$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Корпус животных и эвтаназию: Все животные, используемые в этой демонстрации были размещены под свободных от патогенов условиях в соответствии с руководящими принципами уходу и использованию животных комитета институционального (IACUC) и Национального института здоровья (NIH).
Обеспечить животных со стандартным трудно гранул крыс кормом и водой экспромтом. Усыпить животных через два-шагового метода удушья диоксида углерода, двустороннего торакотомии в соответствии со стандартным протоколом UCSF, утвержденного IACUC. Выполните биомеханической тестирование в течение 24 часов жертвоприношения животных, чтобы избежать деградации тканей.
1. Подготовка и Рассечение крысиной нижней или верхней челюсти
- Удалить крысы челюсти, осторожно отделяя мембранной ткани и мышечной ткани вложения при сохранении всю нижнюю челюсть, в том числе венечного отростка и мыщелкового отростка (рис. 1) 15.
- Отдельные hemimandibles на машинеefully резки фиброзной ткани симфиза нижней челюсти с лезвие скальпеля.
Примечание: коронарные и мыщелковые процессы и ветвь нижней челюсти (рис. 1) должны быть удалены, если они физически препятствовать биомеханической тестирование 2-го моляра. - Разрежьте резцы, не подвергая пульповый, чтобы не препятствовать загрузку моляра.
2. Изготовление образцов для на месте сжатие Загрузка (рис. 2)
- Иммобилизации образца на стальной заглушкой с помощью материала, который значительно жестче, чем экспериментальных образцов перед загрузкой его в In Situ загрузочного устройства (рис. 2а).
Примечание: полиметилметакрилат (ПММА), использовали для иммобилизации образца в этом исследовании и избытка, если таковые были удалены с помощью зубной Explorer. - Совместите окклюзионную поверхность моляров (ы) процентной параллельно с АСМ металла образца диск с помощью прямой край в обасамолеты (т.е. мезиальная-дистальной и щечной языках).
- Создать корыто с тупым инструментом, окружающей коренные зубы.
Примечание: Это пространство должно служить "рвом", чтобы содержать лишнюю жидкость и поддержания тканей гидратации во время на месте погрузки. - Подготовьте поверхность зуба, чтобы создать для концентрической (рис. 2В) или эксцентричного (рис. 2С) загрузка с помощью зубной композит. Протравите поверхность зуба интереса с 35% гель фосфорной кислоты на окклюзионной поверхности в течение 15 сек.
- Промыть тщательно травителя деионизированной водой и высушить поверхность с помощью шприца воздух / вода или сжатого воздуха канистру. С исследователь, распространять каплю связующего в открытые створок в тонком слое. Лечение композита с дентального отверждения на свету.
Примечание: Все операции, включающие композиты должны быть выполнены без прямого света от лампы. Такие условия бы нежелательно ускорить процесс полимеризации, и Коулад предотвратить правильное размещение композита. Освещение номера является приемлемым. - Удалите излишки клеящего вещества из соседних зубов с тонкой скальпелем или лезвием бритвы.
- Поместите текучей зубной композит на поверхности после подготовки поверхности и распространить его в пазах моляра (ы), представляющие интерес с помощью зубной Explorer.
- Expose композит для дентального отверждения на свету в течение 30 сек.
- Mold окклюзионной накопление около 3-4 мм с помощью стоматологической состава смолы, от окклюзионной плоскости моляра (ы) процентов и светового отверждения в течение 30 сек.
- Уменьшение верхнюю часть составного накопления к плоской поверхности, параллельной чтобы позволить последовательную схему загрузки во всех образцах с помощью линейки и высокой скорости наконечник.
Примечание: В биомеханической тестирования, другие образцы должны храниться в трис-фосфатным буферным раствором (TBS) с 50 мг / мл пенициллина, стрептомицина и 15.
3. Загрузка Drift устройств иЖесткость, Материал недвижимости Дифференцируя Возможность, на месте Загрузка волокнистого Джойнт
- Закрепите образец с композитного налипания на наковальне погрузки этапе, и тест на равномерной загрузке, как показано на рисунке 2B.
- Поместите шарнирный бумагу на поверхности композита с последующим загрузке образца в конечной нагрузки для проверки концентрической или эксцентрической нагрузки (фиг. 2В и 2С).
- Наведите TBS-пропитанной Kimwipe вокруг образца, чтобы обеспечить образца гидратации. Сделайте желоб вокруг образца и залейте его TBS сохранить орган увлажненной во время съемки.
- Входной пиковой нагрузки и скорости перемещения в программное обеспечение Deben для сжатия коренной зуб до желаемой пиковой нагрузки в размере смещения следующей иммобилизации hemimandible.
Примечание: Типичные показания должны включать реакционную нагрузку, поскольку материал сжимается с течением времени (чувствительность датчика нагрузки = 0,1N). От время загрузки и смещения времени, кривая нагрузки смещение для сжатого материала должно быть получено 16-18. Используя данные, собранные из циклов нагрузки, различные свойства соединения также могут быть определены. Жесткость сустава следует рассчитать по наклон линейной части (примерно 30% в прошлом данных) из загрузочной фазе нагрузки кривой зависимости смещения 19.
4. Окрашивание мягких тканей, в PDL, с фосфовольфрамовой кислоты (PTA)
Примечание: Для повышения рентгеновского ослабления контрастности, PDL должны быть окрашены с 5%-ным раствором ОТА 20.
- Засыпка ПТА красящий раствор в чистую 1,8 мл стеклянный carpule и поместите загруженный carpule в шприц.
- Введите раствор медленно (5 мин / carpule) в PDL-пространстве соседних зубов, чтобы предотвратить повреждение конструкции тканей пародонта, окружающих зуб интересов.
Примечание: Вышеуказанные шаги должны бе не повторяется до тех пор приблизительно 5 полных carpules (9 мл) раствора вводят и может протекать в окружающие ткани. В нацелен образцы также можно замочить на ночь в оставшийся раствор ОТА (8 ч).
5. Рекомендуемые настройки сканирования μ-XCT
Выполните м-XCT со следующими настройками сканирования:
| Цель Увеличение | 4X, 10X |
| 1800 изображений |
| Напряжение рентгеновской трубки | 75 кВп (50 кВп для PTA окрашенных образцов) |
| 8 Вт |
| Время воздействия | ~ 8-25 сек * |
| ~ 4 мкм (4X цель), ~ 2 мкм (10X цель) ** |
* Время экспозиции может варьироваться в зависимости от геометрии и оптической плотности образца и рентгеновской трубки В.О.ltage.
** Фактический пикселов будет несколько отличаться в зависимости от конфигурации источника, образца и детектора.