Опишем аналитический метод оценки срока службы глутамата астроцитов в мембранах из электрофизиологических записей глутамата токи транспортера в астроциты.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Выводя на динамику Глутамат зазор Деконволюция Анализ астроцитов Токи Transporter
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Высокая плотность транспортеры глутамата в мозге находится в астроциты. Глутамат пару транспортеры движение глутамата через мембрану при содействии транспортировки 3 Na + и 1 H + и противоположно направленного транспорта 1 К +. Стехиометрического ток, генерируемый транспортного процесса можно контролировать с цельноклеточная патч-зажим записи из астроцитов. Временной ход записан текущий формируется временной ход глутамата профиль концентрации в котором астроциты подвергаются, кинетика глутамата транспортеры, и пассивный электротоническим свойства астроцитов мембран. Здесь мы описываем экспериментальных и аналитических методов, которые могут быть использованы для записи глутамата токи транспортера в астроцитах и изолировать временной ход глутамата зазор от всех других факторов, которые определяют форму волны тока астроцитов транспортер. Методы, описанные здесь, могут быть использованы для оценки времени жизни оF-вспышкой и Uncaged синаптически выпустили глутамата на мембранах астроцитов в любом регионе центральной нервной системы во время здоровья и болезни.
Введение
Астроциты являются одним из наиболее распространенных типов клеток в мозге со звездообразной морфологии и мелкие выступы мембраны, которая распространяется на всю нейропилей и достичь 1,2 соседних синаптических контактов. Клеточной мембраны астроцитов 'плотно заполнена молекулы глутамата Перевозчик 3. В физиологических условиях глутамата транспортеры быстро связывать глутамат на внеклеточный стороне мембраны и передавать ее в цитоплазме клетки. Поступая таким образом, транспортеры поддерживать низкие базальные концентрации глутамата во внеклеточном пространстве 4. Глутамат транспортеры в хорошую астроцитов процессов, прилегающих к возбуждающих синапсов идеально расположены для связывания глутамата выделяется при синаптических событий, как это диффундирует из синаптической щели. Поступая таким образом, транспортеры глутамата также ограничить побочные к пери-и экстра-синаптических регионах и на соседние синапсы, уменьшая пространственное распространение возбуждающего сигналасек в мозге 5-7.
Глутамат транспорт электрогенных процесс стехиометрически сочетании с движением 3 Na + и 1 H + вдоль их электрохимического градиента и противоположно направленного транспорта 1 К + 8. Глутамат транспорта связан с (но не стехиометрическом соединены с) анионные проводимости проницаемой для SCN - (тиоцианатом)> NO 3 - (нитрат) ≈ ClO 4 - (перхлораты)> I -> Br -> Cl -> F -, а не СН 3 SO 3 - (метансульфоната) и C 6 H 11 O 7 - (глюконат) 9-11. Оба токов (стехиометрические и нестехиометрическое) могут быть записаны путем получения цельноклеточная патч-зажим записи из астроцитов, визуально, выявленных в рамках Dodt освещения или инфракрасных дифференциального интерференционного контраста (IR-DIC) в acutэлектронной срезах мозга 12. Стехиометрического составляющей тока, связанных с глутаматом транспорт через мембрану может быть выделен с помощью CH 3 SO 3 - или С 6 Н 11 О 7 - на основе внутриклеточных растворов и может быть вызвано с помощью флэш-uncaging глутамата на астроциты 13,14, или путем активации высвобождение глутамата из соседних синапсов, либо электрическим, 12 или с целевой контроль optogenetic.
Временной ход стехиометрического компонент транспортер ток имеет форму временем жизни глутамата профиль концентрации при астроцитов мембраны (например, глутамат зазор), кинетика глутамата транспортеры, пассивный свойства мембраны астроцитов, а в синаптической стимуляции, к синхронность высвобождение глутамата через активированный синапсы 13. Здесь мы опишем во всех деталях: (1) экспериментальная провертренере, чтобы изолировать стехиометрического компонентом глутамат токов транспортер с цельноклеточной патч-зажим записи из астроцитов использованием острого мышь срезах гиппокампа в качестве примера экспериментального препарата, (2) аналитический метод для получения временной ход глутамата очистка от этих записей 13, 14. Эти методы могут быть использованы для записи и анализа глутамата токов транспортер из астроцитов в любой области центральной нервной системы.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка Slice
- Подготовьте 500 мл нарезки / хранения раствора, содержащего (в мм): 119 NaCl, 2,5 KCl, 0,5 CaCl 2, 1,3 MgSO 4 · 7H 2 O, 4 MgCl 2, 26,2 NaHCO 3, 1 NaH 2 PO 4, 22 и глюкозы, 320 мОсм, рН 7,4
- Используйте 250 мл стакан подготовить камеру для погружения ломтиками, залейте его 200 мл нарезки / решение для хранения данных, согрейте его в водяной бане при 34 ° С и пузырь его с 95% O 2, 5% СО 2.
- Держите оставшуюся нарезки / решение для хранения данных в стеклянной бутылке при 4 ° C.
- Используйте цианакрилатный клей для прикрепления небольшой блок агара (6%, подготовленный в ACSF) на Vibratome держатель образца и хранить его при температуре 4 ° C.
- 30 мин до начала нарезки, поместите стеклянную бутылку, содержащую нарезки / решение для хранения данных в ведро со льдом и пузырь его с 95% O 2, 5% СО 2.
Примечание: скорость и точность имеют первостепенное значение для вскрытия действия, описанные ниже.
- Обезболить мышь (P14-21, C57BL / 6) галотаном / ИФ (ИФ, как сообщается, повышения астроцитов поглощение глутамата 15), обезглавить его, и опустите голову в 50 мл стакан, содержащий кислородом, холодные нарезки / решение для хранения данных.
- Выполните рассечения мозга на лед завернутый с бумажными полотенцами и хранили при -20 ° С.
- Используйте скальпель, чтобы сделать середине сагиттальной разрез кожи на спинной стороне головы, от фронтальной до хвостового конца, и подвергать черепа.
- Поместите нижнюю сдвига лезвия небольшого пара хирургических ножниц в затылочной отверстие и сделать два разреза в направлении слева и справа (угол 45 °).
- Разрежьте черепа по средней сагиттальной линии от хвостового к передним концом.
- Снимите мозга с помощью шпателя и опустите ее в кислороде, холодные нарезки / хранение решенидалее.
- С помощью скальпеля, сделать пять сокращений: (1) Снимите обонятельных луковиц и лобной коре, (2) удалить мозжечка; (3) снимите левый и (4) правой височной доли, (5) разделения двух полушарий мозга с середины сагиттального разреза.
- Приложите две части головного мозга с бумажными полотенцами, чтобы удалить излишки раствора.
- Клей боковой поверхности каждой секции мозга к холодной плите Vibratome: спинной стороне головного мозга должна быть обращена Vibratome лезвия; вентральной стороне мозга должны быть в контакте с агар блока, вдали от Vibratome лезвия.
Примечание: для получения высококачественных ломтиками, важно, чтобы эти две части головного мозга прочно приклеен к Vibratome основанием. Чтобы сделать это, используйте цианакрилатный клей, который не слишком жидким, и что не высыхает слишком быстро. - Закрепите Vibratome плите в анатомическом театре камеры, установить срез йickness до 250 мкм и регулировки ширины лопасти перспективе. Продолжайте нарезки.
Примечание: если все ориентировано правильно, Vibratome следует резки ломтиками парасагиттальной из спинной к вентральной и с медиальной стороны боковой поверхности мозга. - Когда лезвие прошел через кору и гиппокамп, использовать скальпель, чтобы вырезать кора / гиппокампа из мозга и поместить каждую часть в погружении камере при 34 ° С.
- Откажитесь от первой пары ломтиков. Как правило, 12 ломтиков (250 мкм), могут быть получены из P14-21 мозга мыши.
- Держите ломтиками при 34 ° С в течение 30 мин и дайте им остыть до комнатной температуры в течение 30 минут, прежде чем использовать их для записи электрофизиологии.
2. Astrocyte идентификации и записи
- Подготовят внутренний раствор, содержащий (в мм): 120 KCH 3 SO 3, 10 ЭГТА, 20 HEPES, 2 MgATP, 0,2 NaGTP,5 QX-314Br и 5 NaCl, 290 мОсм, рН 7,2.
- Подготовка внеклеточной решение для записи, содержащему (в мМ): 119 NaCl, 2,5 KCl, CaCl 2, 2,5, 1,3 MgSO 4 · 7H 2 O, 1 MgCl2, 26,2 NaHCO 3, 1 NaHPO 4 и 22 глюкозу, 300 мОсм, рН 7,4 , насыщенный 95% O 2, 5% СО 2.
- Добавить следующие препараты с внеклеточной решение для записи, чтобы блокировать активацию GluA, Glun, mGluRII, mGluRIII, ГАМК, GABA B, и A1 аденозиновых рецепторов (в мкМ): 10 2,3-диоксо-6-нитро-1 2,3,4-тетрагидро-бензо [ƒ] хиноксалин-7-сульфонамида динатриевой соли (NBQX), 10 (RS) -3 - (2-carboxypiperazin-4-ил) пропил-1-фосфоновой кислоты (CPP), (2S )-2-амино-2-[(1S, 2S)-2-carboxycycloprop-1-ил] -3 - (Ксанте-9-ил) пропановой кислоты динатриевой соли (LY341495), 100 (R, S)-α- methylserine-O-фосфат (MSOP), 100 пикротоксином, 5 3 - [[(3,4-дихлорфенил) метил] амино] пропил] диэтоксиметил) фосфиновой кислоты (CGP52432), 18-циклопентил-1 ,3-dipropylxanthine (DPCPX).
- Установка температуры внеклеточного раствора в записи камеры; типичных температурах между 34 - 36 ° С.
- Подготовьте патч-зажим электродов из боросиликатного стекла капилляров (R ≈ 2,5 МОм), используя двухступенчатый, стекло микропипетки съемник.
- Возьмите одну из ломтиками и поместить его в записи камеры. Удерживайте ее с металлической арфы сделаны с платиновой проволокой и нейлоновыми струнами.
- Осмотрите ломтиками под Dodt освещения или ИК-DIC. Астроциты могут быть идентифицированы по их маленького тела клетки (Ø = 10 мкм) и видный ядра (рис. 1).
- Для синаптической стимуляции, поместите сталь нержавеющая биполярного электрода, ~ 100 мкм от астроцитов, которые вы планируете, чтобы исправить.
- Патч астроцитов и перерыв в цельноклеточная конфигурации, применяя очень нежное всасывание.
Примечание: астроциты как правило, имеют низкий входной Resistancе (~ 10 МОм), гиперполяризованного мембранного потенциала покоя (~ -90 мВ), и никакой стрельбы активности. Астроциты хранятся на его мембранный потенциал покоя в течение экспериментов в фиксации потенциала режиме (т.е. ток удержания должен показывать 0 Па). Перед каждым стимуляции, 10 мс гиперполяризующих напряжение шаг (-3 мВ) используется для контроля серии и входное сопротивление астроцитов. - Отменить записи если ряд изменений сопротивления> 20% или если мембранный потенциал астроцитов деполяризуется. Мембранный потенциал астроцитов могут быть непосредственно измерены путем перехода от напряжения зажим для текущего зажим режиме. Кроме того, в то время как в фиксации потенциала режиме мембранный потенциал можно контролировать путем считывания значения потенциала удерживания, что приводит к 0 Па удерживающего тока.
- Если синаптической стимуляции используются, альтернативные одиночные и парные стимулы (например, 100 мс друг от друга), каждые 10 - 20 сек.
- Для УФ-фотолиза ЭксперимEnts, подключите uncaging лампы Хе эпифлуоресцентной порт микроскопа и добавить в клетке соединения с внеклеточной решение. Transporter токи амплитудой ~ 100 ра может быть получена, когда флэш-uncaging 100 мкМ MNI-L-глутамата в целом поле зрения (Ø = 662,5 мкм при использовании объектив 40Х 14). Альтернативные стимуляции светом пути открыты и заблокированы, каждые 10 - 20 сек.
- Вызывают глутамата и переходных токов записи транспортера в контрольных условиях и в присутствии суб-насыщающей концентрации широкого спектра действия глутамата транспортер антагонист D, L-трео-β-Benzyloxyaspartic кислоты (TBOA; 10 мкМ), чтобы уменьшить амплитуду тока транспортер по крайней мере, 30% от его контрольной величины (см. разделы 4, 5), или в присутствии высокой концентрации TBOA (50 - 100 мкМ), чтобы блокировать транспортер токов полностью изолировать и устойчивого К +-тока (см. раздел 3) .
3. Pharmacгические Выделение Устойчивый К + тока
- Запись астроцитов токов в контрольных условиях и в присутствии высокой, насыщающей концентрацией TBOA (50 - 100 мкМ).
- Средний по крайней мере 20 разверток в TBOA (50 - 100 мкМ).
- Fit усредненный следы, полученные в 3.2 с функцией:
Примечание: TBOA регистра компонент (то есть тот, который записан в присутствии TBOA (50 - 100 мкМ)) представляет собой устойчивый К +-ток. Его время, конечно аппроксимируется моно-экспоненциальной функции описанных выше. - Повторите этот нужным различных астроцитов и получают среднее значение ростом Τ (т.е. среднее время нарастания устойчивого К +-тока (см. раздел 5)).
4. Яsolation облегченного Часть синаптически-активированный Токи Transporter (fSTCs)
- Средний по крайней мере 20 разверток получены с парными стимуляции, в контрольных условиях и в TBOA (10 мкМ) (левый рисунок 2а).
- Средний одинаковое число итераций, полученные с одного стимуляции, в контрольных условиях и в TBOA (10 мкм) (рис. 2, в центре).
- Сравнение амплитуды среднего тока ответ на -3 шаговое напряжение мВ в четырех усредненных следы (контроль одного импульса, контроль парные импульсы, TBOA одного импульса, TBOA парных импульсов).
- Если амплитуда текущий ответ одинаково во всех четырех графиков, перейдите к шагу 4.7.
- Если амплитуда средний ток ответ отличается в любом из четырех следов убедитесь, что все отдельные следы были соответствующими должны быть включены в среднем.
- Если амплитуда среднего тока отличается в любом из четырех следов, но всеиндивидуальных следов подходящие для включения в среднем проверить, что в каждой трассы размер FSTC масштабируется линейно с размером текущий ответ на этапе испытательного напряжения. Если это так, то масштабировать все следы по отношению друг к другу так, что ток в ответ на этапе испытательного напряжения равны по амплитуде.
Примечание: В записи условий, описанных здесь (т.е. внутриклеточные CH 3 SO 3 - или C 6 H 11 O 7 -), синаптической стимуляции возбуждающих аксоны генерировать астроцитов токов с сложной формы, состоящий из быстрого роста переходных внутрь стехиометрического тока и медленного -рост, устойчивый внутренний K +-отражающие текущие K + переуравновешивания во внеклеточном пространстве после распространения потенциала действия вдоль соседних аксонов. Очень важно, чтобы удалить этот устойчивый K +-ток, как и любой остаточный ток приведет кпереоценить глутамата жизни. - Вычтите среднем следа, полученные с одного раздражения от среднего следа получены с парными стимуляции (справа рис. 2а). На этом этапе можно изолирующий стехиометрического и устойчивого К +-ток, вызванный второго стимула.
- Сдвиг среднего следа, полученных с одного стимуляции промежутком времени, который соответствует между импульсом интервал, используемый для доставки парных импульсов (например, 100 мс) (рис. 2б).
- Вычесть со сдвигом во времени среднее ответом, полученным с одним стимуляции от среднего ответ на второй стимул, полученный в 4,7 (рис. 2в). Этот шаг изолирует способствовало части транспортера текущего вызванные второй стимул (FSTC).
- В большинстве случаев на предыдущем шаге удаляется полностью устойчивым К +-ток. Если это так, то выделение FSTC завершена, и вы можете процедурред с деконволюции анализа и получения временной ход глутамата зазор из астроцитов. В некоторых случаях, однако, небольшие устойчивого К +-ток все еще присутствует (фиг. 2d) и дальнейший анализ не требуется (см. раздел 5).
Примечание помнить, что анализ, описанный в 4.7-4.10 должны быть выполнены в среднем следов, полученных в контрольных условиях и в TBOA (10 мкМ).
5. Вычитание остаточной zdustained K +-ток от fSTCs
- Измерение амплитуды устойчивого К +-ток оставшихся после выполнения анализа, описанного в разделе 4.
- Масштабирование амплитуды моно-экспоненциальной функции описаны в 3,3 к амплитуде остаточного устойчивого К +-ток, измеренный в 5,1 (рис. 2d левой и средней). Для этого в уравнении 3.3, установите срок равна амплитуда устойчивого К + тока мнеasured в 5,1 и срок ростом Τ равна среднему значению Τ рост оценивается в 3,4.
- Вычтите полученное моно-экспоненциальной функции от FSTC и устойчивые K +-ток, полученный в 4.10 (рис. 2d справа). Этот шаг завершает изоляцию FSTC.
6. Выделение флэш-активированной Токи Transporter (FTCs)
- Средний по крайней мере 20 разверток, полученных с оптического пути открыты, в контрольных условиях и в TBOA (10 мкМ).
- Средний одинаковое число итераций, полученных с оптического пути закрыты, в контрольных условиях и в TBOA (10 мкМ).
- Сравнение амплитуды тока ответ на -3 шаговое напряжение мВ в четырех усредненных следы (контроль одного импульса, контроль парные импульсы, TBOA одного импульса, TBOA парных импульсов).
- Если амплитуда текущий ответ одинаково во всех четырех графиков, перейдите к шагу 6.7.
- Если амплитуда средний ток ответ отличается в любом из четырех следов убедитесь, что все отдельные следы были соответствующими должны быть включены в среднем.
- Если амплитуда среднего тока отличается в любом из четырех следов, но все отдельные следы являются подходящими для включения в среднем проверить, что в каждой трассы с пути света открыть размера FTC масштабируется линейно с размером текущий ответ на шаг испытательного напряжения. Если это так, то масштабировать все следы по отношению друг к другу так, что ток в ответ на этапе испытательного напряжения равны по амплитуде.
Примечание: в записи условий, описанных здесь (т.е. внутриклеточные CH 3 SO 3 - или C 6 H 11 O 7 -), флэш-раздражители генерировать токи астроцитов, состоящие только из быстрого роста переходных стехиометрического входящего тока. - Вычтите среднем след получены со светом погладитьч заблокирован от среднего следов, полученных с оптического пути открыты. Этот шаг позволяет удалить артефакт стимула и выделение FTCs.
Примечание: анализ, описанный в 6,7 должны быть выполнены в среднем следов, полученных в контрольных условиях и в TBOA (10 мкМ).
7. Деконволюция анализа
- Установите Transporter ток (FSTC или FTC), записанные в контрольных условиях (рис. 3, слева) и в TBOA (10 мкм) (правый рисунок 3а) и выделяли, как описано в разделах 4 - 6, с мульти-экспоненциальной функции:
- Создать функцию мгновенного роста, распадающаяся моно-экспоненциально в соответствии с функцией:
икоторая лучше всего описывает распадающейся фазе Transporter текущего записан в TBOA (10 мкм) (рис. 3б).
Примечание: функция, описанная в 7.2 (т.е. H (т)) представляет собой время, конечно глутамата зазор из астроцитов в присутствии TBOA (10 мкМ). - Деконволюции моно-экспоненциальная функция, полученная в 7,2 (рис. 3б и 3в середине) из фита транспортера текущего записан в TBOA (10 мкм), полученный в 7,1 (рис. 3, справа, С слева).
Примечание: деконволюцией это математическая операция, включены во многие программное обеспечение для анализа пакетов, таких как (например, Matlab, Python). В IgorPro, программный код, который мы обычно используем для выполнения этого вида анализа, деконволюции операция может быть эффективно вычислено, как описано ниже, с использованием быстрого дискретного преобразования Фурье. Во-первых, с помощью операции БПФ для вычисления диscrete быстрого преобразования Фурье с моно-экспоненциальной функции, полученные в 7.2 и в приступе Transporter текущего записан в TBOA полученные в 7.1. Затем с помощью операции IFFT для вычисления обратного быстрого дискретного преобразования Фурье отношение двух функций FFT. В результате функции I (т) может быть описан следующим образом:
Стадии, описанной в 7,3 позволяет выводе фильтр транспортера тока в TBOA (10 мкМ) (рис. 3c справа). Фильтр представляет искажающих факторов, которые превращают жизнь глутамата на мембранах астроцитов в текущем Transporter изолированы в разделах 4 - 6 (т.е. FSTC или FTC). - Деконволюции фильтра (рис. 3в право, Фигурное 3D середине) из фита транспортера тока в контрольных условиях (рис. 3, слева, рис 3d слева).
Примечание: Этот шаг позволяет выводе временной ход оформления глутамата из астроцитов в контрольных условиях (рис. 3 справа). Предположения, лежащие в основе этого деконволюцией шагом является то, что временной профиль фильтра остается неизменной в контрольных условиях и в TBOA (10 мкм). - Для получения количественной оценки общего хода времени глутамата оформление, расчет центра тяжести (Ф) колебательного сигнала, полученного на стадии 7.4. Это делается путем расчета Ф как:
где G (T) сигнала, полученного на стадии 7.1. В уравнении описано выше, термин т соответствует времени, в течение которого окно интеграл вычисляется.
Обратите внимание: когда этот метод был впервые создан,Ф рассчитывали с течением времени окна, которые остались неограниченной 13. Этот подход может быть использован при условии, интеграция окна устанавливается быть шире, чем продолжительность глутамата оформления и распады оформление сигнала полностью возвращалась к базовому уровню. Если это не так, однако, этот метод оценки Ф встречает некоторые ограничения. Например, если зазор сигнала не затухает точно возвращалась к базовому уровню, то ф возрастает с увеличением ширины интеграции окна. Во избежание потенциального источника погрешности для оценки Ф, мы теперь вычислить ее в течение временного окна соответствует 10% от пикового транспортера тока до и после ее начала 14. Последний подход улучшает последовательность, с которой Ф измеряют на клетки. Это очень удобно, особенно при анализе малых эффектов фармакологических методов лечения от времени ход оформления.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Успех аналитический подход, описанный здесь критически зависит от получения высококачественных электрофизиологических записей транспортера токи из астроцитов в любой области центральной нервной системы. При острых срезов гиппокампа мыши, астроциты могут быть легко идентифицированы под Dodt освещения или ИК-DIC из-за их малого тела клетки (Ø = 10 мкм) и видный ядра (рис. 1). Их отличительная звездная морфологии могут быть оценены с эпифлуоресцентной, конфокальной или двухфотонного лазерной сканирующей ми...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Здесь мы опишем экспериментальный подход, чтобы получить электрофизиологических записей из астроцитов, аналитический протокол для изоляции глутамата токи транспортера в астроцитах и математические методы для получения временной ход глутамата зазор от астроцитов токов транспортер.
Успех анализ основан на способности для получения высококачественной записи патч зажим из астроцитов и от точности установки алгоритмы, используемые для описания транспортер токов. Деконволюции анализ основан на с...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют никакого конфликта интересов.
Благодарности
Работа выполнена при поддержке Национального института неврологических расстройств и инсульта Внутренние программы исследований (NS002986). Как писал рукопись и реализованы деконволюцией анализа. JSD разработал первоначальный вариант деконволюцией анализа и прокомментировал текст.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| CGP52432 | Tocris | 1246 | |
| (R,S)-CPP | Tocris | 173 | |
| DPCPX | Tocris | 439 | |
| LY341495 динатриевая соль | Tocris | 4062 | |
| MSOP | Tocris | 803 | |
| NBQX динатриевая соль | Tocris | 1044 | |
| D,L-TBOA | Tocis | 1223 | |
| Picrotoxin | Sigma | P1675 | |
| MNI-L-глутамат | Tocris | 1490 | |
| Alexa 594 | Life Technologies | A10438 | Дополнительные |
| матричные электроды | Frederick Haer Company | MX21AES(JD3) | |
| Капилляры боросиликатного стекла | World Precision Instruments | PG10165-4 | |
| Двухступенчатый стеклянный съемник микропипетки | Narishige | PC-10 | |
| Loctite 404 мгновенный клей | Ted Pella | 46551 | |
| Xe лампа | Rapp OptoElectronic | FlashMic | |
| Igor Pro 6 | Wavemetrics |
Ссылки
- Ventura, R., Harris, K. M. Three-dimensional relationships between hippocampal synapses and astrocytes. J. Neurosci. 19, 6897-6906 (1999).
- Witcher, M. R., Kirov, S. A., Harris, K. M. Plasticity of perisynaptic astroglia during synaptogenesis in the mature rat hippocampus. Glia. 55, 13-23 (2007).
- Danbolt, N. C. Glutamate uptake. Prog. Neurobiol. 65, 1-105 (2001).
- Herman, M. A., Jahr, C. E. Extracellular glutamate concentration in hippocampal slice. J. Neurosci. 27, 9736-9741 (2007).
- Arnth-Jensen, N., Jabaudon, D., Scanziani, M. Cooperation between independent hippocampal synapses is controlled by glutamate uptake. Nat. Neurosci. 5, 325-331 (2002).
- Barbour, B. An evaluation of synapse independence. J. Neurosci. 21, 7969-7984 (2001).
- Rusakov, D. A., Kullmann, D. M. Extrasynaptic glutamate diffusion in the hippocampus: ultrastructural constraints, uptake, and receptor activation. J. Neurosci. 18, 3158-3170 (1998).
- Zerangue, N., Kavanaugh, M. P. Flux coupling in a neuronal glutamate transporter. Nature. 383, 634-637 (1038).
- Eliasof, S., Jahr, C. E. Retinal glial cell glutamate transporter is coupled to an anionic conductance. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93, 4153-4158 (1996).
- Wadiche, J. I., Amara, S. G., Kavanaugh, M. P. Ion fluxes associated with excitatory amino acid transport. Neuron. 15, 721-728 (1995).
- Wadiche, J. I., Kavanaugh, M. P. Macroscopic and microscopic properties of a cloned glutamate transporter/chloride channel. J. Neurosci. 18, 7650-7661 (1998).
- Bergles, D. E., Jahr, C. E. Synaptic activation of glutamate transporters in hippocampal astrocytes. Neuron. 19, 1297-1308 (1997).
- Diamond, J. S. Deriving the glutamate clearance time course from transporter currents in CA1 hippocampal astrocytes: transmitter uptake gets faster during development. J. Neurosci. 25, 2906-2916 (2005).
- Scimemi, A., Tian, H. Neuronal transporters regulate glutamate clearance, NMDA receptor activation, and synaptic plasticity in the hippocampus. J. Neurosci. 29, 14581-14595 (2009).
- Zuo, Z. Isoflurane enhances glutamate uptake via glutamate transporters in rat glial cells. Neuroreport. 12, 1077-1080 (2001).
- Barbour, B., Brew, H., Attwell, D. Electrogenic uptake of glutamate and aspartate into glial cells isolated from the salamander (Ambystoma) retina. J. Physiol. 436, 169-193 (1991).
- Bergles, D. E., Tzingounis, A. V., Jahr, C. E. Comparison of coupled and uncoupled currents during glutamate uptake by GLT-1 transporters. J. Neurosci. 22, 10153-10162 (2002).
- Diamond, J. S., Jahr, C. E. Synaptically released glutamate does not overwhelm transporters on hippocampal astrocytes during high-frequency stimulation. J. Neurophysiol. 83, 2835-2843 (2000).
- Benediktsson, A. M., et al. Neuronal activity regulates glutamate transporter dynamics in developing astrocytes. Glia. 60, 175-188 (2012).
- Hires, S. A., Zhu, Y., Tsien, R. Y. Optical measurement of synaptic glutamate spillover and reuptake by linker optimized glutamate-sensitive fluorescent reporters. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 4411-4416 (2008).
- Scimemi, A., Meabon, J., Woltjer, R. L., Sullivan, J. M., Diamond, J. S., Cook, D. G. Amyloidβ1-42 slows clearance of synaptically-released glutamate by mislocalizing astrocytic GLT-1. J. Neurosci. 33, 5312-5318 (2013).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
