Method Article

Выделение и функциональная характеристика человека желудочка кардиомиоцитов из свежих хирургических образцов

DOI:

10.3791/51116

⸱

April 21st, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department NeuroFarBa, Division of Pharmacology, University of Florence, 2Department of Clinical and Experimental Medicine, Division of Physiology, University of Florence

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Современные знания на клеточном основе сердечных заболеваний в основном опирается на исследования на моделях животных. Здесь мы опишем и проверить новый метод для получения одного жизнеспособного кардиомиоциты от небольших хирургических образцах миокарда человека желудочка. Миоциты человека желудочковая могут быть использованы для электрофизиологических исследований и тестирования на наркотики.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Кардиомиоциты от больных сердец подвергаются сложных ремоделирования процессов, связанных с изменениями в структуре клеток, сокращение возбуждения муфты и мембраны ионных токов. Эти изменения, вероятно, будут ответственны за увеличение аритмогенного риска и сократительных изменений, ведущих к систолического и диастолического дисфункции у кардиологических больных. Тем не менее, большая часть информации об изменениях функции миоцитов при кардиологических заболеваниях пришел из животных моделей.

Здесь мы опишем и проверить протокол для изоляции жизнеспособных миоцитов от небольших хирургических образцах миокарда желудочков у пациентов, перенесших операции на сердце операции. Протокол описан подробно. Электрофизиологические и внутриклеточных измерений кальция, как сообщается, продемонстрировать возможность ряда измерений одиночных клеток в кардиомиоциты желудочков человека, полученных с помощью этого метода.

Протокол сообщил онповторно может быть полезно для будущих исследований в области клеточной и молекулярной основе функциональных изменений человеческого сердца в присутствии различных сердечных заболеваний. Кроме того, этот метод может быть использован для идентификации новых терапевтических целей на клеточном уровне и для проверки эффективности новых соединений на кардиомиоцитов человека, с прямым поступательного стоимости.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Рассечение электрофизиологических свойств миокарда прогрессировала заметно после разработки методов для одной изоляции сердечной миоцитов. Последние достижения в понимании сердечной возбуждения сжимающих Муфта (ИС-связь) также стало возможным благодаря способности изоляции жизнеспособных одиночных кардиомиоцитов, которые сохраняют все физиологические свойства неповрежденной ткани. Регулярно используются методы патч зажим для изучения функции и фармакологической модуляции сердечного сарколемных ионных токов. Записи динамики внутриклеточного кальция с Са 2 + чувствительных красителей также регулярно выступал на отдельных кардиомиоцитов из различных здоровых ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Экспериментальные протоколы о человеческой ткани были одобрены этическим комитетом Кареджи University-больницы (2006/0024713; обновляется мая 2009 года). Каждый пациент дали письменное информированное согласие.

1. Решения и Подготовка оборудования

Решения, описаны в таблице 1. Упрощенная схема последовательности операций процедуры выделения ячейка найдена на рисунке 1.

Решение СР DB КБ ТБ PS EB1 EB2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Описанный выше способ был использован для характеристики функциональных нарушений кардиомиоцитов, выделенных из межжелудочковой перегородки пациентов с гипертрофической кардиомиопатией (НСМ), перенесших операции myectomy, по сравнению с не являющихся В противном случае гипертрофических хирургических больных 21. Результаты, содержащиеся в данном разделе, получена из этой работы 21 и показаны здесь в качестве примера того, как этот метод может быть использован для характеристики изменений функции кле.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы описали и утверждена метод, чтобы изолировать жизнеспособные миоциты от хирургических образцах миокарда человека желудочка. Начиная с описанными ранее протоколов, которые были успешно использованы для изолированных клеток от предсердий хирургических образцов, техники, чтобы позволить разделение отдельных жизнеспособных миоцитов от больного миокарда желудочков была разработана и точно выверенных. Первые сообщения показали, что изоляция отдельных кардиомиоцитов из кусков предсердий и желудочков ткани избирательно наруш.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующие финансовые интересы.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана ЕС (STREP проекта 241577 "Большое сердце", 7-й Европейской рамочной программы, CP), Menarini международных операций Люксембурге (AM), Телемарафон GGP07133 (СР) и Gilead Sciences (AM).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Одноосновной фосфат калия (KH2PO4)Sigma-AldrichP9791
Магния сульфат гептагидрат(MgSO4*7H2O)Sigma-AldrichM1880
HEPESSigma-AldrichH3375
АденозинСигма-ОлдричA9251
D-(+)-ГлюкозаSigma-Aldrich<a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g8270?lang=it& region=IT">G8270
MannitolSigma-AldrichM4125
ТауринSigma-AldrichT0625
Гидроксид калия (KOH)Sigma-AldrichP5958
Хлорид натрия (NaCl)Sigma-AldrichS7653
Хлорид калия (KCl)Sigma-AldrichP9333
Sodium phosphate dibasic (Na2HPO4)Sigma-AldrichS7907
Бикарбонат натрия (NaHCO3)Sigma-AldrichS6297
Бикарбонат калия (KHCO3)Sigma-Aldrich237205
Пируват натрияSigma-AldrichP2256
2,3-Бутандион моноксимSigma-AldrichB0753
Гидроксид натрия(NaOH)Sigma-AldrichS8045
L-Глутаминовая кислота монокалия соль моногидратSigma-Aldrich49601
Пировиноградная кислотаSigma-Aldrich107360
3-Гидроксимасляная кислотаSigma-Aldrich166898
Аденозин 5′-трифосфат дикалия соль дигидрат (K2-ATP)Sigma-AldrichA8937
CreatineSigma-AldrichC0780
Янтарная кислотаSigma-AldrichS3674
Этиленгликоль-бис(2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N′,N′-тетрауксусная кислота (EGTA)Sigma-AldrichE0396
Альбумин из бычьей сывороткиSigma-AldrichA0281
Хлорид магния (MgCl2)Sigma-AldrichM8266
Коллагеназа из Clostridium histolyticum, тип VSigma-AldrichC9263
Протеиназа, бактериальная, тип XXIVSigma-AldrichP8038
Раствор хлорида кальция, ~1 M в H2OSigma-Aldrich21115
Кальция хлорид 0,1 М растворSigma-Aldrich53704
Метаносульфонат калияSigma-Aldrich83000
FluoForte РеагентEnzo Life SciencesENZ-52015
Концентрат Powerload, 100XLife TechnologiesP10020
Перфузионная система Fast-Step WarnerInstrumentsVC-77SP
Амфотерицин B солюбилизированныйSigma-AldrichA9528
Multiclamp 700B патч-клэмп усилительМолекулярные устройства
Digidata 1440AМолекулярные устройства
pClamp10.0 Молекулярные устройства
для разложенияCUSTOMCUSTOM Устройствоизготовлено на заказ в нашей лаборатории с использованием пластиковых трубок, литого Sylgard и двигателя; оно подробно описано на Рисунке 1C-1D и на Рисунке 7. Мы можем предоставить более подробную информацию по запросу.
Силиконовый эластомер для щеток метантенка DowCorningSYLGARD® 184
Вращающийся двигатель с регулируемой скоростью для метантенкаCrouzet Crouzet178-4765
Форма для литья щетокN.A.Н.А.Форма изготовлена на заказ из стандартных стержней из ПТФЭ диаметром 2,5 см.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dow, J. W., Harding, N. G., Powell, T. Isolated cardiac myocytes. I. Preparation of adult myocytes and their homology with the intact tissue. Cardiovascular Research. 15, 483-514 (1981).
  2. Dow, J. W., Harding, N. G., Powell, T. Iso....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Human Ventricular CardiomyocytesCardiomyocyte IsolationVentricular MyocardiumEnzymatic DigestionPatch Clamp RecordingAction Potential MeasurementCalcium Transient AnalysisCardioplegic SolutionStromal Vascular FractionCell Suspension

Related Articles