Простой Поведенческая Анализ для тестирования зрительной функции в Xenopus Laevis

Summary

Xenopus Laevis головастики предпочитают плавание на белом стороне черного / белого танка. Такое поведение руководствуется своим видением. На основе этого поведения, мы представляем простой анализ, чтобы проверить зрительные функции головастиков.

Abstract

Измерение зрительной функции в головастиков лягушки, Xenopus Laevis, позволяет скрининг для слепоты в живых животных. Оптокинетическим ответ видение основе, рефлексивно поведение, которое наблюдается у всех позвоночных протестированных. Головастик глаза маленькие, поэтому реакция хвост флип был использован в качестве альтернативной меры, которая требует квалифицированный специалист для записи тонкий ответ. Мы разработали альтернативный поведение анализа основан на том, что головастиков предпочитают, чтобы плавать на белом стороне бака при помещении в резервуар с обоих черных и белых сторон. Анализ, представленный здесь является недорогим, простым альтернатива, которая создает ответ, который легко измерить. Установка состоит из штатива, веб-камера и вложенных танков тестирования, доступной в большинстве Xenopus лабораторий. Эта статья включает в себя фильм, показывающий поведение головастиков, до и после разрыва зрительный нерв. Для того чтобы проверить функцию одним глазом, мы также включаем предтель результаты головастика, в которой каждый глаз прошли сетчатки аксотомии на последовательных дней. Будущие исследования могут разработать автоматизированную версию этого анализа для тестирования видение многих головастиков сразу.

Introduction

Xenopus Laevis были использованы в качестве модельного организма для изучения формирования глаз. Глаза быстро развиваться, растет до погашения менее чем за неделю тестирования генов или путей, которые оказывают влияние на визуальной разработки и функции. Чтобы проверить зрительные функции, оптокинетическим и оптомоторная ответ был использован у рыбок данио и Xenopus головастиков соответственно ^1,2. Потому что глаза Xenopus головастиков относительно меньше, чем у рыбок данио, этот анализ требует использования специального оборудования и подготовленного персонала для выявления тонкий хвост-флип и глаз-движения поведение в Xenop....

Protocol

Уход животных

Xenopus Laevis головастики используемые в этом исследовании были выращены, поднял и лечение в соответствии с процедурами, утвержденными северной части штата медицинского университета IACUC и Руководства по проблемам помощи и использованию лабораторных животных.

. 1 Настройка Предварительно поведение: Головастики

1. Получение оплодотворенные эмбрионы Xenopus из коммерчески доступного источника или в пробирке оплодотворению ооцитов, как описано выше ^6.
2. Наведите бластула в нейронных эмбрионов на стадии пластины на 18 ˚ С в 60 мм чашки Петри, содер....

Results

Предыдущие доклады показали, что premetamorphic головастики Xenopus предпочитают плавать на белом стороне черного / белого танка и называется этот анализ, цвет фона Preference Пробирной ³ мы изменили этот анализ для того, чтобы проверить зрительные функции либо глаза головастиков в менее чем за неделю. Таким образом, их глаза могут быть собраны для гистологического исследования.

Здесь мы показываем, как реакция обусловлена ​​визуальные подсказки. В Movie 1,

Discussion

Мы сообщаем здесь простой видение наведением поведенческий анализ, который может быть легко выполнена в рамках недели по минимально подготовленных персонала лаборатории. В то время как другие анализы требуют специального оборудования и опыта в поведении животных, этот анализ позволяет быстрый тест для определения зрительной функции. Другой поведенческая анализ, Визуальный Избежание анализа, был разработан, чтобы определить, каким образом Tectum способствует зрительного восприятия в Xenopus ^10. Это ан.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1/2 галлона Flex-Tank с крышкой	eNasco	SB19271M	Размер: 5-3/8" x 7" x 3-3/4"
Черная изолента
Белая папиросная бумага
Большой инокуляционный проигрыватель	VWR	50809-022	Размер: Диаметр 114,3 x  В 76,2 мм (4 1/2  x  3")
Подкладка Durasorb	VWR	82004-836	Размер: 43,2 x 60,1 см (17 x 24")
Kimwipe	Krackeler Scientific, Inc.	1945-34155-CS
Стандартный штатив		Различные
камеры или веб-камеры iSight	Apple	M8817LL/A	Хорошо подходит для больших головастиков, но маленькие плохо видны
Портативный компьютер	Apple/PC	Разное	Мы использовали 13-дюймовый MacBook, 2 ГГц Intel Core 2 Duo под управлением MacOSX Lion 10.7.5
MiniDV ручная камкордер	SONY	DCR-HC42	Подключается с помощью firewire к компьютеру с помощью 6-жильного и 4-жильного альфа-канала FireWire 400
Станция Handycam	SONY	DCRA-C121	Это можно использовать для подключения пожарного провода к камере
Программное обеспечение QuickTime Player	Версия	10.1
26 G Игла (длина 5/8 дюйма)	VWR	BD305115
Dumont #5 Щипцы	Fine Science Tools	11295-10
Одноразовые материалы
Гентамицина сульфат [50 мг/мл]	Fisher Scientific	17-528Z	Хранится в RT
Sylgard 184 силиконовый эластомер	Fisher Scientific	NC9644388
Instant ocean	Doctors Foster and Smith	CD-116528	Стоковый раствор = 100 г/л хранится в RT
Двухосновной фосфат	натрия Sigma Aldrich	S0876	Стоковый раствор = 0,4 M хранится в RT
in vitro оплодотворенных эмбрионов	eNasco	LM00490MX	100 эмбрионов/единицу