Методическая статья

Развитие амелогенина-хитозана гидрогеля для

DOI:

10.3791/51606

⸱

10 июля 2014 г.

 , 
1Center for Craniofacial Molecular Biology, Herman Ostrow School of Dentistry, University of Southern California

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этой статье мы опишем протокол для изготовления в амелогенина-хитозан гидрогель для поверхностного реконструкции эмали. Организованная в росте месте кристаллов апатита в гидрогеля формируется плотный интерфейс эмаль-реставрационные, что позволит улучшить эффективность и долговечность реставраций.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Биомиметическая реконструкция эмали является важной темой в материаловедении и стоматологии как новый подход к лечению кариеса или эрозии зубов. Было доказано, что амелогенин является критически важным белком для контроля организованного роста кристаллов апатита. В данной работе мы представляем подробный протокол поверхностной реконструкции эмали с использованием нового гидрогеля амелогенин-хитозан. По сравнению с другими традиционными методами лечения, такими как местный фтор и жидкость для полоскания рта, этот метод не только может предотвратить развитие кариеса, но и способствует значительному и долговечному восстановлению эмали. Организованная эмалевидная микроструктура, регулируемая ассамблями амелогенина, может значительно улучшить механические свойства травленной эмали, в то время как плотная граница раздела эмаль-реставрация, образованная повторным ростом кристаллов апатита in situ, может повысить эффективность и долговечность реставраций. Кроме того, гидрогель хитозана прост в использовании и может подавлять бактериальную инфекцию, которая является основным фактором риска возникновения кариеса. Таким образом, этот биосовместимый и биоразлагаемый амелогенин-хитозановый гидрогель является перспективным в качестве биоматериала для профилактики, восстановления и лечения дефектной эмали.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Зубная эмаль — это твердая минерализованная поверхность зубов человека. Он состоит из многочисленных игольчатых кристаллов апатита, которые объединены в организованные параллельные призмы, чтобы обеспечить уникальную механическую прочность и биологическую защиту, которую обеспечивает эмаль1-2. В отличие от других минерализованных тканей, таких как кость и дентин, зрелая эмаль бесклеточная и не может восстанавливаться после значительной потери минералов1-2, что часто происходит в виде кариеса или эрозии зубов. Коммерчески доступные продукты, такие как фторсодержащие лаки, зубные пасты и жидкости для полоскания рта, эффективны для реминерализации эмали, но ни один из них не обладает потенциалом для стимулирования образования организованных кристаллов апатита. Клинически традиционное лечение для восстановления эмали включает в себя процедуру пломбирования искусственными материалами, такими как амальгама, керамика или композитная смола. Однако эти материалы обычно плохо взаимодействуют с натуральными тканями, окружающими поражение, потому что их структура, компоненты и свойства отличаются от натуральной эмали. В результате вторичный кариес часто развивается со временем на границе между зубом и инородными материалами. Таким образом, in situ повторное отрастание эмали с плотной поверхностью раздела является привлекательной мишенью для областей материаловедения и стоматологии. Одним из наиболее перспективных путей достижения этой цели является биомиметический синтез эмалевого материала на поверхности эмали. В последнее время были предприняты многочисленные попытки in vitro получить эмалеподобные материалы с использованием биомиметических систем, содержащих наноапатиты или различные органические добавки 4-12. Тем не менее, разработка оптимальной биомиметической стратегии для стимулирования реминерализации кристаллов для достижения идеальной плотной границы раздела все еще остается сложной задачей.

Во время минерализации эмали ориентированный рост и удлинение кристаллов апатита регулируется матрицей, богатой амелогенинами 1,13-14. Чтобы имитировать органическую матрицу при развитии эмали, в данной работе мы описываем подробный протокол изготовления гидрогеля амелогенин-хитозан (CS-AMEL) для восстановления эмали in situ на поверхности эмали, вытравленной кислотой, используемой в качестве модели для эрозивных поражений. Будучи «наиболее универсальной средой для выращивания» кристаллов 15, гидрогелевые матрицы имеют преимущество перед системой растворов, поскольку клинически они проще в обращении. Кроме того, CS-AMEL является биосовместимым, биоразлагаемым и обладает уникальными антимикробными и адгезионными свойствами, которые выгодно отличаются от других биомиметических систем для стоматологического применения 16. Важно отметить, что минерализация кристаллов апатита in situ на поверхности эмали обеспечивает плотную границу раздела между ремонтируемым слоем и натуральной эмалью, что потенциально может повысить долговечность реставраций и предотвратить образование нового кариеса на краю реставрации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Человеческие моляры были извлечены следующие стандартные процедуры по добыче на Острув школы стоматологии Университета Южной Калифорнии и обрабатываются с одобрения Institutional Review Board в.

1. Подготовка выгравирована кислотой Зуба Slice

  1. Выберите человека третий коренной зуб без восстановленных кариеса.
  2. Удалить корневой части коренного зуба, и сократить корону моляра продольно на ломтики толщиной 2 мм с помощью низкоскоростного алмазной пилой с водяным охлаждением. Ультразвуком очистить эти ломтики в течение 2 мин, а затем промыть деионизированной водой 3 раза.
  3. Для имитации эрозии поражений, травления ломтики зубов с 30%-ной фосфорной кислоты в течение 30 сек, то немедленно промыть деионизированной водой.
  4. Ультразвуком очистить выгравированные ломтики в течение 2 мин, а затем промыть их деионизированной водой 3 раза.

2. Подготовка амелогенина-хитозана гидрогеля

  1. ПОДГОТОВКАн хитозана раствора
    1. Растворить 1% (вес / объем) хитозан (средняя молекулярная масса, 75-85% деацетилированного) в 1% (объем / объем) раствора уксусной кислоты с последующим перемешиванием при 80 ° CO / N.
    2. После охлаждения раствора до комнатной температуры, фильтрации раствора хитозана с использованием 0,45 мкм фильтр. Регулировка величины рН до 5,0 добавлением 1 М раствора NaOH.
  2. Получение кальциевого и фосфатного раствора (0,1 М)
    1. Взвесить хлорид кальция (CaCl 2) и подготовить решение на 0,1 м, затем смешать с помощью вихрь, пока раствор не станет прозрачным. Регулировка величины рН до 11 добавлением 1 М раствора NaOH.
    2. Взвесить двухосновный фосфат натрия (Na 2 HPO 4) и подготовить решение на 0,1 м, затем смешать с помощью вихрь, пока раствор не станет прозрачным.
  3. Экспрессия и очистка рекомбинантного амелогенина 17-18
    Рекомбинантный полнометражный свиной амелогенин (rP172) используется здесь имеет 172 аминокислот и является аналогом полныйДлина родной свиной P173, но не имея N-концевой метионин, а также фосфатную группу на Ser16 18.
    1. Добавить 20 г лизогении бульона (LB) Агар порошка в 500 мл деионизированной воды, автоклав раствора при 121 ° С (значение жидкость) в течение 20 мин. Пусть агар остыть до ~ 55 ° C, добавляют ампициллин (100 мкг / мл) в растворе агара.
    2. Перенести агар решение чашки Петри, пусть каждая пластина здорово, пока он не является твердым телом, затем переверните, чтобы избежать конденсации на агар. Храните пластины в полиэтиленовых пакетах при 4 ° С.
    3. Подряд LB агар с рекомбинантных клеток (E.coli-BC21) от глицерина складе (-80 ° С). Инкубируйте пластин O / N при 37 ° С
    4. Подготовка 50 мл NZCYM СМИ и автоклав СМИ при 121 ° С в течение 30 мин. Разрешить СМИ остыть, добавить 50 мкл 100 мкг / мл ампициллина в средствах массовой информации 50 мл.
    5. Привить одну колонию из агаром LB в 50 мл NZCYM СМИ дополненной ampicillдюйма Инкубируйте клетки O / N дрожащим инкубаторе при температуре 37 ° С.
    6. Подготовить 1 л NZCYM СМИ и автоклав СМИ при 121 ° С в течение 30 мин. Добавить 1 мл 100 мг / мл ампициллина до 1000 мл среды. Возьмите оптическую плотность (OD) чтения как заготовки с помощью UV-VIS спектрофотометр. ПРИМЕЧАНИЕ: Не выбрасывайте это после первого чтения.
    7. Привить 10 мл клеточной культуры с шага 2.3.5 в 1000 мл среды, начиная с шага 2.3.6. Считать оптическую плотность при 595 нм сразу после инокуляции. Снимите показания оптической плотности периодически отслеживать рост. ПРИМЕЧАНИЕ: Читайте заготовки каждый раз ОП берется.
    8. Вызвать 700 мкл изопропилового β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG, 1 М), когда рост бактерий достигает до примерно 0,75 ~ 0,8 ОП при 595 нм.
    9. Сбора клеток при OD достигает 1,1. Налейте содержимое колбы в 6 пластиковых бутылок. Баланс и весят бутылки перед использованием центрифуги. Центрифуга течение 20 мин при 8554 мкг при 4 ° С.Держите осадок клеток в -20 ° CO / N.
    10. Выньте ячейки гранул и объединить их в 50 мл трубки. Добавить 3,5 мл 4М гуанидиновым HCl на L брожения. Разрушать ультразвуком 2-3 раза на льду, 30 секунд каждый раз, с минутными интервалами 1.
    11. Сделать 6x разведения объема клеток с 0,5% муравьиной кислоты и дайте ему движение в холодном помещении в течение 2 часов. Центрифуга в течение 30 мин, 8554 мкг при 4 ° С. Держите супернатант. Добавить 20% насыщенного сульфата аммония с помощью насыщенного раствора акции и переполох в холодной комнате, O / N.
    12. Центрифуга в течение 30 мин, 8554 мкг при 4 ° С и сохранить гранулу. Развести гранулы в 0,1% трифторуксусной кислоте (TFA), нагрузки на колонку C4 (10 • 250 мм, 5 мкм) и фракционирования с использованием линейного градиента А = 0,1% TFA и B = 60% ацетонитрила в TFA, в скорость 1,5 мл · мин -1 течь.
    13. Замораживание раствора белка на сухом льду и лиофилизировать замороженный образец O / N.
  4. Подготовка амелогенина-хитозана (CS-AMEL) HYDROGэль (рис. 1А)
    1. Добавить 200 мкг rp172 в пробирку, содержащую 960 мкл 1% раствора хитозана, затем смешать с помощью вихря, пока раствор не станет прозрачным.
    2. Добавить 25 мкл 0,1 М CaCl 2 раствором с последующим 15 мкл 0,1 М Na 2 HPO 4 решения амелогенина раствора, содержащего хитозан, затем смешать с помощью вихря в течение 5 мин.
    3. Доводят рН раствора CS-AMEL до 6,5 путем осторожного добавлени 1 М раствора NaOH. CS-AMEL гидрогель будет формироваться, когда значение рН достигает 6,5.

3. Эмаль Восстановление в амелогенина-хитозана гидрогеля

  1. Подготовка искусственного решения слюны
    1. Растворить определенное количество хлорида магния (MgCl 2, 0,2 мМ), хлорид кальция (CaCl 2, 1 мМ), дигидрофосфат калия (KH 2 PO 4, 4 мМ), хлорид калия (KCl, 16 мМ) и хлорид аммония ( NH 4 Cl, 4,5 ммоль) в 20 мМ HEPES(4 - (2-гидроксиэтил) пиперазин-1-этан-сульфоновой кислоты) буфера 12.
    2. Регулировка рН до 7,0 с помощью 1 М NaOH и хранить искусственную слюну раствор при 4 ° С.
    3. Перед использованием раствор, добавить фторид натрия (NaF, 300 частей на миллион).
  2. Применение CS-Амель гидрогеля
    1. Применить около 20 мкл CS-AMEL гидрогеля к травлению зуба долькой с помощью шприца (рис. 1В).
    2. Сушат гидрогель покрытый кусок зуба в эксикаторе при комнатной температуре в течение 2 часов.
    3. Передача кусочек зуба в химический стакан, содержащий 30 мл искусственной слюны раствора. Стакан накрывают алюминиевой фольги, а затем держать стакан в печи при 37 ° С в течение 7 дней.
    4. Снимите кусочек зуба и высушите его в эксикаторе при комнатной температуре.

4. Характеристика интерфейса между Недавно Grown слоя и эмали

Микроструктура поверхности раздела между вновь выращенного слоя и эмали было наблювед помощью сканирующей электронной микроскопии (SEM) и высокий революции просвечивающей электронной микроскопии (HR-TEM). Образец TEM получали, используя сфокусированный пучок ионов (FIB) техника, шаги, на которые заключаются в следующем.

  1. Загрузите образец в приборе FIB-SEM и закончить все выравнивания в соответствии с инструкциями по эксплуатации. ПРИМЕЧАНИЕ: Точная регулировка Z должна быть выполнена, по крайней мере в 2 раза.
  2. Внесите углеродного слоя (15 × 3 мкм) на образце, чтобы защитить основные структуры (рис. 2а).
  3. Мельница образец тщательно на верхних, нижних и правой сторон углеродного слоя, чтобы подготовить тонкую часть образца, а затем разрезать нижнюю сторону этой тонкой части. ПРИМЕЧАНИЕ: Проверьте выравнивание ионного пучка перед каждым стадии измельчения (рис. 2В).
  4. Weld совет Pt на тонкий кусок и сократить левую сторону, чтобы отделить образец кусок (рис. 3C). ПРИМЕЧАНИЕ: Проверьте выравнивание ионного пучка до этапе сварки.
  5. Выньте тон PT чаевые с образцом медленно, и смонтировать слоистую образец на лифт-аут ТЕМ сетки.
  6. Снимите наконечник от образца, и тонкие образца до его толщина не меньше 100 нм (рис. 3D). Удалите образец из инструмента для выполнения ТЕА наблюдения. ПРИМЕЧАНИЕ: Проверьте выравнивание ионного пучка перед каждым процессом прореживания.

5. Оценка Binding и механические свойства Недавно Grown слоя

  1. Связывание сила оценивается путем ультразвуковой обработки. Держите ремонт зуба кусочек в ультразвуковой очиститель (42 кГц, 100 Вт) в течение 10 мин, а затем наблюдать интерфейс между отремонтированного слоя и естественной эмали с обратного рассеяния электронов SEM анализа.
  2. Измерьте твердость и модуль упругости при 20 контрольных точек на каждой ремонтируемой поверхности эмали (п = 3) с помощью нано-индентора с наконечником Беркович.

6. Иммунофлуоресценции Окрашивание

  1. Вымойте кусочек зуба с Трис BuffeR физиологический раствор (TBS) в течение 15 мин.
  2. Блок 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA) в TBS в течение 15 мин.
  3. Удалить жидкость и инкубировать образец O / N с 1 ° АВ (1:500 Chicken Anti-амелогенина) разбавленной в Трис-буфере (0,1% BSA, 0,3% Triton X-100).
  4. Промыть образец с TBS в течение 30 мин и инкубировать O / N с 2 ° АВ (1:100 Anti-курица FITC), разведенного в TBS.
  5. Промыть образец с TBS в течение 30 мин и оставьте сохнуть в течение еще 30 мин.
  6. Соблюдайте по флуоресцентным микроскопом.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эффективность протоколу, описанному здесь демонстрируется с помощью сканирующей электронной микроскопии (SEM), выбранный область дифракции электронов (Саед) и рентгеновской дифракции (РД) анализирует. После ремонта по амелогенин-хитозан (CS-AMEL) гидрогеля в течение 7 дней, слой эмали, как с толщиной 15 мкм был образован на протравленной поверхности эмали. Вновь выращивают слой был изготовлен из очень упорядоченных массивов кристаллов с диаметром ~ 50 нм, растет преимущественно вдоль с-оси, перпендикулярной поверхности ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В то время как содержание минеральных веществ эмали с высоким делает его трудное минерализованной ткани в организме человека, это биокерамических восприимчив к деминерализации процессов, которые часто встречаются как кариес зубов или эрозии. Генные мутации могут также вызвать тонкие или мягкие эмаль, ведущие к серии унаследованных болезней эмали пороков называется Амелогенез Несовершенный 20. Устные продукты медицинского назначения, содержащие фтор или СРР-АСР были на рынке в течение нескольких лет <...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить профессора Стивена Натта и г-на Юйчжэна Чжана за помощь в работе с фокусным ионным пучком, а также Центр электронной микроскопии и микроанализа (CEMMA) в Университете Южной Калифорнии за электронную микроскопию. Исследования проводились при поддержке грантов NIH-NIDCR; DE-13414 и DE-020099 в J.M.O.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Третий моляр человека Стоматологическая школа Остроу Университета Южной Калифорнии Н/ДКоренные зубы человека были удалены в соответствии со стандартными процедурами удаления в Школе стоматологии Остроу Университета Южной Калифорнии и обработаны с одобрения Институционального наблюдательного совета.
Экспрессия и очистка рекомбинантного поцина амелогенина  в лабораторииN/ArP172, полноразмерный 
Хитозан Sigma-Aldrich448877Среднемолекулярная масса, 75-85% деацетилированная
фосфорная кислота VWRAA033266
Уксусная кислота ледниковаяVWRA036289
Гидроксид натрияVWRBDH9292
Хлорид кальция Сигма-Олдрич223506
Диосновной фосфат натрия безводныйVWRBDH0316
BL21-CodonPlus (DE3)-RP Agilent Technologies Inc.
Сульфат аммонияVWRBDH8001
трифторуксусная кислотаVWRAAAL06374
ацетонитрилVWRBDH1103
хлорид магния VWRBDH0244
Дигидрофосфат калия VWRBDH9268
хлорид калия ВВРBDH0258
хлорид аммония VWRAAAA15000
HEPES (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этан-сульфоновая кислота)VWRAAA14777
фторид натрия VWRAA11561
Трис-буферный физиологический растворBio-Rad170-643510&раз; TBS
Бычий сывороточный альбуминEMD Millipore 12659CalBioChem, Альбумин, Бычья сыворотка, Фракция V, Низкое содержание тяжелых металлов 
Triton X-100EMD Millipore TX1568-1
Куриный анти-амелогенинН/Д/ДПодарок от профессора Малкольма Снида, Университет Южной Калифорнии
Бычий антикуриный комплекс IgY-FITCSanta Cruz BiotechnologySc-2700
Высокопроизводительная система жидкостной хроматографииAgilent Technologies Inc.Varian Prostar 210
C4 колонкаPhenomenx Jupiter 5μ 300A
Сканирующая электронная микроскопия JEOL JSM-7001
FIB-SEM JEOL JIB-4500
Просвечивающая электронная микроскопия JEOLJEM-2100F
Цифровая низкоскоростная алмазная пилаMTI CorporationSYJ-150
Флуоресцентная микроскопияLeicaDMI3000 B
Ультразвуковой очиститель Брэнсон 251042 кГц, 100 Вт
Нано-индентор Agilent Technologies Inc.МТС ХР
230255 Н

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Moradian-Oldak, J. Protein- mediated enamel mineralization. Frontiers in Bioscience. 17, 1996-2023 (2012).
  2. Palmer, L. C., Newcomb, C. J., Kaltz, S. R., Spoerke, E. D., Stupp, S. I. Biomimetic Systems for Hydroxyapatite Mineralization Inspired By Bone and Enamel. Chem. Rev. 108, 4754-4783 (2008).
  3. Onuma, K., Yamagishi, K., Oyane, A. Nucleation and growth of hydroxyapatite nanocrystals for nondestructive repair of early caries lesions. J. Cryst. Growth. 282, 199-207 (2005).
  4. Xie, R. Q., Feng, Z. D., Li, S. W., Xu, B. B. EDTA-Assisted Self-Assembly of Fluoride-Substituted Hydroxyapatite Coating on Enamel Substrate. Cryst. Growth Des. 11, 5206-5214 (2011).
  5. Li, L., et al. Bio-Inspired Enamel Repair via Glu-Directed Assembly of Apatite Nanoparticles: an Approach to Biomaterials with Optimal Characteristics. Advanced Materials. 23, (2011).
  6. Yin, Y. J., Yun, S., Fang, J. S., Chen, H. F. Chemical regeneration of human tooth enamel under near-physiological conditions. Chem. Commun. , 5892-5894 (2009).
  7. Fan, Y., Sun, Z., Moradian-Oldak, J. Controlled remineralization of enamel in the presence of amelogenin and fluoride. Biomaterials. 30, 478-483 (2009).
  8. Li, L., et al. Repair of enamel by using hydroxyapatite nanoparticles as the building blocks. J. Mater. Chem. 18, 4079-4084 (2008).
  9. Chen, H., et al. Acellular synthesis of a human enamel-like microstructure. Advanced Materials. 18, (2006).
  10. Yamagishi, K., et al. A synthetic enamel for rapid tooth repair. Nature. 433, 819-819 (2005).
  11. Bleek, K., Taubert, A. New developments in polymer-controlled, bioinspired calcium phosphate mineralization from aqueous solution. Acta Biomaterialia. 9, 6283-6321 (2013).
  12. Fletcher, J., Walsh, D., Fowler, C. E., Mann, S. Electrospun mats of PVP/ACP nanofibres for remineralization of enamel tooth surfaces. Crystengcomm. 13, 3692-3697 (2011).
  13. Fang, P. -A., Conway, J. F., Margolis, H. C., Simmer, J. P., Beniash, E. Hierarchical self-assembly of amelogenin and the regulation of biomineralization at the nanoscale. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 14097-14102 (2011).
  14. Yang, X., et al. How Amelogenin Orchestrates the Organization of Hierarchical Elongated Microstructures of Apatite. Journal of Physical Chemistry B. 114, 2293-2300 (2010).
  15. Li, H., Fujiki, Y., Sada, K., Estroff, L. A. Gel incorporation inside of organic single crystals grown in agarose hydrogels. Crystengcomm. 13, 1060-1062 (2011).
  16. Ruan, Q., Zhang, Y., Yang, X., Nutt, S., Moradian-Oldak, J. An amelogenin-chitosan matrix promotes assembly of an enamel-like layer with a dense interface. Acta Biomater. 9, 7289-7297 (2013).
  17. Hu, C. C., et al. Cloning, cDNA sequence, and alternative splicing of porcine amelogenin mRNAs. Journal of Dental Research. 75, 1735-1741 (1996).
  18. Bromley, K. M., et al. Amelogenin Processing by MMP-20 Prevents Protein Occlusion Inside Calcite Crystals. Cryst. Growth Des. 12, 4897-4905 (2012).
  19. Fan, Y., Sun, Z., Abbott, C., Moradian-Oldak, J. A enamel inspired nanocomposite fabrication through amelogenin supramolecular assembly. Biomaterials. 28, 3034-3042 (2007).
  20. Wright, J. The molecular etiologies and associated phenotypes of amelogenesis imperfecta. Am. J. Med. Gent. A. 140 (23), 2547-2555 (2006).
  21. Eimar, H., et al. Regulation of enamel hardness by its crystallographic dimensions. Acta Biomaterialia. 8, 3400-3410 (2012).
  22. Ruan, Q., Siddiqah, N., Li, X., Nutt, S., Moradian-Oldak, J. Amelogenin-chitosan matrix for human enamel regrowth: effects of viscosity and supersaturation degree. Connect Tissue Res. , (2014).
  23. Pouget, E. M., et al. The Initial Stages of Template-Controlled CaCO3 Formation Revealed by Cryo-TEM. Science. 323, 1455-1458 (2009).
  24. Gebauer, D., Volkel, A., Colfen, H. Stable Prenucleation Calcium Carbonate Clusters. Science. 322, 1819-1822 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи