Эрратум: Протоколы подготовки образцов, визуализации и анализа для сканирующей микроскопии с лезвием-сканером

Краткое содержание

В статью Протоколы подготовки образцов, визуализации и анализа для сканирующей микроскопии с ножевым краем были внесены исправления. Важные изменения коснулись протокола окрашивания по Нисслю.

Аннотация

В статью Протоколы подготовки образцов, визуализации и анализа для сканирующей микроскопии с использованием ножевого лезвия были внесены исправления. Важные изменения коснулись протокола окрашивания по Нисслю.

Протокол

В статью Протоколы подготовки образцов, визуализации и анализа для сканирующей микроскопии с использованием ножевого лезвия были внесены исправления. Протокол окрашивания по Нисслю был изменен следующим образом:

2. Подготовка образцов: метод Ниссля

1. Мыши вводят кетамин и ксилазин внутрибрюшинно для глубокого наркоза, после чего проводят транскардиальную перфузию 50 mL фосфатно-солевого буфера (pH 7.4) комнатной температуры, затем 250 mL 10% нейтрального буферизированного формалина (pH 7.4) комнатной температуры и, наконец, 3.0 cc неразбавленных чернил из Индии.
2. Перфузия всего тела физраствором и фиксатором необходима для удаления крови из сердечно-сосудистой системы и фиксации тканей. Перфузия чернилами из Индии необходима для полного заполнения сосудов сердечно-сосудистой системы.
3. Полученный мозг затем дегидратируют через серию растворов этилового спирта возрастающей концентрации (25%{}-100%), после чего заливают в пластик Araldite согласно протоколу 1.8-1.9, описанному выше. Если в качестве среды для заливки используется LR White, следует руководствоваться протоколом 1.10, описанным выше.
4. Мыши вводят кетамин и ксилазин внутрибрюшинно для глубокого наркоза, после чего проводят транскардиальную перфузию 50 mL фосфатно-солевого буфера (pH 7.4) комнатной температуры, затем 250 mL 10% нейтрального буферизированного формалина (pH 7.4) комнатной температуры и, наконец, 3.0 cc неразбавленных чернил из Индии.
5. Перфузия всего тела физраствором и фиксатором необходима для удаления крови из сердечно-сосудистой системы и фиксации тканей. Перфузия чернилами из Индии необходима для полного заполнения сосудов сердечно-сосудистой системы.
6. Полученный мозг затем дегидратируют через серию растворов этилового спирта возрастающей концентрации (25%{}-100%), после чего заливают в пластик Araldite согласно протоколу 1.8-1.9, описанному выше. Если в качестве среды для заливки используется LR White, следует руководствоваться протоколом 1.10, описанным выше.
7. Мыши вводят кетамин и ксилазин внутрибрюшинно для глубокого наркоза, после чего проводят транскардиальную перфузию 50 mL фосфатно-солевого буфера (pH 7.4) комнатной температуры, затем 250 mL 10% нейтрального буферизированного формалина (pH 7.4) комнатной температуры и, наконец, 3.0 cc неразбавленных чернил из Индии.
8. Перфузия всего тела физраствором и фиксатором необходима для удаления крови из сердечно-сосудистой системы и фиксации тканей. Перфузия чернилами из Индии необходима для полного заполнения сосудов сердечно-сосудистой системы.
9. Полученный мозг затем дегидратируют через серию растворов этилового спирта возрастающей концентрации (25%{}-100%), после чего заливают в пластик Araldite согласно протоколу 1.8-1.9, описанному выше. Если в качестве среды для заливки используется LR White, следует руководствоваться протоколом 1.10, описанным выше.

до:

2. Подготовка образцов: метод Ниссля

1. Данный протокол в точности соответствует протоколу Mayerich et al.⁷
2. Мыши вводят кетамин и ксилазин внутрибрюшным путем для достижения глубокой анестезии, после чего проводят транскардиальную перфузию, используя 50 mL фосфатно-солевого буферного раствора (pH 7.4) комнатной температуры, а затем 250 mL холодного 4% фосфатно-буферизированного параформальдегида (pH 7.4).
3. Затем проводят перфузию мозга мыши 100 mL раствора красителя тионина (0.1%) в деионизированной воде, после чего тушку помещают в холодильник (4 °C) на 24 часа.
4. Через 24 часа мозг извлекают из черепа и помещают в свежий раствор 0.1% тионина, где он выдерживается при 4 °C в течение 7 дней. Столь длительный срок процедуры необходим для обеспечения полного проникновения тионина в препарат, зафиксированный в блоке.
5. Затем мозг обесцвечивают и дегидратируют, используя серию растворов этанола возрастающей концентрации, начиная с 50% этанола в воде и доводя до 100% этанола в течение 6 недель. Образцы при смене этанола от 50% до 70% хранят в холодильнике (4 °C), а при всех концентрациях этанола выше 70% — при комнатной температуре.
6. После трехкратной смены ацетона (по 2-4 дня в каждом растворе при комнатной температуре) мозг заливают в пластик Araldite согласно протоколу 1.8-1.9, описанному выше. Если в качестве среды для заливки используется LR White, следуют протоколу 1.10, описанному выше.