Мы описываем анализ матригельной пробки, чтобы проиллюстрировать ангиогенный потенциал пула факторов, секретируемых раковыми клетками, используя два взаимодополняющих метода визуализации: ультразвук и эндомикроскопию. Матригель, гель, имитирующий внеклеточный матрикс (ВКМ), используется для введения хозяину (мыши) ангиогенных факторов, секретируемых в кондиционированной среде (КМ).
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Функция контроля и морфология сосудистой Завербован факторов, секретируемых быстрорастущих опухолевых генерирующих клеток
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Подкожной матригель плагин анализ у мышей методом выбора для оценки в естественных условиях про- и анти-ангиогенных факторов. В этом способе желаемые факторы вводятся в холодной жидкости ECM-имитируют гель, который, после подкожной инъекции, затвердевает с образованием среды, имитирующего среду рака. Эта матрица позволяет проникновение клеток-хозяев, таких как эндотелиальные клетки, а следовательно, к образованию сосудистой.
В этом мы предлагаем новую модифицированную Матригель штекер анализа, которые могут быть использованы, чтобы проиллюстрировать ангиогенный потенциал пула факторов, секретируемых раковых клеток, в отличие от конкретного фактора (например, bFGF и VEGF) или агента. Вилка, содержащий ECM-мимические гель используется, чтобы ввести множество (т.е., мыши) с бассейном факторов, выделяемых на КМ быстрорастущих опухолей, генерирующих клеток глиобластомы. Ранее мы описали обширную сравнение ангиогенного потенциалаU-87 мг глиобластомы человека и его бездействующим, полученных клона, в этой системе модели, показывающий индуцированный ангиогенез в U-87 мг родительских клеток. CM готовится путем фильтрации, собранные СМИ из сливной культуры ткани пластин любой клеточной линии следующие 48 ч инкубации. Таким образом, он содержит только факторы, секретируемые клетками без самих клеток. Описанный здесь сочетание двух методов визуализации, микропузырьки контрастным усилением ультразвуковой визуализации и прижизненный расслаивается-конфокальной эндомикроскопии, для точного, в режиме реального времени характеристике степени, морфологии и функциональности новообразованных сосудов в пределах зажигания.
Введение
Матригель плагин ангиогенез анализ был впервые описан Kibbey и др. В 1992, где он был использован для оценки ангиогенеза стимуляцию пептидной SIKVAV (Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val) 1. В отличие от других в естественных условиях ангиогенеза анализов, как мыши роговицы ангиогенеза или хорионалантоисной мембраны анализов, этот анализ относительно легко выполнить два. Вводят ECM-мимические Гель может содержать клетки, проангиогенных или антиангиогенные соединения и / или факторов. При оценке активности анти-ангиогенного соединения, вилка обычно содержит смесь фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и фактор роста фибробластов (FGF), а ант....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры на животных были одобрены и выполнены в соответствии со стандартами Тель-Авивского университета факультета Саклер Институциональные животных уходу и использованию комитета (IACUC).
1. кондиционером Подготовка СМИ
- Семена 2 × 10 6 U-87 мг клеток в 10 см культурального планшета в объеме 8 мл среды Игла в модификации Игла (DMEM), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% -ного раствора pencillin / стрептомицина / нистатина.
- Инкубируйте клетки при 37 ° C; 5% CO 2 до достижения полного слияния в 48 ч.
- Использование 10 мл шприц, вывести все ср....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Имплантация ECM-мимические пробки гель с см от быстро растущих кровеносных сосудов, линии опухоли генерации клеток U-87 MG, приводит к обширным ангиогенеза. Это сосудистая может быть широко изучены с помощью двух дополнительных методов визуализации.
Микропузырьки контрастная США томография показывает обширный набор функциональных кровеносных сосудов в пробку, иллюстрируя обширный поток крови в течение U-87 мг см загруженные зажигания, в отличие от незаметного кровотока в заглушками, содержащ.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Сочетание взаимодополняющих методов визуализации позволяет приобретение информации о различных компонентах ангиогенеза »микрососудов плотности, функциональности и морфологии. Загрузка CM на ECM-мимические зажигания гель создает микросреду опухоли, которая отделена от других клеточных популяций, как эндотелиальных клеток, которые были завербованы и extravasate в пробку.
Выполняя, параллельно микропузырьков контрастным усилением американского образа и расслаивающееся конфокальной микроскопии э.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Исследовательская лаборатория Сачи-Файнаро частично поддерживается Ассоциацией международных исследований рака (AICR), Германо-израильским фондом (GIF), ИЗРАИЛЬСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ (Грант No 1309/10), Swiss Bridge Award, а также грантами Израильской национальной нанотехнологической инициативы (INNI), программы Focal Technology Area (FTA): Наномедицина для персонализированной тераностики, и Фондом нанотехнологических исследований Леоны М. и Гарри Б. Хелмсли.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Ротационный вакуумный испаритель | - | -- | |
| факторы роста снижены без фенола Matrigel | BD Bioscience | FAL356231 | размораживание за ночь, при температуре 4 ° °; C на льду |
| крем для депиляции | - | - | - |
| Vevo2100 американская система визуализации | VisualSonics Inc. | - | Требуются предварительные знания в области эксплуатации или помощь авторизованного техника |
| 55 МГц 708 | VisualSonics Inc. | - | - |
| Vevo2100 программное обеспечение для обработки изображений | VisualSonics Inc. | - | - |
| VialMix | DEFINITY Imaging | VMIX-DEFINITY | |
| микропузырьки | DEFINITY Imaging | DE4 | Активация в течение 45 секунд с помощью VialMix перед использованием |
| CellVizio (Волоконный конфокальный эндомикроскоп) | Mauna Kea Technologies | - | Требуются предварительные знания в области эксплуатации или помощь авторизованного техника |
| ProFlex MiniO/30 зонд | Mauna Kea Технологии | - | - |
| 70 кД декстран с маркировкой FITC | Sigma-Aldrich | 46945-ImageCell | |
| программное обеспечение | Mauna Kea Technologies | - | |
| -Калибровочный комплект | Mauna Kea Technologies | - | - |
| Dulbecco' s модифицированный Eagle' s среда (DMEM) | Gibco Life Tecchnologies | 41965-039 | |
| Фетальная бычья сыворотка (FBS) | Biological Industries | 04-007-1A Раствор | |
| пенициллина/стрептомицина/нистатина | Biological Industries | 03-032-1B |
Ссылки
- Kibbey, M. C., Grant, D. S., Kleinman, H. K. Role of the SIKVAV site of laminin in promotion of angiogenesis and tumor growth: an in vivo Matrigel model. J Natl Cancer Inst. 84, 1633-1638 (1992).
- Passaniti, A., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
