Все более широкое использование данио в качестве животной модели требует разработки эффективных методов для доставки известных количеств соединений и решений. Желудочный зонд описанной ниже процедуры позволяет пероральной доставки точной объемы раствора надежно, безопасно и эффективно для взрослых данио.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Gavaging взрослых данио рерио
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Данио стала важной в естественных условиях модель в биомедицинских исследованиях. Эффективные методы должны быть разработаны и использованы для доставки соединений или агентов в растворах для научных исследований. Современные методы введения соединений устно взрослых данио являются неточными из-за изменчивости добровольное потребление рыбы. Зонда была разработана процедура обеспечивает точное количество инфекционных агентов данио для исследования в биомедицинских исследованиях. Взрослых данио в течение 6-месячного возраста анестезировали 150 мг / л буфера MS-222 и которым вводили 5 мкл раствора с использованием гибких труб имплантации катетера прикреплен к сокращению 22-G иглы. Гибкий шланг был опущен в полости рта данио до кончика трубки продлил мимо жабры (около 1 см). Затем раствор медленно вводят в желудочно-кишечном тракте. Этот метод был эффективным 88% времени, с рыбой восстановления без осложнений. ЭтоПроцедура также эффективна, как один человек может зондовым 20-30 рыб в течение одного часа. Этот метод может использоваться, чтобы точно управлять средств по поводу инфекционных заболеваний исследования или исследования других соединений в взрослых данио.
Введение
Современные методы введения соединений устно данио включают введение соединений верхним покрытием на корм, смешанный в желатиновые диеты 1, bioencapsulated в артемии 2, смешанные с липидной инкапсулированные диет 3, воск спрей бисера 4 и через клейковины на основе диеты. 5 Ограничения этих методов перорального введения включают высокие темпы выщелачивания и неполным или непредсказуемые соединения потребления отдельных рыб. Эти переменные являются проблематичным, поскольку в исследованиях инфекционных болезней, зная, инфекционная доза вводится рыба может иметь решающее значение для успеха исследования. Кроме того, предыдущие исследования показали, что некоторые соединения вводят в воду ванны вызывают токсическое поражение для рыбок данио жабры перед кишечных эффектов, которые могут находиться под исследование произойти. 6
Зонд является стандартным методом, используемым в других видах лабораторных животных для администрирования точное количество продукта с АКNown концентрации для исследования в биомедицинских и фармацевтических исследований. Лишь недавно методы gavaging данио были описаны в литературе. Один из методов, описанных в двух человек методом с использованием 24-G оболочка катетера прикреплен к 2-20 мкл пипеткой доставить 5 мкл раствора. 7 Метод, описанный была смертность от 8,7% и 39% на первом и втором судебного разбирательства, соответственно, большая часть смертности объясняется беременных самок. Второй зонд использовали методику, описанную тупым наконечником зонда шприцы для введения 5 мкл решение medakas (Oryzias latipes). 8 Информация на смертность не была предоставлена и точный процесс выполнения зонд не был описан. По данным Канадского совета по уходу за животными и данио рерио лаборатории, до 1% от массы тела рыбы можно вводить через зонд. 9,10 Нашей целью была разработка повторяемой, безопасным и эффективным способом доставки точные объемы COMфунтов устно взрослых данио обоих полов и на всех стадиях воспроизводства. Эта процедура будет применяться для любого исследование, в котором точные перорального введения соединения не требуется.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка раствора анестетика
- Готовят раствор 150 мг / л MS-222 в системе вода либо из исходного раствора, или из порошкообразной форме.
- Убедитесь, что рН с использованием рН-метра.
- Буфер с бикарбонатом натрия мере необходимости, пока значение рН не находится в пределах 7-7,5.
- Подготовьте бачок системы воды, не содержащей MS-222 для рыбы, чтобы восстановить дюйма время восстановления, как правило, менее 1 мин.
2. Подготовка зонда аппарата
- Вырезать ясно 22-G имплантации трубки к немного больше, чем приблизительная длина от устья до кишечной лампы рыбы. Первоначально, мы предлагаем обезболивающим одна рыба для каждой новой группы используются, чтобы получить лучшие оценки необходимой длины.
- Нажмите разреза прозрачной трубки имплантации на ½-дюймовой 22-G иглы, пока она не является безопасной и нет риска отсоединения. Если ½ 22-C иглы не доступна, вырезать больше иглы приложенияroximately, что длины.
- После завершения трубки катетера имплантации должна распространяться около 1 см от кончика иглы, или короче, если рыба меньше.
- Прикрепите 22-G иглы в 1-мл шприц luerlok.
3. Подготовка к зонд
- Вырезать канавку в губку с лезвием скальпеля.
- Замочите губки в системе вода свободна от MS-222.
- Поместите увлажненной губкой на плоской поверхности.
- Разработать соответствующие 5 мкл раствора для затравки в 22-G трубки катетера и 1-мл шприц.
4. Анестезия и зонд
- Быстрый рыбу по крайней мере 24 часа до процедуры.
- Поместите рыбу в MS-222 решение, пока она не теряет свой рефлекс, и не реагирует на щепотку хвостовым плавником, но сохраняет оперкулярной движения. Обычно на это уходит около 2-3 мин.
- Снимите рыбу из раствора анестетика и поместите его вканавка в губке с головой слегка выступающие из губки, но жабры покрыты губкой.
- Перемещение губку в вертикальном положении.
- Откройте рот рыбок данио, используя 22-G трубки катетера.
- Аккуратно вставьте трубку, пока наконечник не пройдет за жабры (примерно 1 см или длины трубки). Имплантации трубки не нужно быть принудительным. Сопротивление предлагает трубка может быть удар жаберных арки или сердце.
- Если есть сопротивление, аккуратно снять, переместить и повторите попытку.
- Введите материала медленно.
- В то время как инъекционных, убедитесь, что решение не выходить через жабры или рот.
- Снимите рыбу из губки и место в бак утилизации.
- Восстановление обычно происходит менее чем за 1 мин и указывает, что рыба плавала в вертикальном положении и поддержания равновесия.
- Монитор для рыбы срыгивание, как показано посредством визуализации рыбы активно изгнания мaterial от ее устья, или вообще не оперкулярной движения.
- Рыба может быть возвращен к своей обычной бак, как только они восстановлены.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Оба пола рыб, в том числе беременные самки были успешно через желудочный зонд (рис. 1). Успешная процедура занимает менее одной минуты, не видел выхода жидкости жабры или рот. Трубка входит легко, без силы, без крови видели на удалении катетера. Процедура быстрого, требующий примерно 10 мин с зондовым от 3 до 4 рыбы, в среднем 30-45 сек на рыбу.
Данио рерио не должны через желудочный зонд с более чем 5 мкл любое решение. Через зонд 10 мкл решений привел лишь 50% успеха
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Значение
Этот метод улучшения и обеспечивает несколько преимуществ по сравнению с двумя ранее описанных методов gavaging взрослых данио. Во-первых, использование губки сдерживать рыбы позволяет одному человеку для выполнения процедуры, в отличие от описанных ранее метод, требующий двух человек. 7 Во-вторых, трубки катетера имплантации является более гибким, чем катетеры, которые могут помочь минимизировать вторичные травмы из-за перфорации по аналогии с использованием тупым наконечни...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Университет Рокфеллера Сравнительный Bioscience Центр оказал поддержку этому проекту. Мы благодарим Janelle Monnas за техническую помощь.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Equipment | |||
| A sponge | |||
| 1-cc luer lock шприц | Becton Dickinson Co | ||
| 22-G Micro-Renathane Implantation Tubeing (cut) | Braintree Scientific, Inc. | ||
| 1 игла 22-G (резать, если нужно) | Becton Dickinson Co | ||
| pH-метр | Зонд Ханна 1 | ||
| лезвие | |||
| [header] | |||
| Reagent/Material | |||
| MS-222 (Finquel) | Argent Laboratories | ||
Ссылки
- Royes, J. -A. B., Chapman, F. Preparing Your Own Fish Feeds. , Department of Fisheries and Aquatic Sciences, Florida Cooperative Extension Service, Insitute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. (2009).
- Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. Standardization of the bioencapsulation of enrofloxacin and oxytetracycline in Artemia fransciscana Kellogg. Aquaculture. 196, 1-12 (1906).
- Langdon, C. Microparticle types for delivering nutrients to marine fish larvae. Aquaculture. 227, 259-275 (2003).
- Langdon, C., Nordgreen, A., Hawkyard, M., Hamre, K. Evaluation of wax spray beads for delivery of low-molecular weight, water soluble nutrients and antibiotics to Artemia. Aquaculture. 284, 151-158 (2008).
- Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. A Novel Protocol for the Oral Administration of Test Chemicals to Adult Zebrafish. Zebrafish. 8, 203-210 (2011).
- Goldsmith, J. R., Jobin, C. Think Small: Zebrafish as a Model System of Human pathology. Journal of Biomedicine and Biotechnology. , (2012).
- Tysnes, K. R., Jorgensen, A., Poppe, T., Midtlyng, P. J., Robertson, L. J. Preliminary expermients on use of zebrafish as a laboratory model for Giardia duodenalis infection. Acta Parasitologica. 57, 1-6 (2012).
- Marie, B., Huet, H., et al. Effects of a toxic cyanobacterial bloom (Planktothris agardhii) on fish: Insights from histopathological and quantitative proteomic assessments following the oral exposure of medaka fish (Oryzias latipes). Aquatic Toxicology. 114-115, 39-48 (2012).
- Canadian Council on Animal Care. CCAC guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing. , CCAC. Ottawa, Ontario, Canada. (2005).
- Harper, C., Lawrence, C. The Laboratory Zebrafish. , CRC Press. Boca Raton, Florida, USA. (2011).
- De Tolla, L. J., Srinivas, S., et al. Guidelines for the Care and Use of Fish in Research. ILAR Journal. 37 (4), (1995).
- Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia. Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).
- Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish. Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
