Профилактическая и терапевтическая вакцинация часто не удается стимулировать сильный иммунный ответ за счет неделе дренажа вакцины в лимфатические узлы и, следовательно, плохой участие иммунных клеток. Прямым инъекции вакцины к лимфоузлах так называемый внутрилимфатическое инъекция эффективность вакцины можно сильно улучшены и доз вакцины можно уменьшить.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Внутрилимфатическое иммунотерапия и вакцинации у мышей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Вакцины обычно вводят подкожно или внутримышечно для стимуляции иммунного ответа. Успех это требует эффективного дренажа вакцины к лимфатическим узлам, где антиген представляющие клетки могут взаимодействовать с лимфоцитами для генерации хотели иммунных реакций. Сила и тип иммунных реакций, индуцируемых также зависит от плотности или частоты взаимодействий, а также микросреды, особенно содержания цитокинов. Как только минуту доля периферии введенных вакцин достигает лимфатических узлов, вакцинация мышей и людей проводились путем прямой инъекции вакцины в паховых лимфатических узлов, то есть внутрилимфатическое инъекции. В человеке, процедура руководствуется ультразвука. У мышей, небольшой (5-10 мм) надрез в паховой области анестезированных животных, лимфатический узел локализуется и иммобилизованных пинцетом, а объем 10-20 мкл вакцины вводят под визуальным контролем.Разрез закрывается с помощью одного стежка с помощью хирургических швов. Мыши были вакцинированы с плазмидной ДНК, РНК пептида, белка, частиц и бактерий, а также в качестве адъювантов, и наблюдалось сильное повышение иммунных реакций против всех типов вакцин. Внутрилимфатическое метод вакцинации особенно подходит в ситуациях, когда обычные вакцинация вырабатывает недостаточное иммунитет или где количество доступной вакцины ограничено.
Введение
Вакцины обычно вводят подкожно или внутримышечно для стимуляции иммунного ответа. Успех этой процедуры требует эффективного дренажа вакцины в лимфатические узлы, где антиген представляющие клетки могут взаимодействовать с лимфоцитами для генерации Т-и ответов B-клеток. Кроме того, прочность и тип иммунных реакций, индуцируемых также зависит от плотности или частоты таких взаимодействий, так как сама микросреды, особенно содержания цитокинов. Как только небольшая часть вакцины вводят в периферийной ткани достигает лимфатического узла, прививки мышей и человека путем прямой инъекции вакцины в лимфатических узлах, сайт иммунные ответы были сгенерированы, были выполнены.....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Анестезия мышей
- Подготовьте анестетики, смешивая кетамин (диссоциативной обезболивающий) и ксилазина (седативное и обезболивающее) в буферном растворе. Концентрации кетамина и ксилазина в конечном растворе 12,5 и 2 мг / мл, соответственно.
- Введите анестетиков в мышах путем внутрибрюшинного введения с помощью шприца с 25-30 г иглы. С помощью 0,1 мл/10 г массы тела.
- Нанести глазной мази для глаз мышами в целях предотвращения высыхания роговицы.
- Убедите, что мышь достаточно наркозом, зажимая его ногу или палец с пинцетом. Если мышь не реагирует с рефлексами на крайнем случае, перейти к операции. Если мышь реагирует на крайнем ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Порядок внутрилимфатическое инъекций у мышей, несмотря на хирургическое природы, является прямым и относительно быстро. Обученный человек может выполнить процедуру в 3-4 мин. Разрез, замкнутое один стежок обычно заживает в течение двух дней (рис. 1)
Внутрилимфатическое вакцинации или иммунизации была выполнена с мРНК, ДНК плазмиды, пептиды, белки, вирусов и бактерий. Рисунок 2 иллюстрирует выработку антител после иммунизации белка фосфолипазы А2 (PLA2), осно.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Внутрилимфатическое иммунизации и иммунотерапия как было показано, не подходить для стимуляции обоих реакции антител и Т-клеточных реакций. Как показано в этом видео-статьи, внутрилимфатическое процедура вакцинации является быстрый и простой способ для стимулирования сильный иммунный ответ у мышей. Обученный хирург может выполнить процедуру в течение 3-4 мин. В работе сессии также могут быть разделены между двумя хирургами, где, как правило, делают анестезию и наложение швов и второй хирург делает разрез и инъекции. Эфф.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
ТМК назван как изобретатель патентов, связанных с внутрилимфатическое иммунотерапии в человеке. ТМК была научным консультантом и получил командировочные расходы из ImVisioN GmbH, Cytos биотехнологии, MannKind Corporation, и XBiotech США Инк PJ не имеет конфликта интересов раскрывать.
Благодарности
Авторы выражают благодарность за помощь в экспериментальной разработке метода внутрилимфатическое иммунизации у мышей из Iris Эрдмана, Барбара фон Бейста, и Юлия Мария Мартинес-Гомес. Спасибо также Мэгги Аррас и Никола Cesarovic за разрешение использовать их хирургическое театр для этого видео производства.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Кетамин (кетазол-100) | Graeub AG, Швейцария | Анестетики | |
| Ксилазин (Ромпун) | Bayer, Германия | Анестетики | |
| Viscotears Eye-Gel | Novartis, Швейцария | Для предотвращения пересыхания глаз во время анестезии. | |
| BD Micro-Fine 0,5 мл | BD Medical, Франция | 29 г Инсулиновые шприцы с постоянно прикрепленными иглами | |
| 6-0 Dermalon Monofilament Nylon | Covidien, MA, США | Для швов (0,7 метрических, 18 G, 45 см, синий) | |
| Изогнутые щипцы, 4,5 in | Polymed, Швейцария | Для разреза и удержания лимфатических узлов | |
| Прямые хирургические ножницы, 4,5 in | Polymed, Швейцария | Для разреза | |
| Иглодержатель, 5.5 в | Polymed, Швейцария | Для закрытия разреза швом |
Ссылки
- Johansen, P., et al. Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity. Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).
- Maloy, K. J., et al. Intralymphatic immunization enhances DNA vaccination. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
