Мы опишем протокол для дестабилизации медиального мениска (DMM) модели у мышей, эффективный инструмент для остеоартрит (ОА) исследований. Кроме того, мы продемонстрировали, что дефицит progranulincan развития преувеличивать О.А. и прогрессирования, используя данную модель, указывая, что progranulin играет защитную роль в патогенезе ОА.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Создание вызванной хирургически, модели у мышей по расследованию защитную роль Progranulin в остеоартрита
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Дестабилизация медиального мениска (DMM) модель является важным инструментом для изучения патофизиологических роли многочисленных артрита, связанных молекул в патогенезе остеоартрита (ОА) в естественных условиях. Тем не менее, подробный, особенно визуализируются протокол для установления этой сложной модели у мышей, не доступен. Здесь мы воспользовались дикого типа и progranulin (PGRN) - / - мыши в качестве примеров по внедрению протокола для индукции DMM модель на мышах, и по сравнению начало ОА следующий создания этого хирургически индуцированной модели. Проведенные на мышах операции были либо обман операция, которая только что открыл суставной капсулы, или операцию DMM, который разрезать menisco-большеберцовой связки и вызвало дестабилизацию медиального мениска. Тяжесть Артроз оценивали с помощью гистологического анализа (например, окрашивания Сафранин О), выражения ОА-связанных генов, деградация хряща молекул внеклеточного матрикса, и остеофит формыAtion. Операция DMM успешно индуцированных О.А. инициации и прогрессировании и в дикого типа и PGRN-/ - мышей, и потери фактора роста PGNR привело к более тяжелым ОА фенотипа в этом хирургически индуцированной модели.
Введение
Остеоартрит (ОА), также известный как дегенеративный артрит, влияет 15% населения земного шара и более 46 миллионов человек в Соединенных Штатах, и характеризуется синовита, дегенерации хряща, и формирование остеофитов 1. Это может быть результатом сложного взаимодействия генетических, метаболических, биомеханических и биохимических факторов. Основные механизмы ОА продолжают уклоняться научное сообщество. Есть в настоящее время многочисленные животные модели, которые могут имитировать патогенеза ОА 2,3. Важно установить животные модели у мышей как из-за наличия различных генетически модифицированных мышей и экономической эффективности эксперимен....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все хирургических процедур, связанных с животными должно быть одобрено по уходу за животными и Этического комитета местного Учреждения, с усилием, чтобы свести к минимуму боль и дискомфорт, вызванный хирургии.
1. Подготовка
- Выбор 8-12 недель самцов C57BL / 6 мышей с массой тела примерно 25 г в течение операции.
- Обезболить животных через внутрибрюшинной инъекции коктейля, содержащего как ксилазина (5 мг / кг) и кетамин (40 мг / кг).
- Бритье колено с бритвами, то хирургически драпировать животное и стерилизовать хирургические сайт бетадином и алкоголя (3х) и закрывала глаза мыши мазью.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
DMM модель была успешно создана в мышей, и дефицит PGRN преувеличены, вызванной хирургически, развитие ОА.
Шам и DMM операции (рис. 1) были выполнены в WT и PGRN-/ - мышей. 8 недель после операции, мышей умерщвляли и окрашивание сафранин О проводили на секциях из коленных суставов, а затем с помощью статистического анализа нот артрита на основе гистологии. Как показано на рисунке 2А, не было никакой очевидной дегенерация хряща в обоих геноти.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Он сообщил, что штамм мышей очень важно для DMM модели индукции, так как различные штаммы мышей различной степени тяжести ОА после DMM, с самого высокого уровня в штамме 129/SvEv, а затем C57BL6, 129/SvInJ а затем FVB / н 26. Большая часть трансгенов установлены в C57BL6 мышей, таких как PGRN-/ - мышей, которые мы использовали в настоящем исследовании, которые являются относительно чувствительными к DMM. Однако, если трансген на основе нечувствительным штамма, такого как FVB / N мышей, необходимо обратное скр.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Здесь Мы заявляем, что у нас нет никакого конфликта интересов.
Благодарности
Эта работа была частично поддержана NIH исследовательских грантов R01AR062207, R01AR061484, R56AI100901, K01AR053210, и заболеваний целевых исследований Грант от ревматологии Research Foundation (к CJ Лю).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| No 10 Хирургические лезвия | Feather | 25-2976#10 | |
| 6-0 шовный материал | Applied Dental | WG-N53133 |
Ссылки
- Herndon, J. H., Davidson, S. M., Apazidis, A. Recent socioeconomic trends in orthopaedic practice. J. Bone Joint Surg. Am. 83, 1097-1105 (2001).
- Johnson, K., et al. A stem cell-based approach to cartilage repair. Science. 336, 717-721 (2012).
- Yang, S., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
