальной стадией почечной недостаточности является гемодиализ. Доступ для гемодиализа осуществляется артериовенозной фистулы (АВФ), артериовенозной трансплантата, или временного катетера. Хотя AVF являются предпочтительным способом доступа, AVF все еще далеки от совершенства. Один год первичная проходимость AVF ставки только 60-65%, при этом многие неудачи из-за неоинтимальной гиперплазии. Молекулярной биологии и физиологии нормального формирования АВФ и неадекватного формирования остается слабо изучен. Таким образом, многое которые могут быть получены в улучшении AVF результаты со ссылками на прилагаемые выигрыш в понимании регулирования свищей. 1-3
Выдержка из вены артериального кровотока обычно изучается в контексте венозных шунтов, которые являются прямыми моделями хирургического шунтирования. 4, 5 Хотя венозных шунтов и AVF схожее ознакомление вене артериальная среде существует несколько критических диfferences между ними. Во-первых, сопротивление дистального русла стоков значительно ниже в AVF, как AVF стоков в правое предсердие, тогда как вены трансплантата стоков от часто больные дистальной части тонкой артерии, что приводит к увеличению кровотока и напряжение сдвига в AVF. Во-вторых, крови в венозной конечности AVF может представлять собой смесь венозной и артериальной крови приводит к снижению оксигенации по сравнению с чисто артериальной содержание в шунта. В-третьих, вены в AVF не удаляется из его дна, что приводит к сохранению ее сосуда venorum и нервной иннервации, по сравнению с полной транспозицией шунта в артериального русла. И наконец, количество анастомозов, как правило, два в венозных шунтов в то время как AVF обычно имеет только один. В этом исследовании мы вводим мышиной модели аортокавальной свищ, который может быть использован для изучения AVF.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Анестезия и Дооперационное Процедуры
- Индукция общей анестезии
Утверждению соответствующими Институциональные уходу и использованию животных комитета получается. Самцы мышей C57/black, в возрасте 10 недель, под наркозом. Доставить 4% с 0,8 изофлурана л / мин кислорода через коробку из плексигласа изофлурана испарителем и поместите курсор внутрь. Кроме того, при желании хирургом, внутрибрюшинный анестезии могут быть использованы. - Сохранение анестезией
После подтверждения анестезии отсутствие реакции до ног крайнем случае, когда мышь попадает на операционном столе в положении лежа на спине с силиконовой маской. Isoflurane снижается до 2% для поддержания соответствующего уровня анестезии. - Удаление волос
Брюшной волос удаляется от шеи до нижней части живота использования для удаления волос. Для удаления волос является предпочтительным, поскольку волосы, что осталось помощью бритвы может помешать допплерография.
2. Предоперационная Ultrasounре
- Цели ультразвук
Доплеровский УЗИ выполняется до операции AVF, чтобы записать результаты базового уровня, который можно сравнить с послеоперационными выводы, чтобы увидеть анатомические и физиологические изменения. - Точках наблюдения
Яремную вену, сверх-и ИК-почечной нижней полой вены (НПВ) и брюшной аорты исследуют с использованием как импульс Доплера и в В-режиме. - Размеры
Использование в В-режиме, диаметр каждого сосудистой измеряется. Кроме того, максимальная скорость (пиковой систолической скорости в артерии) и сигналы записываются в каждый из измерительных точек описано выше.
3. Оперативных процедур
- Подготовка Мышь
Подготовьте место разреза с местного антисептика и продолжить надлежащее асептики во время операции, включая применение хирургической простыни, стерильные перчатки и инструменты и т.д. - Лапаротомия
Средняя линия брюшной надрез FROM нижний край печени чуть выше лобка. - Воздействие на аорте и НПВ.
Ретрактор вставляется и все кишечника вытягиваются из брюшной полости с правой стороны и все завернуты в марлей, смоченной солевым раствором. Проанализируйте мембрана, которая соединяет забрюшинного пространства и нижней части толстой кишки, чтобы получить полное представление о аорты и нижней полой вены. Подайте давление на мочевой пузырь, если она расширена и стоит на пути. - Воздействие на месте прокола
Пункции будет между половины до трех четвертей расстояния от левой почечной вены в бифуркации аорты. (Рис. 1) Рассеките левого края аорту так, что она может быть проколот. Следует помнить, что аорты расположена примерно на 45 градусов позади нижней полой вены и она должна быть расчлененный сзади в дополнение к левой стороне. (Рис. 2) Наиболее важным моментом этой операции не рассекать между аортой и нижней полой вены. Хранить вдали от них. - Воздействие на месте зажимом аортыTA
Проанализируйте инфраренальной аорты от окружающих тканей. Будьте осторожны, чтобы не повредить IVC слева и левой почечной вены с ее притоками справа. - Зажимной аорты
Зажмите проксимального отдела аорты с применением микрохирургии клипов. - Вращение аорты
По захвата соединительной ткани, окружающей аорты, вращаются в аорту так, что прокол может быть сделан из слегка спинной части аорты (рис. 2). - Прокол аорты до IVC
Сохранение в аорте повернутом положении, прокол аорты до IVC использование 25 G иглы. (Рис. 2) В случае успеха, иглу можно увидеть через тонкие стены IVC. - Гемостаз
Потянув за забрюшинного ткани, включая мышцы, оберните место прокола аорты. Не сжимать аорту против IVC, поскольку это может сгусток AVF (рис. 3). - Ослабление зажима аорты
После подтвержденияпервичного гемостаза, де-зажим аорты. Дополнительные кровотечение может произойти, но она может быть остановлена с последующим сжатием описано выше. По Ослабление зажима артериальной крови можно увидеть, впадающих в IVC вместо темных венозного кровотока. - Закрытие живота
Вернуться недр в естественном положении и закройте живота.
4. Послеоперационный Процедуры
- Послеоперационный уход
После закрытия брюшной полости, изофлуран остановлен. Послеоперационный уход, включая обезболивание и ран применяется в соответствии с инструкцией рекомендовано Институциональные уходу и использованию животных комитета. Для аналгезии мы используем бупренорфин в дозе 0,1 мг / кг intrasmuscularly каждые 12 ч в течение 24 ч после хирургических процедур. - Послеоперационный ультразвук
В первый день после операции, ультразвуковая допплерография проводится для подтверждения AVF. Кроме того, другие переменные измерены, чтобы проверить изменения с предоперационногозначений.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
После практики выживания на первом послеоперационный день, как правило, более 95%, в послеоперационный день 7, выживаемость была 91,3% На рисунках 1 и 2 показывают идеальным местом прокола в корональной и поперечное сечение;. Размещение прокола Сайт имеет решающее значение для получения хорошего выживания без чрезмерного кровотечения. Интраоперационная смертности и ранней послеоперационной смерти, как правило, в связи с кровотечением. Это обычно происходит с чрезмерным рассечение между аортой и нижней п...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Есть несколько отчетов, описанных AVF у крыс, в том числе бедренной AVF, 6, 7 сонной к яремной AVF 8 и аорто-полой AVF. 9, 10 крыс в несколько раз больше, чем мыши, что упрощает операции у крыс по сравнению мыши. Тем не менее, для того, чтобы воспользоваться мышью генетические штаммы и варианты процедура должна быть распространена на мышиных моделях. Несколько ранее опубликованные отчеты представили AVF модели на мышах, но эти сведения в целом были в контексте Разработка модели для право...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Эта работа была выполнена при частичной поддержке Национального института здоровья грант R01-HL095498, а также с ресурсами и использования средств на VA Коннектикута системы здравоохранения, Уэст-Хейвен, штат Коннектикут.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| ультразвуковой аппарат Vevo 770 | Visualsonics | сканирующая головка 20-60 МГц; RMV-704 | |
| Сосудистый зажим | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5424 | |
| Зажим для наложения щипцов | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 | |
| Игла 25 калибра | Becton Dickinson | BD PrecisionGlide Игла 25G x 7/8 #305124 |
Ссылки
- Allon, M. Current management of vascular access. Clinical Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 786-800 (2007).
- Dixon, B. S. Why don't fistulas mature? Kidney International. 70 (8), 1413-1422 (2006).
- Roy-Chaudhury, P., Spergel, L. M., Besarab, A., Asif, A., Ravani, P. Biology of arteriovenous fistula failure. Journal of Nephrology. 20 (2), 150-163 (2007).
- Kudo, F. A., Muto, A., et al. Venous identity is lost but arterial identity is not gained during vein graft adaptation. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 27 (7), 1562-1571 (2007).
- Muto, A., Yi, T., et al. Eph-B4 prevents venous adaptive remodeling in the adult arterial environment. The Journal of Experimental Medicine. 208 (3), 561-575 (2011).
- Croatt, A. J., Grande, J. P., et al. Characterization of a model of an arteriovenous fistula in the rat: the effect of L-NAME. The American Journal of Pathology. 176 (5), 2530-2541 (2010).
- Misra, S., Fu, A. A., et al. The rat femoral arteriovenous fistula model: increased expression of matrix metalloproteinase-2 and -9 at the venous stenosis. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 19 (4), 587-594 (2008).
- Kojima, T., Miyachi, S., et al. The relationship between venous hypertension and expression of vascular endothelial growth factor: hemodynamic and immunohistochemical examinations in a rat venous hypertension model. Surgical Neurology. 68 (3), 277-284 (2007).
- Caplice, N. M., Wang, S., et al. Neoangiogenesis and the presence of progenitor cells in the venous limb of an arteriovenous fistula in the rat. American Journal of Physiology Renal Physiology. 293 (2), F470-F475 (2007).
- Nath, K. A., Kanakiriya, S. K., Grande, J. P., Croatt, A. J., Katusic, Z. S. Increased venous proinflammatory gene expression and intimal hyperplasia in an aorto-caval fistula model in the rat. The American Journal of Pathology. 162 (6), 2079-2090 (2003).
- Karram, T., Hoffman, A., et al. Induction of cardiac hypertrophy by a controlled reproducible sutureless aortocaval shunt in the mouse. Journal of Investigative Surgery. 18 (6), 325-334 (2005).
- Perry, G. J., Mori, T., et al. Genetic variation in angiotensin-converting enzyme does not prevent development of cardiac hypertrophy or upregulation of angiotensin II in response to aortocaval fistula. Circulation. 103 (7), 1012-1016 (2001).
- Guzman, R. J., Krystkowiak, A., Zarins, C. K. Early and sustained medial cell activation after aortocaval fistula creation in mice. The Journal of Surgical Research. 108 (1), 112-121 (2002).
- Castier, Y., Lehoux, S., et al. Characterization of neointima lesions associated with arteriovenous fistulas in a mouse model. Kidney International. 70 (2), 315-320 (2006).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
