Кортизол (CORT) накапливается в растущей волоса человека и приматов. Мы описываем методы для извлечения и анализа волос Корт с высокой точностью и чувствительностью. Измерение волос CORT особенно хорошо подходит для оценки хронический стресс за периоды недель до месяцев.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Добыча и Анализ кортизола от человека и обезьян волос
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Гормон стресса кортизол (CORT) медленно включены в растущей волоса людей, приматов и других млекопитающих. Мы разработаны и утверждены способ добычи CORT и анализа от резус волос обезьяны и впоследствии адаптирована этот метод для использования с человеческий волос на голове. В отличие от Cort «точечных проб" из плазмы или слюны, волос CORT обеспечивает интегрированный меру гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая система (HPA) деятельности, и, таким образом физиологический стресс, в период гормональной регистрации. Поскольку волосы головы человеческие растет со средней скоростью 1 см / месяц, уровни CORT, полученные из отрезков волос несколько см в длину может потенциально служить в качестве биомаркеров стресса испытали на протяжении ряда месяцев.
В нашем методе каждый образец волос сначала дважды промывают в изопропаноле, чтобы удалить любой Cort от наружной части волоса, которые были депонированы от пота или кожного сала. После сушкиОбразец измельчают в мелкий порошок, чтобы разбить белка матрицу волоса и увеличить площадь поверхности для добычи. CORT из внутренней части волоса экстрагируют метанолом, метанол выпаривают, и полученный экстракт восстанавливают в буфере для анализа. Извлеченные CORT, наряду с нормами и контроля качества, затем анализируют с помощью чувствительного и специфического коммерчески доступного иммуноферментного анализа (EIA) набора. Считывание из EIA преобразуется в пг CORT на мг порошкообразного массы волос. Этот метод был использован в нашей лаборатории для анализа волос Корт в людях, несколько видов макак, мартышек, собаки и белых медведей. Многие исследования как из нашей лаборатории и из других исследовательских групп продемонстрировали широкой применимости волос CORT для оценки хроническое воздействие стресса в естественных, так и лабораторные установки.
Введение
Измерение CORT в крови, слюны или иногда в моче или кале был использован в качестве показателя физиологического стресса, так как открытие Селье роли оси НРА в стресса 1. Несмотря на многочисленные работы были опубликованы относящиеся HPA деятельность в остро стрессовые ситуации, поле было затруднено из-за отсутствия простого и надежного индекса хронического физиологического стресса. Эта проблема возникает потому, что плазма и слюны как выход «точечные» оценки HPA деятельности, которые подлежат циркадные изменения и может быть поражена нанесения ущерба окружающей среде. Мочи и кала образцы дают измерения CORT и / или метаболитов с мочой, которые охватывают ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Образец Сбор и хранение
- Человеческих волос
- Закрепите всю длину волос, чтобы быть в выборку (до карандаша шириной в диаметре) с резинкой или клипа. Отрежьте волосы как можно ближе к коже головы, насколько это возможно (стараясь не ник кожи) с чистой ножницами. Примечание: стандартная площадь выборки задняя вершина черепа.
- Некоторые исследователи отметили снижение уровней волосы Корт человека с расстоянием от головы 6, которая может быть связано с вымывания от многократного воздействия воды и шампуня 7 (хотя см. Manenschijn др.. 8 и Томсон и др.. 9 для противоположных результ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
На рисунке 1 показана распечатки из репрезентативного набора образцов человеческих волос (взрослых мужчин и женщин человека предметы) обрабатываются с помощью метода 2 шлифовки и добычу. Компьютерное программное обеспечение используется для генерации и вывода данных, чтобы соответствовать 4-параметрическую сигмоидальную кривую стандартов Cort (рис. 2). В между-скважины резюме от этой пластинки составляла от 0.01-5.73% со средним внутри анализа CV 1,34%. Между тестовая точность определяе.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Процедура волосы CORT описано выше прост в исполнении, является относительно недорогим, делает использование легкодоступных химических веществ, реагентов и материалов, а также оборудование, которое требуется, за одним исключением, вероятно, будет присутствовать в типичной аналитическую лабораторию. Исключением является шлифовальное устройство, например, шаровой мельнице или мини-beadbeater. Отметим, что некоторые исследовательские группы фарш образцы волос на мелкие фрагменты примерно 1 мм в длину 12, а на ос.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют конфликта интересов для объявления.
Благодарности
Мы благодарим Kymberlee О'Брайен, Celia Мур, и Эдвард Tronick (факультет психологии, Университет Массачусетса, Бостон) за предоставление человека образцы волос, проанализированные в этом исследовании, и Стивен Суоми и Аманда Деттмер (Лаборатория сравнительной этологии, NICHD) для предоставление резус образцы обезьяна волос. Начальное развитие и дальнейшее использование этого метода была поддержана NIH RR11122 для MAN
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Изопропанол класса ВЭЖХ | Fisher | A451 | |
| Метанол класса ВЭЖХ | Fisher | A452 | |
| Наборы для анализа кортизола в слюне | Salimetrics | 1-3002 | Смотрите вкладыш производителя для получения информации о чувствительности и специфичности анализа |
| 15 мл Полипропиленовые центрифужные пробирки с винтовой крышкой | Max Scientific | 10-9151 | |
| 1,5 мл Пробирки для микроцентрифуг Safe-Lock | Fisher | 05-402-25 | |
| 2,0 мл Пробирки для микроцентрифуг Safe-Lock | Fisher | 05-402-7 | |
| 2,0 мл усиленные микрофлаконы XXTuff | BioSpec | 330TX | Использование с мини-бисеробилкой |
| 3,2 мм шариками из хромистой стали | BioSpec | 11079132c | Использование с мини-бисером |
| 10 мл из нержавеющей стали | Retsch | 02.462.0061 | Использование со смесительной мельницей |
| 12 мм мелющие шары из нержавеющей стали | Retsch | 05.368.0037 | Использование со смесительной мельницей |
| Savant картридж с активированным углем | Fisher | DTK120R | Использование с химической ловушкой Savant |
| Вращатель для центрифужных пробирок 15 мл | Fisher | S02135 | |
| Ротатор для микроцентрифужных пробирок | Fisher | NC9854190 | |
| Настольная центрифуга для микроцентрифужных пробирок | Fisher | 13-100-675 | |
| MM 200 мешалка | мельница Retsch | 20.746.0001 | |
| Мини-бисер 16 | BioSpec | 607 | |
| Savant DNA Speedvac | Fisher | DNA120-115 | |
| Охлаждающая ловушка для пара | Savant Fisher | RVT400-115 | |
| Ловушка для химикатов | Savant Fisher | SCT120 | Альтернатива охлаждаемой ловушке для пара |
| Считыватель | |||
| Мойка | |||
| микропластинМикропланшетный смеситель | |||
| Многоканальный дозатор | |||
| Аналитические весы |
Ссылки
- Selye, H. Stress and the general adaptation syndrome. Br. Med. J. 1 (4667), 1383-1392 (1950).
- Meyer, J. S., Novak, M. A. Minireview: Hair cortisol: A novel biomarker of hypothalamic- pituitary-adrenocortical activity. Endocrinology. 153, 4120-4127....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
