Ли старение предотвращает или способствует туморогенез остается спорным. Поскольку химиотерапевтические препараты могут вызывать раковые клетки стареть, изучая старение имеет важное значение для предложения новых методов лечения. Однако, стандартный и широко используется β-галактозидазы анализа представлены основные недостатки. Мы предлагаем здесь Быстрый и чувствительный проточной цитометрии на основе анализа для количественной старения.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Чувствительным методом для количественной стареющие клетки рака
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Клетки человека не бесконечно размножаться. От внешних и / или внутренних сигналов, клетки могут погибнуть или введите стабильной арест клеточного цикла называется старением. Несколько клеточные механизмы, такие, как укорочение теломер и аномальной экспрессии онкогенов митогенных, было показано, что причиной старения. Старение не ограничивается нормальными клетками; раковые клетки Сообщалось также, что стареют.
Химиотерапевтические препараты индуцируют старение в раковых клетках. Однако остается спорным ли старение предотвращает или способствует туморогенез. Как это в конечном итоге может быть конкретного пациента, Быстрый и чувствительный метод оценки старение в раковой клетке вскоре будет необходимо.
Для этого, стандартные β-галактозидазы анализа, используемые в настоящее время методы представлены основные недостатки: она занимает много времени и не чувствительна. Мы предлагаем здесь проточной цитометрии анализа на основе изучения старения на Ливе клеток. Этот тест дает преимущество в том, быстрый, чувствительный, и может быть соединен с иммунного различных клеточных маркеров.
Введение
С начала шестидесятых годов и его открытия и Хейфликом Moorhead, старение остается сотовая любопытства 1. Клетки человека не бесконечно размножаться и, по старению, Хейфликом и Мурхеде придумал клеточный процесс старения. Старение является стабильным клеточного цикла, в котором клетки остаются метаболически активными по сравнению с клеточной смерти. На сегодняшний день четыре клеточные механизмы, как было показано, чтобы вызвать старение: укорочение теломер, повреждение ДНК, хроматин возмущение, и аномальной экспрессии онкогенов митогенных 2. Это означает, что не только нормальные клетки, но и раковые клетки могут подвергаться старению 3.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка C12FDG, Bafilomycin A1, и в клеточной культуре
- Растворить С 12 ФДГ порошок в диметилсульфоксиде (DMSO) до конечной концентрации 20 мМ. Алиготе и хранить при температуре -20 ° С. ДМСО следует использовать с соответствующих безопасных условиях.
- Растворить порошок bafilomycin A1 в ДМСО до конечной концентрации 0,1 мМ. Алиготе и хранить при температуре - 20 ° С. Bafilomycin должны использоваться с соответствующими условиями безопасности.
- Культивируйте RPMI 8226 клеточной линии или другие клеточные линии, прилипшие или нет, в среде, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки и 1% антибиотиков, при 37 ° С, 5% СО 2....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Множественная миелома, гематологические злокачественные опухоли, был использован для оценки старение индуцированного химиотерапевтические процедуры. Для этого коммерчески доступные линии клетки ММ (RPMI 8226) лечился в течение 2 дней с доксорубицином, химиотерапевтических препаратов. Затем клетки подвергают обработке bafilomycin A1 и дополнительно инкубировали с С12 FDG. Клетки анализировали с помощью проточной цитометрии. 1 иллюстрирует различные этапы и показывает, что процент стареющих кле.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Мы представили здесь проточной цитометрии на основе количественного метода определения клеточного старения в живых клетках рака. Этот метод основан на использовании мембраны проницаемой соединения, C 12 ФДГ, и поэтому может быть использован в любом типов клеток и после различных обработок тех пор, пока соединение поглощается клетками. После поглощения клетками, C 12 ФДГ гидролизуют β-галактозидазы, обогащенная лизосомах стареющие клетки. После лазерного возбуждения, соединение испускает зеленое све.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Мы благодарим SF 4206 ICORE (Университет Кана) для использования цитометрии объекта. JC получил пост-докторские стипендии Conseil d'де радиационной EDF и советом областного Нижней Нормандии. Эти данные, как часть проектов, финансируемых Ligue Nationale Contre Le Рак - Comités де л'Орн э дю кальвадоса.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 5-додеканоиламинофлуоресцеин di-β-D-галактопиранозид | Инвитроген | D-2893 | |
| Диметилсульфоксид | Sigma | D2650 | |
| Бафиломицин A1 | Sigma | B1793 | |
| Доксорубицин | Sandoz | ||
| Трипановый синий | Sigma | T8154 | |
| RPMI 1640 среда для культивирования клеток | Lonza | BE12-702 | |
| Фетальная сыворотка теленка | PAA Laboratories GmBH | A15 101 | |
| Антибиотики | Gibco | 5290-018 | |
| Проточный цитометр | Gallios Beckman Coulter | A94291 |
Ссылки
- Hayflick, L., Moorhead, P. S. The serial cultivation of human diploid cell strains. Experimental Cell Research. 25, 585-621 (1961).
- Campisi, J., d'Adda di Fagagna, F. Cellular senescence: when bad things happen to good cells. Nature Review Molecular Cell Biolo....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
