Мы описываем рассечение нервной системы морской морской заяц Aplysia После наркоза, изоляция нейронов на короткий срок-культуре тканей, и записи одной ячейки ионных токов через технику зажим патч.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Морских брюхоногих моллюсков Aplysia саЩогтса имеет почтенную историю как модель нервной системы, при этом особое значение в исследованиях обучения и памяти. Типичные препараты для таких исследований являются те, в которых сенсорных и двигательных нейронов остаются нетронутыми в минимально расчлененный животного или технически сложные нейронные совместное культивирование индивидуальных сенсорных и моторных нейронов. Менее распространенной является изолированной нейронной препарат, в котором небольшие группы номинально однородные нейроны распадается на отдельные клетки в краткосрочной перспективе культуры. Такие изолированные клетки могут быть использованы для биофизические характеристики ионного тока использованием патч зажим методы, а также целевые модуляции этих проводимостей. Методике получения таких культур описано. Протокол использует легко идентифицировать глутаматергические сенсорными нейронами плевральной и щечной ганглиев, и описывает их диссоциации и минимальное техническое обслуживание яРусская культура в течение нескольких дней без сыворотки.
Введение
Морских моллюсков opistobranch, Aplysia, был полезный нейробиологическое модели на протяжении многих десятилетий. Он является самым известным в качестве модели привыкания и классического кондиционирования 7, 8. Исследования в области обучения и памяти в этой модели получили Нобелевскую премию по физиологии и медицине в 2000 году Эрик Р. Кандель, в выигрыше он поделился с Арвид Карлссон и Пол Грингард 10. Исследования с участием электрических записей с пониженной препараты, в которых элементы нервной системы беспозвоночных этого расчленены от животного с нервами и мышцами оставлена на устройстве, помогли выяснения роли отдельных нейронов в Aplysia. Идентификация точной молекулярные механизмы, которые составляют обучение в Aplysia однако, часто используют другой способ, долгосрочное со-культур сенсорных нейронов и мотонейронов, полученный по одному из отдельных животных-доноров и позволило сформировать синапс в культуральной чашке 21 .
Мы и другие 1, 3, 6, 14, 15, 16 эксплуатировали легкость, с которой определены нейроны могут быть направлены в этой модели, а также их выносливости в долгосрочных экспериментов сделать диссоциированными краткосрочных культурах кластеров номинально однородные нейроны , в которой мы изучаем ионных токов при напряжении зажим в конфигурации зажим патч. Многие нейроны Aplysia встать на неоднократные вспышки фиксации потенциала, чтобы дать время для длительных экспериментальных манипуляций. Метод полезен для нейронов, таких как нейросекреторной мешок клетках брюшной ганглий и сенсорными нейронами плевральной и щечной ганглиев диссоциации которых мы описываем здесь, но не для очень больших нейронов> 60 мкм в диаметре, такие как L7 или R2 в брюшной ганглий. Мы не используем Aplysia сыворотки в нашей культуре, в отличие от сенсорно-двигательных нейронов совместно культур описано в другом месте. Большинство нейронов, полученные с использованием этой процедуры будет без процессов тон первые 48 ч в культуре, содействие целом записи напряжения клетки, но затем прорастают и разработать аксонов и других процессов в течение примерно 14 дней, прежде чем умереть от недостатка питательных веществ и / или факторами роста.
Эта методика дает первичных культурах нейронов 50-100 за блюдо из физиологически документально регионах буккальное и плевральных ганглиев. Этот протокол является полезным для исследователей, изучающих аспекты одного физиологии клетки в экспериментах, которые требуют многочисленных экспериментальных повторяет одно животное. Он производит согласованную пару культур за счет анатомической отделение клеток-мишеней на левую и правую hemiganglia, позволяя исследования, которые соответствуют выгоду от лечения и контрольных культурах.
Протокол цели щечной S кластер (BSC) нейронов ганглиев щечной и плевральный ventrocaudal (ПВХ) нейронов плевральный ганглия. Эти клетки соответствующего размера для целой клетки напряжения записи и отображения RobusT глутаматергические ответов. Обсуждается методология подходит для большинства ганглиев в Aplysia нервной системы.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка клеток
- В день 1 взвесить и обезболить животное.
- Взвесить 30 г-1 кг животного. Обезболить в 5-10 объемами животное 1:01 морской воды: изотонический MgCl. 6H 2 0 в течение 1 ч при аэрации, такие как электрический воздушный насос аквариум с прикрепленными распылитель.
- Подготовьте рассечение поставок.
- Соберите чистых рассечение лоток из нержавеющей стали прямые контакты, такие как ткани булавками. Сборка несколько чашек Петри содержащие искусственной морской воде (ASW; см. таблицы 1 и 3) + пенициллина / стрептомицина (P / S).
- Подготовьте низкого силового микроскопа. Иметь чистые инструменты вскрытия готовы, например, ребристый нос и тонкие хирургические щипцы, и мелких и крупных хирургических ножниц. Спрей инструментов с 70% спиртом изопропиловый перед использованием и дать высохнуть.
- Позиция животных на вскрытии лоток.
- Позиция животного вентральной стороной вниз в лоток рассечение. Pin животныхчерез ребра стенки тела и параподий границ, но избежать хвостом и головой, чтобы разоблачить и спинной поверхности половых канавкой
- Промойте спинной поверхности в медленно струей холодной водопроводной воды. Применить светового потока на 70% изопропиловый спирт из бутылки сжатия вдоль половых канавку и поверх головы.
- Сделать начальный разрез.
- Использование низкого силового микроскопа (см. таблицу 2) и отраженного света для наблюдения в точке, где половой паз происходит от переднего края оболочки, туго проводить с ребристым нос щипцы складки ткани, слева от этой происхождения, в то время как отсекать мелкие Отверстие все путем гладкую, ровную площадь стенки тела только направо половых канавки с мелкими угловыми ножницами.
- Гемолимфа следует соблюдать, чтобы вылить из отверстия, иногда унося с собой брюшной ганглий и желудка.
- Развернуть разреза.
- Используйте большие ножницы, чтобы расширить йэлектронной разрез спереди до точки между rhinophores, одновременно вытягивая вверх с нижнего ножа, чтобы избежать уменьшение поперечного сечения кишечнике. Внутренние органы будут наблюдаться в высыпался из разреза.
- Снимите ганглиев.
- Установите на лоток и переориентировать микроскоп на область головы.
- Использование чистых щипцов и тонких ножниц, удалить голову ганглиев путем разделения в одной точке нервов, которые образуют ганглии головы в кольцо вокруг пищевода удалить плевральной педали и церебральных ганглиев как группа.
- Снимите щечной ганглий, которая придерживается брюшной стороне пищевода.
- Снимите брюшной ганглий путем разрезания 4 больших связок нервов, выходящие из этого узла.
- Изолировать ганглиях интерес.
- Обрезка головка ганглиев друг от друга, оставляя длину связки прикреплены друг к ганглий интерес, равный по крайней мере, диаметр ганглий, это будет тормозить фермента на пищеварениеклеток интерес к следующему шагу.
- Положите каждую цель ганглий через 2 цикла полоскания противолодочного + P / S, перемещение между полоскания с чистыми щипцами.
- Если они нацелены на ПВХ клетки, оставьте правой плевральной hemiganglion установлен на правый hemiganglion педали, а так же оставить левую плевральную hemiganglion прикреплен к левой hemiganglion педали.
- ВЫБРАСЫВАЙТЕ ганглиев и остального животного в соответствии с принятой практикой исследований.
- Ферментативно переварить ганглиев.
- Для каждого ганглия, готовить 1 мл ферментного раствора, содержащего 3,75 мг диспазы, 1 гиалуронидазы мг и 0,3 г коллагеназы типа XI на мл ASW + P / S в 15-мл полипропиленовую коническую трубку.
- Место промывать ганглиев в раствор фермента и приложите крышку плотно. Поместите пробирку на бок на роторной качалке (см. таблицу 2) при низкой скорости в течение 13.5 часов в течение ночи при приблизительно 23 ° С (комнатная температура).
- Подготовьтекультуры блюд.
- Перед микродиссекции (день 2), готовят поли-D-лизином (PDL) покрытые культуральные чашки в капот культуры ткани. Добавить ~ 0,5 мл PDL (0,2 мг / мл стерильной воды) до центра 35 мм блюдо в течение ~ 25 мин.
- Промыть 3 раза PDL стерильной водой. Дайте высохнуть. УФ-стерилизации пластин.
- День 2 Изолировать нейронов.
- Заполните центре 35 мм блюд, которые были PDL покрытием и УФ стерилизовать примерно 0,5 мл ASW + P / S для создания острове материалы внутри сухих иначе блюдо. Это может быть сделано на скамейке, за пределами капот культуры ткани. Одно блюдо должно быть подготовлено для каждой ячейки кластера, происходящих из hemiganglion.
- Подготовьте 100 мм чашку диаметром рассечение сделанные Sylgard покрытия и отверждения глубиной 5 мм вскрытия поверхности, оснащен прекрасным контактов вскрытие нескольких размеров, которые будут использоваться как булавки и зонды (см. таблицу 3). Промыть это блюдо с 70% спиртом изопропиловый, то с ASW + P / S, и, наконец Fill его с ASW + P / S.
- Подготовьте микродиссекции переваривается ганглиев.
- Налейте раствор, содержащий фермент переваривается плевральной педали и щечной ганглиев в рассечение блюдо.
- Поместите блюдо на столик микроскопа с черной поверхности в отраженном свете.
- С помощью прилагаемой соединительной тканью, придавить каждой плевральной педали hemiganglion спинной стороной вверх. Ткань будет мягкой и нетерпимы к растяжению.
- Microdissect ПВХ нейронов.
- Использование 2 пары чистых тонкий пинцет, и проведение штраф контактный рассечение в одной парой щипцов в качестве зонда, изолировать ПВХ клеток из плевральной hemiganglion. Фермент пищеварение будут удалены или разделен на части соединительной ткани, покрывающей оболочки кластера ПВХ, пока клетки будут прилипать друг к другу.
- С помощью зонда, чтобы отделить эти клетки от педали-плевральный соединительной 18, то пусть падения кластера чеек в нижней части рассечениеблюдо.
- Передача нейронов к культуре блюдо.
- Передача клеточной кластера на подготовленное блюдо культуры 35 мм, аккуратно всасывая кластера в кончик слегка граненые одноразовой стеклянной пипетки Пастера, то это медленно дозирования в средствах массовой информации остров в культуре блюдо, соблюдая осторожность, чтобы избежать введения пузырьков воздуха в пипетку. Повтор изоляции кластера ПВХ другой hemiganglion и поместить в отдельную посуду культуры.
- Microdissect и передачи BSC нейронов.
- Разъем для щечной ганглии брюшной стороне, с осторожностью, чтобы пощадить интерес клетки. Повторите шаг 1,12 с 2 BSC кластеров клеток ротовой ганглий 10.
- Изоляция из ПВХ и BSC нейронов будет производить 4 культуре блюд, содержащих кластеры нейронов: 2 блюд, содержащих кластеры BSC и 2 блюд, содержащих ПВХ кластеров. Откажитесь от остальной части ганглиев и отложите в сторону 100 мм рассечение блюдо.
- DissocИАТЭ клеточных кластеров.
- Поместите чашку Петри, содержащие клетки на стадии низкого силового микроскопа и снимите крышку.
- Диссоциируют кластера ПВХ, осторожно щелкая дне чашки для культивирования, прилегающих к кластера чеек с тонкой контактный вскрытия проведена в щипцов. Рывки копает кончик штифта в пластике дно тарелки, как будто пытался выкопать Флек из пластика. Когда трения с пластиковыми освобождает контактный пункт, ударные волны производится через среду, которая распадается соседнего скопления клеток.
- 5-10 щелчки могут быть необходимы, чтобы почти полностью диссоциируют клеток, но лучше оставить небольшие кластеры клеток, вместо того, чтобы вылить слишком много чтобы клетки будут уничтожены механическим чистой.
- Установите крышку и повторите с другими блюдами культуры.
- Храните клеточных культурах.
- Место культуры блюд, содержащих СМИ островов в их центрах с диссоциированных клеток вбольшой контейнер, который позволяет циркуляции воздуха, например, размером 150 х 25 мм круглая пластиковая блюдо Петри, и поместить это блюдо в инкубатор до 17 ° C.
- Установка в камере открытой чашке воды в качестве источника влажности. Оставьте на ночь спокойно. Клетки будет прилипать к поли-D-лизин покрытием в центр чашки.
- Наводнение блюда культуры.
- На 3 день Аккуратно затопить блюда с 2,5 мл ASW + P / S. Изучить и Граф клеток с использованием инвертированного микроскопа культуре клеток. Хранить в 17 ° C инкубаторе.
2. Электрофизиологии
Метод стандартных фиксации потенциала, которые были описаны в многочисленных текстов (например Sakmann и Neher, 1995) 16. Этот протокол будет работать на клетки ≤ 100 пФ емкости, или клеток <60 мкм в диаметре в дни 3 и 4 протокола. Клетки без процессы являются оптимальными для записи. Следующие специальные РАССМОТРЕНИЕионы применяются:
- Крупные клетки могут быть размещены с настройки конфигурации на Axopatch 200B усилитель установлен в β = 0,1. Активация очень большие токи могут привести к клеткам избежать напряжения зажима. ASW решений заменить содержание солей (например, доля NaCl замещен непроницаемый N-метил-D-глюкамин хлорид), могут быть использованы для снижения целой клетки амплитуды тока.
- Наполненный боросиликатного пипетки патч натянул съемник пипетки и засыпаны наполовину внутриклеточного раствора (ICS), состоящий из 450 мМ KCl и других солей (см. таблицу 1) подходят, и должны иметь сопротивление примерно 0,5-1 МОм. Если выделение специфических ионных токов желательна, например, Na + токи при отсутствии тока K, K + в этом растворе могут быть заменены на другие ионы, такие как Cs +. Cl - замена ICS с impermeant анион также оправдано, если более естественный ICS желательна9.
- Клетки являются надежными с> 1 час длиной записи возможно при комнатной температуре. Запись оптимальной на 3 и 4 Протокола, соответствующие 24-48 ч в культуре. После 48 часов есть трудности формирования гигаом печатей, возможно, из-за разработки гликокаликсом на поверхности клетки, и пространство зажим проблемы, вызванные процессом вырост. Клетки являются полезными, однако, для не-патч зажим исследования, такие как токсикология, которые могут быть завершены в <14 г.
- ASW и другие решения для дозирования из раствора устройство самотеком, а также внутриклеточных решение, следует профильтровать через шприц монтажа 0,2 мкм Acrodisk фильтр (таблица 3), чтобы устранить мелкие частицы, которые препятствуют образованию уплотнение гигаом.
- Десенсибилизации происходит при использовании агонистов, таких как D-аспартат (D-Asp), поэтому ~ 1-2 мин между приложениями агонистов рекомендуется. И наоборот, усиление часто наблюдается при быстром повторяется примененийкатион агонисты, такие как L-глутамат (L-Glu).
- Агонисты активированного токи, такие как L-Glu могут быть изучены с применением агонистов с Picospritzer пипетки. Это пипеткой вытягивается таким же, как патч пипетки и содержит агонистов ASW. Когда кончик пипетки это располагается ниже выпускную трубку раствора устройство самотеком, а на угол 45 ° с выпускной трубкой (рис. 2F), агонист будет быстро смывается с клетки и десенсибилизации будет сведена к минимуму. Агонист пипетки должны создавать под углом 90 ° или более, по отношению к патч пипетки.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Места расположения сенсорных нейронов в ганглии, которые ориентированы в данном протоколе, КБС и ПВХ нейронов показаны на рисунке 1. BSC нейронов расположены в 2 симметричных овальных кластеров на брюшной стороне ротовой ганглий, поверхность, которая обращена от щечной массы в неповрежденной ганглиев (рис. 1А). ПВХ нейроны формируют двусторонние, V-формы кластеров, которые обертывают вокруг спинной поверхности плевральных ганглиев к центральной оси (рис. 1В). Эти сенсор...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Диссоциации описанные здесь методы получения сенсорных нейронов культур содержащие 50-100 изолированных нейронов перемежаются с небольшими числами глии и других неустановленных клеток. Наиболее важным шагом в протоколе являются время ганглии оставаться в растворе фермента, и щелкая, диссоциацию расщепленной кластеры клеток разбиваются на части кластера на отдельные клетки. Фермент пищеварение (шаг 1.8) должны быть оптимизированы на доступные температуре. При 23 ° С при медленном встряхивании 13 часов достаточно для пере...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Финансируемых NIH P40 OD010952, Korein Фонда, Университета Майами стипендий для SLC и Maytag стипендию ATK. Авторы выражают благодарность сотрудникам Национального Ресурс для Aplysia, а также Лорен Simonitis и Ханна Пек, который предоставил микрофотографии для фигуры.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Искусственная морская вода ASW | Sigma-Aldrich | ассорти | (мМ): 417 NaCl, 10 KCl, 10 CaCl2 (2 H2O), 5MgCl2 (6H2O), 15 HEPES-NaOH, pH 7,6 |
| Внутриклеточный раствор | Sigma | ассорти | (мМ): 450 KCl, 2,9 CaCl<суб>2 (2 H<суб>2O), 2,5 MgCl<суб>2 (6 H<суб>2O), 5 Na<суб>2АТФ, 10 EGTA и 40 HEPES-KOH, pH 7,4 |
| поли-D-лизин | Sigma | P6407 | |
| пенициллин/стрептомицин добавлен в ASW в 1:100 | Lonzo Walkersville, Inc. | 17-603E | 5 000 ЕД/мл пенициллин плюс 5 000 мг/мл стрептомицина |
| нейтральная диспаза II | Roche Diagnostics | 10165859001 | |
| гиалуронидаза | Sigma-Aldrich | H4272 | |
| коллагеназа типа XI | Sigma-Aldrich | C9407 | |
| L-глутамат (L-Glu) | Sigma-Aldrich | 49601-100G | |
| D-аспартат (D-ASP) | Sigma-Aldrich | 11200-10G | |
| N-метил-D-аспартат (NMDA) | Biomol | 100002-268 | |
| L-ASP | Sigma | A6683-25G | |
| альфа-амино-3-гидроксил-5-метил-4-изоксазол-пропионовая кислота (AMPA) | Sigma | A6816-5MG | |
| Антагонисты L-Glu R | различные | различные | |
| Агар | |||
| кинуренат | Сигма-Олдрич | 61250 | |
| APV | Sigma-Aldrich | A5282 | |
| DL-2-амино-5-фосфонопентановая кислота (антагонист NMDAR) | |||
| 2-пропанол | ВВРСП | BDH1133 | |
| Раствор хлора | Sigma | ассорти | 25 г FeCl3 + 25 мл концентрированный HCl + 50 мл H2O |
| Силикон 2-х компонентный полимер | World Precision Instruments (WPI) | SYL184 | Обеспечивает поверхность распиновки для небольших посудин для препарирования |
| микроскоп с 0-40-кратным увеличением для препарирования | Wild | ||
| Волоконно-оптический осветитель Techniquip 150 Вт | микрооптики Флориды | TQ FOI-150 | |
| RotoMix 50800 | |||
| Инвертированный фазово-контрастный микроскоп Nikon Diaphot с объективами 4x, 20x (опционально) и 40x | SR Research Ltd. | Eyelink II | |
| Цифровой осциллограф Tektronix | SR Research Ltd. | ||
| Программное обеспечение для сбора и анализа данных pClamp 10 | Molecular Devices | ||
| ПК с операционной системой Windows XP или выше | Решения | для ПК Thinkserver с твердотельными жесткими дисками (80 ГБ) и мониторами с низким уровнем шума | |
| Flaming/Brown P87 микропипетка | Sutter Instruments, Novato, CA | ||
| Axon Instruments Axopatch 200B зажимной усилитель с диапазоном компенсации емкости 1-1000 пФ; предусилитель | Molecular Devices, Sunnyvale, CA | ||
| Axon instruments электрододержатель в сборе для предусилителя Axopatch 200B | Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния | CV203BU | |
| Digidata 1200 Аналого-цифровой преобразователь | Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния | ||
| Picospritzer, работающий от N2, регулируемый по давлению и продолжительности | Parker Hannifin, Cleveland, OH | ||
| TMC Micro-G Виброизоляционный стол | Ametek | ||
| Фарадея | на заказ | ||
| пьезоэлектрические раскладушки, микроманипуляторы | Burleigh, инструменты; Thorlabs | в настоящее время PCS-5000; -6000 series + крепления | |
| Narishige M-152 ручные манипуляторы (для перфузионных систем и пикоспритцеров) | Narishige США | ||
| Стекло для пипетки с нитью, внешний диаметр 1,5 мм, внутренний диаметр 0,84 мм - | WPI | 1B150-3 | |
| Длина | |||
| Ag/AgCl полуклеточный | WPI | EP4 | |
| Центрифужные пробирки 15 мл, 35-2097 BD Falcon* Центрифужные пробирки | VWRSP | 21008-918 | |
| Угловые ножницы | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| Тонкие щипцы Dumostar | Fine Science Tools | 11295-00 | |
| Чашки для культуры тканей сокола 35 мм | VWRSP | 25382-064 | |
| Чашки для культивирования тканей falcon 150 x 25 мм; 1013 | VWRSP | 1013 | также могут быть изготовлены в небольшие чашки для препарирования с помощью sylgard |
| sylgard | WPI | SYL184 | |
| Лоток для вскрытия животных | различный | ||
| Центрифужные пробирки 15 мл, 35-2097 BD Falcon | VWRSP | 21008-918 | Для 6-литровой перфузионной системы с гравитационной подачей |
| Алюминиевые зажимы с винтовыми отверстиями на концах | хозяйственного магазина | Для перфузионной системы | |
| иглы 23 калибра (вручную подпиливайте точки) | VWRSP | Для перфузионной системы | |
| Полиэтиленовая трубка 0,022"ID x 0,042"OD; 427411 | Becton-Dickinson | Для перфузионная система | |
| H-7 подставка/держатель для пипетки microcap perfusion array | Narishige США | Для перфузионной системы | |
| односторонние клапаны | Для перфузионной системы | ||
| Drummond Microcaps 1 μ l | VWRSP | Для перфузионной системы | |
| иглы 18 калибра для отсасывания (подпиленные точки) | |||
| Полиэтиленовая трубка | Cole Parmer | 4.27436E+11 | |
| штифты для тонкого препарирования | Fine Science Tools | 26002-20 | |
| капиллярные трубки | Kimble 71900-100 | отполированные огнем и-образные в пламени горелки Бунзена и заполненные 3% агаром в | |
| лепки из пластилина | |||
| держатель чашки для предметного столика с изолированной ванной | |||
| на заказ пастеровские пипетки | VWRSP | 14672-412 | |
| лампы для пипеток | VWRSP | 53283-911 | |
| акродисковые шприцевые фильтры | VWRSP | 28144-040 | |
| толстостенное боросиликатное стекло диаметром 1,5 мм | WPI | 1B150F-3 | |
| Баллон с азотом высокой чистоты и разветвляющий регулятор | |||
Tables 1-3. Перечни реактивов, материалов и оборудования. |
Ссылки
- Buttner, N., Siegelbaum, S. A. Antagonistic modulation of a hyperpolarization-activated Cl(-) current in Aplysia sensory neurons by SCP(B) and FMRFamide. J. Neurophysiol. 90 (2), 586-598 (2003).
- Byrne, J. H., Castellucci, V. F., Kandel, E. R. Contribution of individual mechanoreceptor sensory neurons to defensive gill-withdrawal reflex in Aplysia. J. Neurophysiol. 41 (2), 418-431 (1978).
- Carlson, S. L., Fieber, L. A. Physiological evidence that D-Aspartate activates a current distinct from ionotropic glutamate receptor currents in Aplysia californica. J. Neurophysiol. 106 (4), 1629-1636 (2011).
- Carlson, S. L., Kempsell, A. T., Fieber, L. A. Pharmacological evidence that D-Aspartate activates a current distinct from ionotropic glutamate receptor currents in Aplysia californica. Br. Behav. 2 (4), 391-401 (2012).
- Fieber, L. A. Characterization of Na+ and Ca2+ currents in bag cells of sexually immature Aplysia californica. J. Exp. Biol. 201 (5), 745-754 (1998).
- Fieber, L. .A., Carlson, S. L., Capo, T. R., Schmale, M. C. Changes in D-Aspartate ion currents in the Aplysia nervous system with aging. Br. Res. 1343, 28-36 (2010).
- Glansman, D. L. Habituation in Aplysia: The Cheshire Cat of neurobiology. Neurobiol. Learn. Mem. 92, 147-154 (2009).
- Hawkins, R. D., Abrams, T. W., Carew, T. J., Kandel, E. R. A Cellular Mechanism of Classical Conditioning in Aplysia: Activity-Dependent Amplification of Presynaptic Facilitation. Science, New. 219 (4583), 400-405 (1983).
- Ichinose, M., Sawada, M., Maeno, T., McAdoo, D. J. Effect of acetylcholine on ventrocaudal sensory neurons in the pleural ganglia of Aplysia. Cell Mol. Neurobiol. 9, 233-245 (1989).
- Kandel, E. R. Cellular basis of behavior. , W.H. Freeman. New York. (1976).
- Kandel, E. R. The molecular biology of memory storage: a dialog between nerves and synapses. Science. 294 (5544), 1030-1038 (2001).
- Kupfermann, I., Castellucci, V., Pinsker, H., Kandel, E. Neuronal correlates of habituation and habituation of the gill-withdrawal reflex in Aplysia. Science. 167 (3926), 1743-1745 (1970).
- Magoski, N. S. Regulation of an Aplysia bag-cell neuron cation channel by closely associated protein kinase A and a protein phosphatase. J. Neurosci. 24 (30), 6833-6841 (2004).
- R, E. Neuronal transcriptome of Aplysia: neuronal compartments and circuitry. Cell. 127, 1453-1467 (2006).
- Nick, T. A., Kaczmarek, L. K., Carew, T. J. Ionic currents underlying developmental regulation of repetitive firing in Aplysia bag cell neurons. J. Neurosci. 16 (23), 7583-7598 (1996).
- Single-channel recording. Sakmann, B., Neher, E. , Plenum Press. NY. (1995).
- Tam, A. K., Geiger, J. E., Hung, A. Y., Groten, C. J., Magoski, N. S. Persistent Ca2+ current contributes to a prolonged depolarization in Aplysia bag cell neurons. J. Neurophysiol. 102 (6), 3753-3765 (2009).
- Schacher, S., Proshansky, E. Neurite regeneration by Aplysia neurons in dissociated cell culture: modulation by Aplysia hemolymph and the presence of the initial axonal segment. J. Neurosci. 3 (12), 2403-2413 (1983).
- Walters, E. T., Byrne, J. H., Carew, T. J., Kandel, E. R. Mechanoafferent neurons innervating tail of Aplysia. I. Response properties and synaptic connections. J. Neurophysiol. 50 (6), 1522-1542 (1983).
- Wilson, G. F., Richardson, F. C., Fisher, T. E., Olivera, B. M., Kaczmarek, L. K. Identification and characterization of a Ca(2+)-sensitive nonspecific cation channel underlying prolonged repetitive firing in Aplysia neurons. J. Neurosci. 16 (11), 3661-3671 (1996).
- White, B. H., Nick, T. A., Carew, T. J., Kaczmarek, L. K. Protein kinase C regulates a vesicular class of calcium channels in the bag cell neurons of Aplysia. J. Neurophysiol. 80 (5), 2514-2520 (1998).
- Wilson, G. F., Magoski, N. S., Kaczmarek, L. K. Modulation of a calcium-sensitive nonspecific cation channel by closely associated protein kinase and phosphatase activities. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95 (18), 10938-10943 (1998).
- Zhao, Y., Wang, D. O., Martin, K. C. Preparation of Aplysia sensory-motor neuronal cell cultures. J. Vis. Exp. (28), e1355(2009).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
