Методическая статья

Визуализация нейробласта Цитокинез Во С. Элеганс Эмбриогенеза

DOI:

10.3791/51188

⸱

12 марта 2014 г.

 ,  , 
1Department of Biology, Concordia University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает, как изображение делящихся клеток в ткани в Caenorhabditis Элеганс эмбрионов. В то время как несколько протоколов описывают, как разделение изображения клеток в раннем эмбрионе, этот протокол описывает, как изображение деление клетки в развивающемся ткани во время середины позднего эмбриогенеза.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает использование флуоресцентной микроскопии для изображения делящихся клеток в развитии Caenorhabditis Элеганс эмбрионов. В частности, этот протокол фокусируется на том, как изображение деления нейробластов, которые находятся под клеток эпидермиса и могут иметь важное значение для эпидермального морфогенеза. Формирование тканей имеет решающее значение для развития многоклеточных и полагается на внешние сигналы из соседних тканей. С. Элеганс является отличным модельным организмом для изучения тканей морфогенез в естественных условиях из-за его прозрачности и простой организации, что делает его ткани легко изучать с помощью микроскопии. Брюшные корпус является процесс, в котором вентральной эмбриона покрыта одним слоем эпителиальных клеток. Это событие, как считается, способствует основных нейробластах, которые обеспечивают химические сигналы наведения посредничать миграцию вышележащих эпителиальных клеток. Тем не менее, нейробласты весьма пролиферативного а также могут действоватьв качестве субстрата для механической вентральных клеток эпидермиса. Исследования с использованием этого экспериментальный протокол может раскрыть важность межклеточной коммуникации во время формирования ткани, и могут быть использованы для выявления роли генов, участвующих в клеточном делении в развивающихся тканях.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В то время как существуют протоколы, описывающие, как разделение изображения клеток в начале C. Элеганс эмбрионов, этот протокол описывает, как разделение изображения клеток в ткани во время середине эмбриогенеза. Одна из основных проблем в визуализации организмов в процессе разработки была их чувствительность к фототоксичности. Тем не менее, расширение доступности к вращающемся диске конфокальной микроскопов или прокатилась микроскопов полевых позволило более широкое применение визуализации. Обе системы используют твердотельные лазеры и рассеянный свет, ограничивая уровни УФ, что организмы подвергаются. Тем не менее, Widefield стенды-прежнему можно использо....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка пластин для Поддержание Worm штаммов и исполнительских RNAi

  1. Нематоды Рост Медиа Плиты
    1. Плиты
      1. Подготовка нематода питательной среды (NGM) пластины для поддержания штаммов червь и выполнять генетические кресты. Смешайте 3 г NaCl, 17 г агара и 2,5 г бактопептона с 1 л дистиллированной воды в 2-литровую колбу и добавить панель металл перемешивания.
      2. Автоклав колбу для растворения агара и стерилизовать средства массовой информации. Затем колбу помещают на магнитной мешалки и позволяют средства массовой информации остыть при перемешивании.
      3. После того, как средства массовой информации остынет и еще несколько теплы....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это экспериментальный протокол описывает, как разделения изображения клеток в С. Элеганс эмбрионов во время середине эмбриогенеза. В частности, он описывает, как изображения нейробластов, которые могут способствовать эпидермальный морфогенез. Эпидермального морфогенез происходит за счет комбинации изменения формы клеток эпидермиса, миграции и адгезии, но и опирается на химических или механических сигналов от основных нейробластах (рис. 1В). Нейробласты выделяют сигналы наведения, которые приним.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает использование различных видов микроскопии в изображение клеточных делений в течение середине эмбриогенеза. В частности, этот протокол подчеркивает, как изображение разделение нейробластах, клетки, которые могут способствовать эпидермальный морфогенез. Межклеточных коммуникация важна для формирования тканей в процессе развития многоклеточных и С. Элеганс превосходная модель для изучения формирования тканей в естественных условиях. Один случай, который хорошо изображает взаимодейс.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы признать, что эта работа была поддержана естественным наукам и инженерным исследовательского совета Канады (NSERC) гранта.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
АгарБиоШоп Канада Инк.#AGR001.1Для изготовления пластин C. elegans NGM и RNAi plates
AgarBio Basic Inc.#9002-18-0Для изготовления бактерий LB агаровые пластины
AgaroseBioShop Canada Inc.#AGA001.500
Антитело против мышей Alexa Fluor 488Life Technologies Corporation (Invitrogen)#A11029
Антитело против мышей против GFPRoche Applied Science#11814460001
Антитело против кролика Alexa Fluor 568Life Technologies Corporation (Invitrogen)#A11011
AmpicillinBioShop Canada Inc.#AMP201.5Хранить порошок при температуре 4° С и растворенный ампициллин при -20°С; C
Bactopetone  (пептон-А)Био Бейсик Инк.
CaCl2 (хлорид кальция)BioShop Canada Inc.#C302.1
CholesterolBioShop Canada Inc.#CHL380.25Растворить в этаноле
DAPI Sigma-Aldrich#D9542Использование для окрашивания нуклеиновых кислот (ДНК)
GlycerolBioShop Canada Inc.#GLY001.1
IPTG (изопропилтио-&бета;-галактозид)Bio Basic Inc.#367-93-1Хранить порошок и растворенный ИПТГ при -20° C
KH2PO4 (фосфат калия, моноосновный)BioShop Canada Inc.#PPM666.1
K2HPO4 (фосфат калия, двухосновный)BioShop Canada Inc.#PPD303.1
L4440  (вектор подачи)Addgene#1654Хранить в виде запасов глицерина при -80 °°; C
MgSO4    (сульфат магния)BioShop Canada Inc.#MAG511.500
NaCl (хлорид натрия)Bio Basic Inc.
Na2HPO4 (фосфат натрия, двухосновный)Bio Basic Inc.#7558-79-4
Сыворотка нормального осла (NDS)Wisent Bioproducts#035-110
n-Пропил-3,4,5-тригидроксибензоат (пропилгаллат)Альфа Аэзар#A10877
Поли-L-лизинСигма-Олдрич#P8920Для достижения оптимальных результатов покрытие микроскопа слайдами три раза 
СтрептомицинBioShop Canada Inc.#STP101.50Хранить порошок при 4°°С; С и растворенный стрептомицин при -20°С;
C Тетрациклин BioShopCanada Inc.#TET701.10Хранить порошок при 4°С; С и растворенный тетрациклин при -20°С; C
Tween-20Bio Basic Inc.CAS#9005-64-5
ТриптонБиоШоп Канада Инк.#TRP402.500
Дрожжевой экстрактBio Basic Inc.#8013-01-2
#G213

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  2. Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., Mello, C. C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-81....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи