Выводя на динамику Глутамат зазор Деконволюция Анализ астроцитов Токи Transporter

Summary

Опишем аналитический метод оценки срока службы глутамата астроцитов в мембранах из электрофизиологических записей глутамата токи транспортера в астроциты.

Abstract

Высокая плотность транспортеры глутамата в мозге находится в астроциты. Глутамат пару транспортеры движение глутамата через мембрану при содействии транспортировки 3 Na ⁺ и 1 H ⁺ и противоположно направленного транспорта 1 К ^+. Стехиометрического ток, генерируемый транспортного процесса можно контролировать с цельноклеточная патч-зажим записи из астроцитов. Временной ход записан текущий формируется временной ход глутамата профиль концентрации в котором астроциты подвергаются, кинетика глутамата транспортеры, и пассивный электротоническим свойства астроцитов мембран. Здесь мы описываем экспериментальных и аналитических методов, которые могут быть использованы для записи глутамата токи транспортера в астроцитах и ​​изолировать временной ход глутамата зазор от всех других факторов, которые определяют форму волны тока астроцитов транспортер. Методы, описанные здесь, могут быть использованы для оценки времени жизни оF-вспышкой и Uncaged синаптически выпустили глутамата на мембранах астроцитов в любом регионе центральной нервной системы во время здоровья и болезни.

Introduction

Астроциты являются одним из наиболее распространенных типов клеток в мозге со звездообразной морфологии и мелкие выступы мембраны, которая распространяется на всю нейропилей и достичь ^1,2 соседних синаптических контактов. Клеточной мембраны астроцитов 'плотно заполнена молекулы глутамата Перевозчик ^3. В физиологических условиях глутамата транспортеры быстро связывать глутамат на внеклеточный стороне мембраны и передавать ее в цитоплазме клетки. Поступая таким образом, транспортеры поддерживать низкие базальные концентрации глутамата во внеклеточном пространстве ^4. Глутамат транспортеры в хорошую астроцитов процессов, прилегающих к....

Protocol

1. Подготовка Slice

1. Подготовьте 500 мл нарезки / хранения раствора, содержащего (в мм): 119 NaCl, 2,5 KCl, 0,5 CaCl _2, 1,3 MgSO ₄ · 7H ₂ O, 4 MgCl _2, 26,2 NaHCO _3, 1 NaH ₂ PO _4, 22 и глюкозы, 320 мОсм, рН 7,4
2. Используйте 250 мл стакан подготовить камеру для погружения ломтиками, залейте его 200 мл нарезки / решение для хранения данных, согрейте его в водяной бане при 34 ° С и пузырь его с 95% O _2, 5% СО _2.
3. Держите оставшуюся нарезки / решение для хранения данных в стеклянной бутылке при 4 ° C.
4. Используйте цианакрилатный клей для ....

Results

Успех аналитический подход, описанный здесь критически зависит от получения высококачественных электрофизиологических записей транспортера токи из астроцитов в любой области центральной нервной системы. При острых срезов гиппокампа мыши, астроциты могут быть легко идентифицированы под Dodt освещения или ИК-DIC из-за их малого тела клетки (Ø = 10 мкм) и видный ядра (рис. 1). Их отличительная звездная морфологии могут быть оценены с эпифлуоресцентной, конфокальной или двухфотонного лазерной сканирующей ми.......

Discussion

Здесь мы опишем экспериментальный подход, чтобы получить электрофизиологических записей из астроцитов, аналитический протокол для изоляции глутамата токи транспортера в астроцитах и ​​математические методы для получения временной ход глутамата зазор от астроцитов токов транспортер.

Успех анализ основан на способности для получения высококачественной записи патч зажим из астроцитов и от точности установки алгоритмы, используемые для описания транспортер токов. Деконволюции анализ основан на с.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
CGP52432	Tocris	1246
(R,S)-CPP	Tocris	173
DPCPX	Tocris	439
LY341495 динатриевая соль	Tocris	4062
MSOP	Tocris	803
NBQX динатриевая соль	Tocris	1044
D,L-TBOA	Tocis	1223
Picrotoxin	Sigma	P1675
MNI-L-глутамат	Tocris	1490
Alexa 594	Life Technologies	A10438	Дополнительные
матричные электроды	Frederick Haer Company	MX21AES(JD3)
Капилляры боросиликатного стекла	World Precision Instruments	PG10165-4
Двухступенчатый стеклянный съемник микропипетки	Narishige	PC-10
Loctite 404 мгновенный клей	Ted Pella	46551
Xe лампа	Rapp OptoElectronic	FlashMic
Igor Pro 6	Wavemetrics