Amoebal сокультивирования это система культуры клеток с помощью клейкого амеб выборочно растут внутриклеточных возбудителей способны противостоять фагоцитарные клетки, такие как амебы и макрофагов. Таким образом, он представляет собой ключевой инструмент для себя новые инфекционные агенты. Amoebal обогащение позволяет открытие новых amoebal видов и их специфических внутриклеточных бактерий.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Открытие новых внутриклеточных патогенов на Amoebal сокультивирования и подходов Amoebal обогащению
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Внутриклеточных патогенов, таких как легионеллы, микобактерий и Chlamydia-подобных организмов трудно выделить, потому что они часто растут плохо или вообще не на селективной среде, которые обычно используются для выращивания бактерий. По этой причине, многие из этих патогенов были обнаружены только недавно или после важных вспышек. Эти патогены часто связаны с амеб, которые служат клетке-хозяине и позволить выживание и рост бактерий. Мы намерены здесь, чтобы предоставить демонстрацию двух методов, которые позволяют выделение и характеристика внутриклеточных патогенов присутствует в клинических или проб окружающей среды: amoebal сокультивирования и amoebal обогащению. Amoebal сокультивирования позволяет восстановление внутриклеточных бактерий путем посева исследуемого образца на качестве amoebal газон, который может быть заражен и лизируют внутриклеточных бактерий, присутствующих в образце. Amoebal обогащение позволяет восстановление амеб присутствует в клинических или окружающей образца. Чтбудет может привести к открытию новых amoebal видов, но и новых внутриклеточных бактерий, растущих в частности, в этих амеб. Вместе эти два методы помогают открыть для себя новые внутриклеточные бактерии, способные расти в амеб. Из-за их способности инфицировать амебы и противостоять фагоцитоз, эти внутриклеточных бактерий также может избежать фагоцитоз макрофагов и, таким образом, быть патогенными для высших эукариот.
Введение
До появления молекулярной диагностики, микроорганизмы, присутствующие в окружающей среде нишах или в клинических образцах часто обнаруживается путем культивирования их на разных селективных средах, в основном на агар в чашках Петри. Фенотип бактериальных колоний и их метаболической активности бактерий затем дают классификацию на видовом уровне. Бульон также могут быть использованы для повышения чувствительности детектирования. Тем не менее, оба метода не позволяют восстановление бактерий, которые растут медленно или вообще не на этих средах. Это причина, почему молекулярные подходы так широко используется в настоящее время. Тем не менее, обнаружение ДНК не дает никак....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Amoebal сокультивирования
1.1 Подготовка образцов
- Образец окружающей среды
- Пробы воды
Фильтр пробу воды (500 мл до 1 л) через мембрану с размером пор 0,22 мкм. Затем встряхнуть мембрану в амеба солевой среде PAS страницы (120 мг NaCl, 4 мг MgSO 4 • 7H 2 O, 4 мг CaCl 2 • 2H 2 O, 142 мг Na 2 HPO 4, и 136 мг KH 2 PO 4 в 1 л дистиллированной воды). - Твердые образцы
Ресуспендируют твердых образцов, как почвы или песка образцов и полутвердых образцов, таких как акти....
- Пробы воды
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Использование amoebal сокультивирования и amoebal обогащение, целый ряд экологических и / или патогенных бактерий были обнаружены (табл. 1).
Amoebal сокультивирования использовался нашей группой и другими анализировать пробы окружающей среды, водоочистные сооружения и систем водоснабжения. Широкий спектр микроорганизмов могут быть выделены с этой техникой. Наиболее распространенные бактерии, выделенные на amoebal сокультивирования являются членами Mycobacterium рода.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Amoebal сокультивирования и amoebal обогащения являются эффективные методы, которые позволили изоляцию многих новых бактериальных и amoebal видов. Результаты, полученные с помощью этих методов подтверждения вездесущий присутствие как амебы и амебы-стойкой бактерий в окружающей среде, и что самое интересное в искусственных водных сетей, которые считаются управляться химических обработок, таких как хлорирование и озонирование. Amoebal сокультивирования и amoebal обогащения являются необходимыми инструментами, чтобы изолир.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующие финансовые интересы.
Благодарности
Мы благодарим Pr. Бернар Ла Скола за полезные технических советов и интересной дискуссии на amoebal сокультивирования и amoebal обогащения. Мы также благодарим доктора Винсента Томаса за его помощь в реализации технику в нашей лаборатории.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Моногидрат глюкозы | Merck, Дармштадт, Германия | 108342 | |
| 0,22 гкм; m мембрана размера пор | Merck Millipore, Дармштадт, Германия | SCVPU11RE | |
| протеозный пептон | Becton-Dickinson, Franklin Lakes, Нью-Джерси | 211693 | |
| экстракт дрожжей | Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ | 212750 | |
| Колбы для клеточных культур | Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ | 353135 | |
| Kova slide | Hycor, Индианаполис, Индианаполис, Индиана | 87144 | |
| микропланшеты для клеточных культур | Corning Inc, Corning, NY | 3524 | |
| Diff-Quik набор для окрашивания | Siemens Healthcare diagn., Мюнхен, Германия | 130832 | |
| Ziehl fuchsin | Fluka, Сент-Луис, Мичиган | 21820 | |
| основной фуксин | Sigma, Сент-Луис, Мичиган | 857843 | |
| фенол | Сигма, Сент-Луис, MI | P1037 | Коррозионный и мутагенный |
| малахитовый зеленый оксалат | Fluka, Сент-Луис, Мичиган | 63160 | |
| Параформальдегид 16% раствор | Электронная микроскопия Sciences, Хатфилд, Пенсильвания | 15710 | |
| Сапонин | Сигма, Сент-Луис, Мичиган | 84510 |
Ссылки
- Fraser, D. W., et al. Legionnaires' disease: description of an epidemic of pneumonia. New Engl. J. Med. 297, 1189-1197 (1977).
- McDade, J. E., et al. Legionnaires' disease: isolation of a bacterium and demonstration ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
