Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Выделение жизнеспособных многоклеточных желез от ткани Хищные растения, Nepenthes

4.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/50993

⸱

22 декабря 2013 г.

 ,  ,  , 
1Laboratoire Agronomie et Environnement, Université de Lorraine, 2Department of Bioorganic Chemistry, Max Planck Institute for Chemical Ecology, 3aura optik

В этой статье

Краткое содержание

Железы растений являются специализированными структурами, отвечающими за биосинтез и секрецию многих соединений, участвующих во взаимодействии с биотической средой. Для изучения их молекулярных и биохимических особенностей была разработана методика механической микроподготовки для выделения отдельных метаболически активных желез, в данном случае из плотоядного растения Nepenthes.

Аннотация

Многие растения обладают специализированными структурами, которые участвуют в производстве и секреции специфических низкомолекулярных соединений и белков. Эти структуры почти всегда локализованы на растительных поверхностях. Среди них есть нектарники или железистые трихомы. Выделяемые соединения часто используются во взаимодействии с биотической средой, например, в качестве аттрактантов для опылителей или отпугивающих средств против травоядных.

Железы, которые уникальны в нескольких аспектах, могут быть найдены у плотоядных растений. У так называемых кувшинчатых растений рода Nepenthes бифункциональные железы внутри ловушки-ловушки с одной стороны выделяют пищеварительную жидкость, включающую все необходимые для переваривания добычи ферменты, а с другой стороны поглощают выделяющиеся питательные вещества. Таким образом, эти железы представляют собой идеальную специализированную ткань, предназначенную для изучения основных молекулярных, биохимических и физиологических механизмов секреции белка и поглощения питательных веществ растениями. Более того, в целом биосинтез вторичных соединений, продуцируемых многими растениями, оснащенными железистыми структурами, может быть исследован непосредственно в железах.

Чтобы работать с такими специализированными структурами, их нужно изолировать эффективно, быстро, метаболически активно и без загрязнения другими тканями. Поэтому была разработана методика механического микропрепарирования, которая была применена для исследований жидкости для сбраживания непентеса. Здесь представлен протокол, который был использован для успешного получения одиночных бифункциональных желез из ловушек Nepenthes, на основе механизированной платформы микропроб. Железы могут быть выделены и непосредственно использованы для дальнейшего анализа экспрессии генов методами ПЦР после получения РНК.

Введение

Растения вырабатывают огромное разнообразие соединений с различным промышленным и фармацевтическим применением: от низкомолекулярных веществ до полимеров. Такие соединения часто синтезируются и секретируются узкоспециализированными структурами, многие из которых локализованы на поверхности растений, например, железистые трихомы или нектарники, либо внутри них, такие как идиобласты или латексонные и смоляные каналы соответственно. Однако о биологии этих специализированных секреторных структур известно сравнительно немного, хотя все типы таких желез обладают многими признаками, указывающими на активный метаболизм. В частности, железы плотоядных растений, таких как Nepenthes, могут рассматриваться как модельные системы в биологии растительной клетки1.

Плотоядные растения являются объектом многочисленных исследований с 1875 года, когда была опубликована работа Чарльза Дарвина «Насекомоядные растения»2. Однако исследования на молекулярном уровне начались лишь в последние несколько лет, и наши знания все еще ограничены. Например, белковый состав пищеварительной жидкости в кувшинниках рода Nepenthes до сих пор изучен не полностью. Только недавно было идентифицировано несколько гидролитических белков, а также несколько соответствующих им генов3. В ловчих ямах Nepenthes (Рисунок 1), многоклеточные железы расположены в нижней внутренней части кувшинов. Эти железы отвечают как за выработку и секрецию пищеварительных ферментов в жидкость кувшина, так и за абсорбцию растворенных питательных веществ из этой жидкости4. Таким образом, данные бифункциональные железы представляют собой уникальную микроткань, занимающую центральное место и играющую ключевую роль в плотоядности Nepenthes, что делает их достойными детального изучения.

Анатомия плотоядного растения, детали кувшина Nepenthes, ботаническое исследование, механизм ловушки, адаптация.
Рисунок 1. Кувшин Nepenthes alata. Нижняя часть кувшина содержит пищеварительную жидкость и внутренние железы. Нажмите здесь, чтобы просмотреть изображение в большем размере.

В растениеводстве многие экспериментальные подходы опираются на использование «общего материала», поскольку исследуются не определенные ткани, а целые органы. Как следствие, их гомогенизация и анализ позволяют получить лишь усредненные результаты, пропорционально распределенные по индивидуальным тканям и клеткам5. Для решения этой проблемы были разработаны методы микропрепарирования, например, так называемая лазерная микродиссекция (LCM), которая успешно применяется для сбора специфических тканей растений и анализа их индивидуального состава6. Однако применение LCM часто ограничено, если целью являются нестабильные и/или быстро разлагающиеся клеточные компоненты, такие как RNA. В таком случае недостатком является необходимость предварительной фиксации ткани, которая занимает много времени и часто сопровождается деградацией биомолекул. Кроме того, из-за высокого содержания воды во многих растительных тканях и прочности клеточных стенок LCM часто оказывается неэффективным при работе непосредственно со свежей тканью7. Любой подход к исследованию клеточных компонентов секреторных желез — от генов, mRNA и белков до вторичных соединений и их биосинтеза — требует альтернативных методов специальной подготовки. Таким образом, необходимы специфические методы изоляции отдельных клеток или даже многоклеточных желез, которые остаются неповрежденными после подготовки.

В данном материале представлен метод с использованием механизированной платформы для микроотбора проб, которая обеспечивает возможность прямого микроскопического визуализирования. Эта методика позволяет быстро и эффективно подготавливать отдельные железы из кувшинчиков Непентес видов. Эти многоклеточные железы обладают бифункциональностью, т. е. Они участвуют как в процессах секреции, так и в процессах поглощения; данные клетки неподвижны, а незащищенные слои клеток импрегнированы с образованием эндодермиса. Целые железы можно изолировать без соседних тканей и определенным образом поместить в ПЦР-пробирку. Этот метод применяется для изучения специфических генов, а также экспрессии генов в тканях желез.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка растительного материала

  1. Все виды Nepenthes выращивались либо в теплицах MPI for Chemical Ecology, либо в Ботаническом саду в Йене, Германия.
  2. Для приготовления выделяемой ткани соберите кувшин и снимите верхнюю треть, включая крышку, перистому и скользкую зону. Кувшин можно использовать как свежим, так и замороженным в жидком азоте и хранить при температуре -80 °C.

2. Микродиссекция ткани кувшина

  1. Платформа для микроотбора состоит из стереомикроскопа и микроманипулятора, который непосредственно прикреплен к корпусу микроскопа и управляется 3D-джойстиком. Здесь использовался ранний прототип ауреки, как указано в документах (Рисунок 2A).
  2. Для вскрытия секреторных желез из Непентеса кувшины используют микрощипцы и прикладывают его к манипулятору (рисунки 2А и 2В).
  3. Для извлечения РНК обработайте все инструменты (бритвенные лезвия, пинцет, микроманипулятор, микрощипцы, предметное стекло) РНКазеЗАП.
  4. Подготовьте пробирки для сбора, добавив 9 мкл воды, не содержащей нуклеаз, и 1 мкл ингибитора РНКазы в пробирку для ПЦР-транз. Для прямой ПЦР из образцов тканей используют только безнуклеазную воду (10 мкл).
    1. Возьмите свежий или замороженный кувшин и удалите 1-2 см2 кусочка ткани, содержащей секреторные железы, с помощью бритвенного лезвия и пинцета. Промойте салфетку водой; добавьте 0,1% диэтилпирокарбонат (DEPC), если будет экстрагирована РНК.
    2. Закрепите растительный материал двусторонним скотчем на предметном предметном стекле (покрытая железом поверхность должна быть обращена вверх, рисунки 2C и 2D) и закрепите предметное стекло скотчем на универсальном столике, который следует наклеить с помощью подвижного стола.
    3. Для извлечения нуклеиновых кислот препарат следует проводить на льду. Поэтому возьмите плоскую коробку из пенополистирола, поместите внутрь универсальный столик с образцом и наполните коробку льдом. После этого поместите коробку под микроскоп.
    4. Для подготовки очень важно расположение желез. Секреторные железы частично закрыты защитным капюшоном (рис. 3) и доступны щипцами только с одной стороны. Кроме того, угол наклона образца к щипцам должен быть отрегулирован путем наклона стола универсального столика примерно на 135°, в зависимости от вида Nepenthes.
    5. Микродиссекция проводится под визуальным контролем. Для выделения желез используйте фильтр без УФ-излучения, чтобы ограничить деградацию ДНК и РНК.
    6. Переместите микроманипулятор и щипцы через пульт управления к выбранной железе. Достигнув железы, поместите каждую руку щипцов по обе стороны от железы. Удалите железу из оставшихся тканей, закрыв щипцы (рисунок 4А).
    7. Направьте железу, прикрепленную к щипцам, в сторону от объекта и к трубке для сбора. Подведите самые кончики щипцов к соприкосновению с раствором в трубке (рисунок 4В). Освобождение железы при раскрытии щипцов должно быть хорошо соблюдено, потому что железы имеют тенденцию прилипать к кончику инструмента. Ткань можно хранить при температуре -80 °C до проведения ПЦР или экстракции РНК.

3. Прямая ПЦР-амплификация из ткани Nepenthes

  1. Чтобы доказать эффективность метода препарирования, можно провести ПЦР-подход непосредственно из ткани железы без этапа экстракции ДНК.
  2. Для амплификации ПЦР используют геноспецифические праймеры; в данном случае кодируют последовательность тауматин-подобного белка (TLP) (прямой: 5'-CAATGAGCCAATTCATAAAATTCATTG-3', обратный: 5'-CAGTTATACTTTAAGGGCAAAACAAC-3').
    1. Соберите 1-5 желез в ПЦР-пробирку, содержащую 10 мкл воды, не содержащей нуклеаз. Для реакции объемом 50 мкл добавьте 5 мкл 10x Taq-буфера, 1 мкл 10 мМ дезоксинуклеозидтрифосфатов (dNTP), 3 мкл 25 мМ MgCl2, 0,4 мкл (1,25 мкм) Taq ДНК-полимеразы, 1 мкл (100 пмоль) каждого праймера и 28,6 мкл воды, не содержащей нуклеаз.
    2. Проведите реакции ПЦР в амплификаторе по следующей программе: начальная денатурация при 94 °C в течение 3 мин; 35 циклов денатурации (94 °C в течение 30 сек), отжиг (59 °C в течение 30 сек) и удлинение (72 °C в течение 1 мин); и заключительная стадия удлинения в течение 10 мин при 72 °C.
    3. Докажите амплификацию продукта ПЦР с помощью электрофореза в агарозном геле. Поэтому используйте 1,5% (w/v) агарозы и растворите ее в 1x TAE (40 мМ трис-основание, 20 мМ ледяной уксусной кислоты, 1 мМ ЭДТА, pH 8) буфере. Нагрейте раствор в микроволновой печи до полного растворения агарозы. В 100 мл раствора агарозы добавьте 1 мкл бромида этидия (10 мкг/мкл) для последующей визуализации. Запустите гель в 1x TAE буфере при 300 В, 115 мА в течение примерно 20 минут в камере для электрофореза. Правильный размер ампликона TLP должен быть на уровне 690.о.

4. Экстракция РНК из небольших образцов тканей и обратная транскрипция

  1. Выполните следующие действия на льду. Для экстракции РНК использовались два метода экстракции: Micro Kit для экстракции общей РНК и набор для выделения мРНК с применением магнитных шариков.
  2. Соберите не менее 30 секреторных желез с помощью микропрепарата в ПЦР-пробирку, содержащую 1 мкл ингибитора РНКазы и 9 мкл воды, не содержащей нуклеаз. После этого лизируйте ткань в термоамплификаторе в течение 10 минут при температуре 75 °C.
  3. Экстракция общей РНК.
    1. После приготовления добавьте в образец 90 мкл раствора лизиса и инкубируйте в течение 10 мин при 75 °C. После этого загрузите реакционную смесь в колонку (входит в комплект поставки) и приступайте к этапам промывки, как описано в руководстве производителя.
    2. Разбавьте РНК два раза 10 мкл элюирующего раствора соответственно и продолжайте обработку ДНКазой I.
    3. К 20 мкл экстрагированной РНК добавьте 2 мкл 10x буфера ДНКазы I и 1 мкл ДНКазы I (входит в комплект для экстракции РНК) и инкубируйте 1 час при 37 °C. Остановите реакцию, добавив 2 мкл реагента для инактивации ДНКазы, и инкубируйте в течение 2 мин при комнатной температуре. После этапа центрифугирования в течение 1,5 мин на максимальной скорости РНК может быть перенесена в свежую пробирку, не содержащую РНКазы. Определите концентрацию РНК в каждом образце с помощью спектрофотометра. Образцы должны храниться при температуре -80 °C.
  4. Экстракция мРНК с помощью магнитных шариков.
    1. Отрегулируйте объем образца до 100 мкл с помощью буфера для лизиса/связывания (входит в комплект) и инкубируйте в течение 10 мин при 75 °C. Добавьте 20 мкл магнитных шариков, поставляемых с выступом Oligo (dT)25, и перемешайте реакцию в течение 5 мин при комнатной температуре. МРНК связывается с помощью поли(А)-хвоста с олиго(dT)25 выступом шариков.
    2. Выполните этапы промывки мРНК, связанной с магнитными шариками, следуя протоколу производителя. Растворы можно удалять с помощью магнита. Ресуспендируйте гранулы в 20 мкл 10 мМ буфере Tris-HCl (pH 7,5).
    3. Удалите загрязнения геномной ДНК путем обработки образца 2U (1 μл) ДНКазы (2 μл 10x DNазного буфера и 17 μл воды, не содержащей нуклеазы) в течение 1 часа при 37 °C. После этого ферментный раствор удаляют магнитом, и гранулы ресуспендируют в 20 μл 10 мМ трис-HCl буфера. Измерить концентрацию РНК не представляется возможным, так как она прикреплена к бусинам. Образцы должны храниться при температуре -80 °C.
  5. Для обратной транскрипции используйте набор для синтеза кДНК. Реакции проводились в соответствии с протоколом производителя.
    1. Для обратной транскрипции общей РНК добавьте 1 мкл (100 пмоль) праймера Oligo (dT)20 или 1 мкл (0,4 мкг) Random Hexamers, 1 мкл ингибитора РНКазы и 1 мкл 10 мМ dNTP Mix к 1 мкг РНК и отрегулируйте объем до 14 мкл с помощью воды, не содержащей нуклеаз. Инкубируйте при температуре 65 °C в течение 5 минут, а затем поместите образцы на лед. Добавьте 1 мкл 0,1М DTT, 1 мкл обратной транскриптазы и 4 мкл 5-кратного RT-буфера. Реакции инкубируют в течение 55 мин при 50 °С, после чего следует стадия инактивации при 70 °С в течение 10 мин. После обратной транскрипции образцы могут храниться при температуре -20 °С.
    2. Для мРНК, связанной с магнитными шариками, замените буфер Tris-HCl первой реакционной смесью (1 мкл ингибитора РНКазы, 1 мкл 10 мМ dNTP Mix и 12 мкл воды, не содержащей нуклеазы) и инкубируйте в течение 5 мин при 65 °C. Из-за вылета Oligo (dT)25 на бусинах нет необходимости добавлять в образцы праймер Oligo (dT)20 или случайные гексамеры. После этого следуйте описанному выше протоколу (шаг 4.5.1).
    3. Измерьте концентрацию кДНК с помощью спектрофотометра. Храните образцы при температуре -20 °C.

5. ПЦР в реальном времени

  1. Для анализов с помощью ПЦР в реальном времени используйте общую РНК, экстрагированную с помощью Micro Kit и SYBR Green QPCR Master Mix. Чтобы обеспечить равное количество транскриптов, отрегулируйте концентрацию кДНК в каждом образце до одного и того же значения после обратной транскрипции.
  2. В дополнение к образцам вводятся контрольные реакции. Используйте нешаблонный контроль для скрининга на предмет загрязнения в реагентах и проверки качества грунтовок. Чтобы проверить отсутствие геномной ДНК, проведите контрольную работу без ОТ. Обе реакции должны быть отрицательными (без сигнала флуоресценции) в ПЦР в реальном времени.
  3. Чтобы гарантировать одинаковый уровень транскрипта между различными образцами, используйте хотя бы один референсный ген. Здесь были использованы сконструированные пары праймеров, кодирующие актин (прямой: 5'-CTCTTAACCCCAAAGCAAACAGG-3', обратный: 5'-GTGAGAGAACAGCCTGGATG-3') и 18SrRNA (прямой: 5'-CTTGATTCTATGGGTGGTGGTG-3', обратный: GTTAGCAGGCTGAGGTCTC-3'). В качестве мишени был выбран ген TLP (прямой: 5'-GTGGGCAACAATTGGACCCAG-3', обратный: 5'-CATTCGATCCGGAAAGGCTAC-3'). Размер каждого амплифицированного фрагмента составлял около 100.о.
  4. Для реакции объемом 25 мкл добавьте 12,5 мкл 2x SYBR Green QPCR Master Mix, кДНК (≥20 нг), по 400 нМ каждого праймера и 30 нМ пассивного эталонного красителя ROX (входит в комплект). Отрегулируйте объем образца до 25 μл с помощью воды, не содержащей нуклеаз.
  5. Реакции проводили в амплификаторе QPCR по следующей программе: начальная денатурация при 95 °C в течение 10 мин до активации полимеразы; 40 циклов денатурации (95 °C в течение 30 сек), отжиг (61 °C в течение 60 сек) и удлинение (72 °C в течение 1 мин); с последующей кривой диссоциации (95 °C в течение 60 сек; 55 °C в течение 30 сек, 95 °C в течение 30 сек). Кривая диссоциации необходима для определения отсутствия димеров праймера, которые могут быть обнаружены по дополнительному пику.
  6. Определяют эффективность (Е) каждой ПЦР-реакции с помощью метода Лю и Сэйнта8. КПД может отклоняться от линейной части кривой усиления. Здесь относительное число ампликонов (Rn, A) одной точки цикла (CPA) связано с количеством ампликонов (Rn, B) другого цикла (CPB).
  7. Анализируйте результаты ПЦР в реальном времени с помощью программного инструмента Relative Expression Software Tool (REST 2009, http://www.gene-quantification.de/rest-2009.html) или аналогичного программного обеспечения. Используйте программу для расчета коэффициента экспрессии гена в обработанном образце по сравнению с контролем.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Для выделения отдельных желез из тканей ловчих кувшинов Nepenthes была разработана и применена методика механизированной микродиссекции. Платформа для микропрепарирования должна быть оснащена микропинцетом, прикрепленным к микроманипулятору, которым, в свою очередь, управляют с помощью панели управления. Отдельные железы, видимые под микроскопом, захватывались пинцетом, который зажимал ткань железы и механически удалял ее (Рисунок 4A).

Железистую ткань переносили непо...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В течение долгого времени исследования секреторных структур растений, в частности трихом, проводились в основном по анатомии и носили чисто описательный характер. Существует большое количество публикаций такого типа, как обобщено в обзорах9-11. Наши биохимические и молекулярные знания о секреторных структурах растений все еще ограничены, несмотря на некоторые ранние замечательные работы , например, о железистых трихомах мяты, показывающие, что железистые трихомы являются местом биосинтеза монотерпенои...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы благодарим команду теплиц MPI-CE в Ботаническом саду Университета Фридриха Шиллера, Йена, за выращивание растений, а также Вильгельма Боланда и Общество Макса Планка за поддержку.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
RNAqueous-Micro KitLife Technologies GmbH, ГерманияAM1931Выделение общей РНК, 50 образцов
Dynabeads mRNA DIRECT Micro KitLife Technologies GmbH,Германия 610115 мл Dynabeads Oligo (dT)25
DynaMag-2 magnetLife Technologies GmbH,Германия 12321D
SuperScript CellsDirect cDNA Synthesis SystemLife Technologies GmbH, Германия18080-20025 реакций
РНКазеOUTLife Technologies GmbH, Германия10777-019Ингибитор рназы, 5 000 единиц
Случайные гексамеры (0,4 μ g/μ l)QIAGEN GmbH, Германия79236100 μ l
10 мМ dNTP Mix, класс молекулярной биологииFermentas GmbH, ГерманияR01921 мл
Taq ДНК-полимераза, (рекомбинантная)Fermentas GmbH, ГерманияEP0402Поставляется с 10x буфером Taq (с KCl или (NH4)2SO4) и 25 mM MgCl2
TURBO DNaseLife Technologies GmbH, ГерманияAM22381,000 единиц
AgaroseCarl Roth GmbH Co. ГерманияT846.3
GeneRuler Low Range DNA ladder, готовый к использованиюFermentas GmbH,Германия SM119350 μ
g Brilliant II SYBR Green QPCR Master MixAgilent Technologies, Inc., США600828 Single Kit
RNaseZAPSigma-Aldrich, Тауфкирхен, ГерманияR2020
Лезвие бритвыCarl Roth GmbH Co.,Германия CK08.1
ПинцетCarl Roth GmbH Co., Германия2801.1 / 2855.1
GE NanoVue спектрофотометрGE Healthcare Europe GmbH, Германия28-9569-62
Градиент MastercyclerEppendorf AG, Гамбург, Германия5331 000.010
Mx3000P Система ПЦР в реальном времениStratagene, США 401403
Agagel Стандартная горизонтальная гелевая камера для электрофорезаBiometraСнятый с производства
Микроманипуляторaura optik gmbhaurekaОснащен микрощипцами
СтереомикроскопCarl Zeiss Microscopy, Йена, ГерманияSteREO Lumar.V12Оснащен набором фильтров AxioCam
Lumar 01Carl Zeiss, Microscopy, Йена, Германия485001-0000-000УФ-фильтр
Lumar Фильтр набор 09Carl Zeiss, микроскопия, Йена, Германия485009-0000-000не-УФ фильтр

Ссылки

  1. Adlassnig, W., Peroutka, M., Land, I., Lichtscheidl, I. K. Glands of carnivorous plants as a model system in cell biological research. Acta Bot. Gall. 152, 111-124 (2005).
  2. Darwin, C. Insectivorous plants. , John Murray. London. (1875).
  3. Mithöfer, A. Carnivorous pitcher plants: Insights in an old topic. Phytochemistry. 72, 1678-1682 (2011).
  4. Owen Jr., T. P., Lennon, K. A., Santo, M. J., Anderson, A. N. Pathways for nutrient transport in the pitchers of the carnivorous plant. Nepenthes alata Ann. Bot. 84, 459-466 (1999).
  5. Brandt, S. P. Microgenomics: gene expression analysis at the tissue-specific and single-cell levels. J. Exp. Bot. 56, 495-505 (2005).
  6. Hölscher, D., Schneider, B. Application of laser-assisted microdissection for tissue and cell-specific analysis of RNA, proteins, and metabolites. Prog. Bot. 69, 141-167 (2008).
  7. Rottloff, S., Müller, U., Kilper, R., Mithöfer, A. Micropreparation of single secretory glands from the carnivorous plant Nepenthes. Anal. Biochem. 394, 135-137 (2009).
  8. Liu, W. H., Saint, D. H. A new quantitative method of real time reverse transcription polymerase chain reaction assay based on simulation of polymerase chain reaction kinetics. Anal. Biochem. 302, 52-59 (2002).
  9. Werker, E. Trichome diversity and development. Adv. Bot. Res. Inc. Adv. Plant Pathol. 31, 1-35 (2000).
  10. Fahn, A. Structure and function of secretory cells. Adv. Bot. Res. Inc. Adv. Plant Pathol. 31, 37-75 (2000).
  11. Juniper, B. E., Robins, R. J., Joel, D. M. The carnivorous plants. , Academic Press. London. (1989).
  12. Gershenzon, J., McCaskill, D., Rajaonarivony, J., Mihaliak, C., Karp, F., Croteau, R. Isolation of secretory-cells from plant glandular trichomes and their use in biosynthetic-studies of monoterpenes and other gland products. Anal. Biochem. 200, 130-138 (1992).
  13. Rontein, D., Onillon, S., et al. CYP725A4 from yew catalyzes complex structural rearrangement of taxa-4(5),11(12)-diene into the cyclic ether 5(12)-oxa-3(11)-cyclotaxane. J. of Biol. Chem. 283 (5), 6067-6075 (2008).
  14. Aharoni, A., Jongsma, M. A., Bouwmeester, H. J. Volatile science? Engineering of terpenoid biosynthesis in plants. Trends Plant Sci. 10, 594-602 (2005).
  15. Mithöfer, A., Boland, W., Maffei, M. E. Chemical ecology of plant-insect interactions. Ann. Plant Rev. 34, 261-291 (2009).
  16. Kennedy, G. G. Tomato pests, parasitoids, and predators: Tritrophic interactions involving the genus Lycopersicon. Ann. Rev. Entomol. 48, 51-72 (2003).
  17. Mithöfer, A., Boland, W. Plant defense against herbivores: Chemical aspects. Ann. Rev. Plant Biol. 63, 431-450 (2012).
  18. Rottloff, S., Stieber, R., Maischak, H., Turini, F. G., Heubl, G., Mithöfer, A. Functional characterization of a class III acid endochitinase from the traps of the carnivorous pitcher plant genus, Nepenthes. J. Exp. Bot. 62, 4649-4647 (2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Nepenthes
Выделение жизнеспособных многоклеточных желез от ткани Хищные растения, Nepenthes
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.