Методическая статья

Органотипической срез культуры для изучения олигодендроцит Динамика и миелинизации

18.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/51835

⸱

25 августа 2014 г.

 ,  ,  , 
1Department of Physiology and Neurobiology, University of Connecticut, 2Stem Cell Institute, University of Connecticut, 3Department of Neurology, Yale University School of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

Описан метод изучения клеток NG2 и олигодендроцитов с использованием системы культивирования срезов переднего мозга и мозжечка. Этот метод позволяет исследовать динамику пролиферации и дифференцировки клеток в линии олигодендроцитов, где можно легко манипулировать внеклеточной средой, сохраняя при этом цитоархитекерство тканей.

Аннотация

NG2 экспрессирующие клетки (polydendrocytes, клетки-предшественники олигодендроцитов) являются четвертым главным населения глиальных клеток в центральной нервной системе. Во время эмбрионального и постнатального развития они активно размножаются и генерировать myelinating олигодендроцитов. Эти клетки обычно были изучены в первичных диссоциированных культур нейронов, совместных культурах, и в основной ткани. Использовании новейших трансгенных линий мышей нарезать системы культивирования могут быть использованы для исследования пролиферацию и дифференцировку олигодендроцитов клона клеток в обоих серого и белого вещества регионах переднего мозга и мозжечка. Срез культуры готовят из ранних послеродовых мышей и хранятся в культуре в течение до 1 месяца. Эти кусочки могут быть отображены несколько раз в течение периода культивирования исследовать клеточный поведение и взаимодействие. Этот метод позволяет визуализация разделения NG2 клеток и шаги, ведущие к олигодендроцитов дифференциации при одновременном обеспечении подробный анализ региона-зависитЛОР NG2 клеток и олигодендроцитов функциональная гетерогенность. Это мощный метод, который может быть использован, чтобы исследовать внутренние и внешние сигналы, влияющие на эти клетки в течение долгого времени в сотовой среде, которая близко напоминает, что найдено в естественных условиях.

Введение

Organoytpic срез культуры центральной нервной системы, оказались чрезвычайно полезны для изучения нейрон и глиальных клеточной биологии в semiintact системы 1 - 4. Эти культуры сравнительно просто принять и сохранить множество преимуществ первичных культурах диссоциированных клеток, таких как манипуляции с внеклеточной среде и легким доступом для повторил долгосрочного изображений живых клеток и электрофизиологических записей 5 - 9. Кроме того, срез культуры поддерживать 3-мерное тканей цитоархитектуры, региональных связей нейронной, и большинство крупных типы клеток присутствуют в системе. Эти свойства делают эти культуры уникальную и удобную систему для расследования одного поведение клеток и физиологию с сотовой и экологических взаимодействий.

NG2 клетки население глиальных клеток в центральной нервной системе млекопитающих, которые продолжают пролиферировать и генерируют мyelinating олигодендроцитов во время эмбрионального и постнатального развития 10. Они были широко изучены в диссоциированных первичных клеточных культур, и недавняя разработка трансгенных линий мышей с клеточно-специфической экспрессии NG2 флуоресцентных белков способствовала в отображении естественных судьбы и электрофизиологических записей в острых срезов препаратов. Даже с этими исследованиями, мало известно о временной динамики пролиферации клеток NG2 и олигодендроцитов дифференциации. Хотя диссоциированной клеточной культуры широко используется для относительного объекта в фармакологических и генетических манипуляций, он не подходит для допроса функциональные различия этих клеток в разных отделах головного мозга, особенно, когда желательно, чтобы поддерживать контекст сотовой микросреды. Срез культуры обеспечивают простой альтернативой то, что поддается фармакологических манипуляций и были использованы для расследования олигодендроцитов миелинизации 11,12, клеткаулар ответ после лизолецитина (LPC) или антитела индуцированной демиелинизации 13,14 и индукцию ремиелинизации через фармакологического лечения 15.

Способ для расследования и выступать с концертами изображений и фиксированной ткани (или postfixation) анализ пролиферации клеток NG2 и олигодендроцитов дифференциации в органотипических культур срез, взятых из обоих переднего мозга и мозжечка, описанное. Это мощный метод, который может быть использован для изучения клеток судьбу отдельных клеток NG2 после деления 16 и открыть для себя Region- и зависит от возраста различия в фактор роста распространения индуцированных NG2 клеток 17. Этот сравнительно простой метод широко доступны для дальнейшего расследования ячейку внутренней и / или окружающей среды механизмы, регулирующие физиологию этих глиальных клеток и их реакцию на нейронной активности или повреждения миелина.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры на животных в соответствии с инструкциями и были одобрены уходу и использованию комитета Институциональная животных (IACUC) в Университете штата Коннектикут по.

ПРИМЕЧАНИЕ: Для этих экспериментов учредительных NG2cre 18 (JAX # 008533) и индуцибельных NG2creER 16 (JAX # 008538) трансгенные мыши подошел к Z / EG 19 (JAX # 003920) или gtRosa26: YFP репортер 20 (JAX # 006148) линии соответственно были использованы с изображением NG2 клеток и их потомства. Для изображения зрелых олигодендроцитов, PLPDsRed трансгенных мышей 21 были использованы. Для последовательного выживания, ломтики могут быть выделены из мышей до 10 день постнатального как от переднего мозга и мозжечка.

1 ломтик Подготовка

  1. В капюшоне культуры, разместить культуры ткани вставки в шести луночные планшеты и добавить 1 мл ломтик культуральной среды (рецепт в реагентов разделе). Положите пластины в культуре клеток инкубаторе при температуре 37 ° С с 5% CO 2, по крайней мере 2 час до контрольного вскрытия.
  2. Стерилизовать все инструменты и ткани вертолет с 70% этанола.
  3. Bubble рассечение буфера (рецепт в реагентов разделе) с 95% О 2, 5% СО 2 на льду в течение не менее 15 мин до начала вскрытия.
  4. Обезболить щенков мыши, поместив их на льду в течение 5-10 мин в соответствии с утвержденными протоколами животных. Определить подходящий глубины анестезии, подтвердив, что мыши не реагируют на хвосте и ног щипать.
  5. Обезглавить животных, используя острые ножницы следующие протоколы животных. Быстро удалить череп над переднего мозга и мозжечка, сначала делает сагиттальный разрез с последующим боковым разрезом, с использованием стерильных инструментов. Вырезать черепных нервов из вентральной поверхности мозга и мозжечка, тщательно прокатки ткани в сторону.
  6. Поместите ткань в стерильную 35 мм блюдо с ледяной кислородом буфер рассечение.
  7. Используя лезвие, разорвать мозжечок и передний мозг. Затем сделайте в середине сагиттальной разрез беспересадочныйтьфу передний мозг и мозжечок, разделения полушарий.
  8. Вырезать 300 мкм-толстые фронтальной и сагиттальной разделы переднего мозга и мозжечка с механической ткани вертолета. ПРИМЕЧАНИЕ: ручная ткани измельчитель позволяет быструю обработку от вскрытия до культуры инкубации без необходимости агарозном вложения. Vibratome также могут быть использованы, как описано выше 9.
  9. Трансфер разделенные ломтики в недавно пропускают буфер холодно рассечение на льду.
  10. Используйте небольшую рассечения или весом шпатели для разделения отдельных разделов и передавать их на преинкубировали шесть также блюда с культурой вставками.
  11. Удалите излишки буфера рассечение с поверхности культурального вставки с помощью одноразовой пипетки передачи или пипетки наконечник Р 200. Два-три переднего мозга или мозжечка трех кусочков могут быть размещены на одной культуры вставки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для достижения одинаковых результатов с переднего мозга культур, он идеально подходит, чтобы взять ломтики охватывающих передней трети мозолистого тела(1А) для того, чтобы изучать как серые и белые области материи в том же срезе. Каждое животное, как правило, дает 6 ломтиков переднего мозга и 6 частей мозжечка.
  12. Поместите луночных шесть в инкубаторе и заменить ломтик среды 1 мл ломтик среде 1 день после приготовления срезов и затем через день до среза фиксации.
  13. В зависимости от эксперимента с помощью срезов через 5-7 дней в культуре. Используйте только ломтики, которые становятся прозрачными после первых нескольких дней и отбросить те, которые имеют неровные непрозрачные области. ПРИМЕЧАНИЕ: Непрозрачные участки внутри кусочков видны на глаз и появляются в виде скопления темных клеток под фазового контраста. После, как технология была освоена, мертвые непрозрачные ломтики встречаются редко, менее чем 1-5% от ломтиками.

2 цейтраферной Визуализация NG2 деления клеток и олигодендроцитов дифференциации

ПРИМЕЧАНИЕ: Для выполнения функции длительной визуализации клеточной пролиферации NG2 и дифференциации мы используем NG2cre: ZEG мышей 16которые выражают EGFP в NG2 клеток и их потомства (Рисунок 1C-E). Репортер выражение в этой линии является достаточно прочным, чтобы получить живые изображения GFP + клеток в срезах сразу после срезов в течение периода времени, по меньшей мере, четырех недель. Наиболее четкие изображения получаются после начального периода прореживания среза, которая происходит в течение первых 3-5 дней в культуре.

  1. В течение всего эксперимента, держать ломтики в инкубаторе для клеточных культур при 37 ° С и удалить только в течение коротких периодов времени (менее 15 мин на срезе), сохраняя крышку на луночного планшета шесть в то время формирования изображения.
  2. Использование инвертированного флуоресцентного микроскопа, снабженного цифровой камеры, захват изображений в первой точке времени, используя цели 10X. ПРИМЕЧАНИЕ: Первые временные точки будет варьироваться в зависимости от эксперимента и может быть день, когда ломтики были подготовлены или в любое время точка после.
  3. Захват изображения с нескольких регионах в момент времени один в обоих серого и белого вещества областях среза. Примечание йэлектронной область отображаемого на конкретных ориентиров в пределах среза и путем сопоставления положения изображения на схеме, которая может быть использована для последующих сеансов обработки изображений. Полезные ориентиры могут включать края ломтиков и / или ориентации трактов белого вещества. Изображение 7:56 местах на каждом срезе в каждый момент времени.
  4. Захват остальных изображений с интервалом в 4-6 часа, если отдел экспертизы NG2 клеток и олигодендроцитов дифференциацию, в идеале более 5-7 дней.
  5. Захват окончательный образ всех регионах и немедленно устранить ломтики. Добавить 1 мл фиксатора (4% PFA 0,1 М L-лизина 0,01 М натрий мета-периодатом) в нижней части культуры вставки, а затем добавить еще 1 мл на верхней части ломтиков. Будьте осторожны, не шприц фиксатором непосредственно на срезе, как это может отделиться от мембраны. Закрепите ткань в течение 30 мин и заполните иммуногистохимии с использованием развития маркеры стадии конкретных, как описано в разделе 4.
  6. Ломтики Промыть 0,2 М натрия фосфатного буфера 3 х 10 мв. При необходимости хранить кусочки при 4 ° С в 0,2 М фосфатном буфере натрия в течение 1-3 дней перед иммунного окрашивания, но в идеале выполнить окрашивание в течение 24 часов. Продолжайте иммуногистохимии, как описано ниже в разделе 4, чтобы определить долю клеток, которые дифференцировались в олигодендроциты (Рисунок 2D-F).

3 Судьба картирование NG2 клеток потомства Использование Индуцибельная Репортер трансгенных мышей в срез культуры

Примечание: Чтобы отслеживать судьбу NG2 клеток от конкретной временной точке в культуре, индуцируемые NG2creER: YFP трансгенные мыши могут быть использованы.

  1. Вызвать Cre рекомбинации и репортер выражение добавлением 100 нМ 4OHT растворяют в этаноле в культуральную среду. Примечание: Reporter позитивные клетки должен появиться в течение 1-2 дней при индукционной эффективности ~ 20-25% YFP + NG2 + / NG2 + клеток и в этот момент времени все будут клетки на стадии NG2 клеток (Фигура 2А-С)
  2. Fix и мыть кусочекс при различных временных точках после различных манипуляций (описано в разделах 2.5 и 2.6).

4 Slice Иммуногистохимия

  1. Нарежьте мембран с ломтиками прикрепленных из вставок с помощью скальпеля.
  2. Трансфер ломтики в отдельные лунки 24 луночного планшета, содержащего фосфатным буферным раствором (PBS), используя набор пинцетом, стараясь не нарушить состав среза, когда поднимаете мембрану.
  3. Передача ломтики в 24-луночный планшет с блокировкой раствора, содержащего 5% нормальной козьей сыворотки (NGS) и 0,1% Triton-X100 в PBS в течение 1 часа.
  4. Инкубируйте срезов в начальной O антител / N в 5% NGS в PBS при 4 ° С. Для идентификации клеток в стадии NG2 клеток, использовать антитела к NG2 и PDGFRα. Для выявления дифференцированных олигодендроциты, использовать антитела к САП палочки антигена (APC; клон CC1).
  5. На втором ломтиками день стирки в PBS 3 x15 мин, затем инкубировать в средней Antiboумирает в 5% NGS в PBS в течение 1 часа при комнатной температуре. Вымойте ломтики в PBS 3 x15 мин и смонтировать на слайдах. Установите с кусочками вверх и мембраны, стоящих перед слайд так, что мембрана не будет между объективным и ткани.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Примеры репрезентативных данных приведены ниже, которые были получены с помощью срез культуры как от переднего мозга и мозжечка P8 NG2cre: ZEG, NG2creER: YFP и PLPDsRed трансгенных линий мышей. NG2 клетки могут быть отображены в течение нескольких дней в переднего мозга и мозжечка ломтиками (Фигура 1В-D, видео 1) и фенотипа этих клеток может быть определена после фиксации и иммунного окрашивания с NG2 и CC1 антител (1E) Рис. Кроме того, чтобы живого изображения, пролиферации клеток, так...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Миелинизация в центральной нервной системе имеет важное значение для эффективного нейронов и аксонов связи выживание 22. NG2 клетки непрерывно генерировать myelinating олигодендроцитов во взрослую жизнь, поддерживая постоянное население в большинстве областей мозга 16,23 - 25. Некоторые генетические и молекулярные механизмы, регулирующие дифференциацию этих клеток были описаны, но многое еще предстоит открыть. Органотипической культуры ломтик являются удобным инструментом для изучения этих механизм...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов

Благодарности

Эта работа была профинансирована грантами Национального общества рассеянного склероза (RG4179 to A.N.), Национальных институтов здравоохранения (NIH R01NS073425 и R01NS074870 to A.N.) и Национального научного фонда (A.N.). Мы благодарим доктора Франка Кирххоффа (Университет Саара, Хомбург, Германия) за предоставление трансгенных мышей PLPDsRed. Мы благодарим Юфен Сун за ее помощь в поддержании трансгенной колонии мышей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Slice Culture Medium
Minimum Essential MediumInvitrogen1109050%
Hank' s Сбалансированный солевой растворInvitrogen1417525%
HEPESSigma-AldrichH-403425mM
L-глутаминInvitrogen250301mM
ИнсулинSigma-Aldrichi66341 мг/л
Аскорбиновая кислотаSigma-AldrichA-02780,4 мМ
Лошадиная сывороткаHycloneSH30074,0325%
Титровать до pH 7.22 с помощью NaOH, фильтровать с помощью фильтра на крышке бутылки и хранить при температуре 4 градуса Цельсия
Dissection Buffer
NaClSigma-AldrichS3014124mM
KClSigma-AldrichP54053.004mM
KH2PO4Sigma-AldrichP56551.25mM
MgSO4 (безводный)Sigma-AldrichM75064,004mM
CaCl2 2H2OSigma-AldrichC79022mM
NaHCO3Sigma-AldrichS576126mM
D-(+)-глюкозаSigma-AldrichG702110mM
Аскорбиновая кислотаSigma-AldrichA-02782.0mM
АденозинSigma-AldrichA40360.075mM
Отфильтруйте с помощью фильтра на крышке бутылки и храните при температуре 4 градуса Цельсия, насытьте кислородом 95%O<суб>2 5%CO<суб>2 перед использованием
Other Reagents and Supplies
>4-гидрокситамоксифен (4OHT)Sigma-AldrichH7904100нМ
Параформальдегид (PFA)EM Sciences192004%
L-лизинSigma-AldrichL-60270,1M
Метапериодат натрияSigma-AldrichS-18780,01M
Кролик против NG2 антителаChemicon (Millipore)AB53201:500
Мышиный против CC1 антителаCalbiochem (Millipore)OP801:200
Мышиное антитело против Ki67Vision BiosystemsNCL-Ki67-MM11:300
Мышиное антитело против NeuN Chemicon(Millipore)MAB3771:500
Видоспецифические вторичные антителаJackson Immunoresearch
Нормальная козья сыворотка (NGS)5%
Triton X-1000,10%
Монтажная среда соVector LabsH-1200
Millicell 0,45 мкм; m размер порFisher ScientificPICM03050
Фильтры с крышкой бутылкиFisher Scientific09-740-25E
Этанол
95% O<суб>2 5% CO2 газовая смесь
Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS)
Стерильные шестилуночные планшеты
Рассекающие (гиппокампальные) или весовые шпатели
Ручной или автоматический измельчитель
Бритвенные лезвия
Одноразовые переводные пипетки
35 мм и 60 мм стерильные чашки Петри
Стереомикроскоп
с инвертированной фазой Микроскоп
с ламинарным потоком, колпак
для культуры
инвертированный флуоресцентный микроскоп
вставками мембраны для культуры DAPI тканейтканей,

Ссылки

  1. Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. Journal of Neuroscience Methods. 37 (2), (1991).
  2. Gogolla, N., Galimberti, I., DePaola, V., Caroni, P. Preparation of organotypic hippocampal slice cultures for long-term live imaging. Nature Protocols. 1 (3), 1165-1171 (2006).
  3. Gähwiler, B. H., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Thompson, S. M. Organotypic slice cultures: a technique has come of age. Trends in Neurosciences. 20 (10), 471-477 (1997).
  4. Yamamoto, N., Kurotani, T., Toyama, K. Neural connections between the lateral geniculate nucleus and visual cortex in vitro. Science. 245 (4914), 192-194 (1989).
  5. Bahr, B. A., Kessler, M., et al. Stable maintenance of glutamate receptors and other synaptic components in long-term hippocampal slices. Hippocampus. 5 (5), 425-439 (1995).
  6. Noctor, S. C., Flint, A. C., Weissman, T. A., Dammerman, R. S., Kriegstein, A. R. Neurons derived from radial glial cells establish radial units in neocortex. Nature. 409 (6821), 714-720 (2001).
  7. Noctor, S. C., Martínez-Cerdeño, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases. Nature Neuroscience. 7 (2), (2004).
  8. Kapfhammer, J. P., Gugger, O. S. The analysis of purkinje cell dendritic morphology in organotypic slice cultures. Journal of Visualized Experiments JoVE. (61), (2012).
  9. Elias, L., Kriegstein, A. Organotypic slice culture of E18 rat brains. Journal of Visualized Experiments JoVE. (6), e235(2007).
  10. Nishiyama, A., Komitova, M., Suzuki, R., Zhu, X. Polydendrocytes (NG2 cells): multifunctional cells with lineage plasticity. Nature Reviews Neuroscience. 10 (1), 9-22 (2009).
  11. Haber, M., Vautrin, S., Fry, E. J., Murai, K. K. Subtype-specific oligodendrocyte dynamics in organotypic culture. Glia. 57 (9), 1000-1013 (2009).
  12. Bin, J. M., Leong, S. Y., Bull, S. -J., Antel, J. P., Kennedy, T. E. Oligodendrocyte precursor cell transplantation into organotypic cerebellar shiverer slices: a model to study myelination and myelin maintenance. PloS one. 7 (7), (2012).
  13. Birgbauer, E., Rao, T. S., Webb, M. Lysolecithin induces demyelination in vitro in a cerebellar slice culture system. Journal of Neuroscience Research. 78 (2), 157-166 (2004).
  14. Harrer, M. D., von Budingen, H. C., et al. Live imaging of remyelination after antibody-mediated demyelination in an ex model for immune mediated CNS damage. Experimental Neurology. 216 (2), 431-438 (2009).
  15. Fancy, S. P. J., Harrington, E. P., et al. Axin2 as regulatory and therapeutic target in newborn brain injury and remyelination. Nature Neuroscience. 14 (8), 1009-1016 (2011).
  16. Zhu, X., Hill, R. A., Dietrich, D., Komitova, M., Suzuki, R., Nishiyama, A. Age-dependent fate and lineage restriction of single NG2 cells. Development. 138 (4), 745-753 (2011).
  17. Hill, R. A., Patel, K. D., Medved, J., Reiss, A. M., Nishiyama, A. NG2 Cells in White Matter But Not Gray Matter Proliferate in Response to PDGF. Journal of Neuroscience. 33 (36), 14558-14566 (2013).
  18. Zhu, X., Bergles, D. E., Nishiyama, A. NG2 cells generate both oligodendrocytes and gray matter astrocytes. Development. 135 (1), 145-157 (2008).
  19. Novak, A., Guo, C., Yang, W., Nagy, A., Lobe, C. G. Z/EG, a double reporter mouse line that expresses enhanced green fluorescent protein upon Cre-mediated excision. Genesis. 28 (3-4), 147-155 (2000).
  20. Soriano, P. Generalized lacZ expression with the ROSA26 Cre reporter strain. Nature Genetics. 21 (1), 70-71 (1999).
  21. Hirrlinger, P. G., Scheller, A., et al. Expression of reef coral fluorescent proteins in the central nervous system of transgenic mice. Molecular and Cellular Neuroscience. 30 (3), 291-303 (2005).
  22. Nave, K. -A. Myelination and support of axonal integrity by glia. Nature. 468 (7321), 244-252 (2010).
  23. Rivers, L. E., Young, K. M., et al. PDGFRA/NG2 glia generate myelinating oligodendrocytes and piriform projection neurons in adult mice. Nature Neuroscience. 11 (12), 1392-1401 (2008).
  24. Dimou, L., Simon, C., Kirchhoff, F., Takebayashi, H., Gotz, M. Progeny of Olig2-expressing progenitors in the gray and white matter of the adult mouse cerebral cortex. The Journal of Neuroscience. 28 (41), 10434-10442 (2008).
  25. Kang, S. H., Fukaya, M., Yang, J. K., Rothstein, J. D., Bergles, D. E. NG2+ CNS glial progenitors remain committed to the oligodendrocyte lineage in postnatal life and following neurodegeneration. Neuron. 68 (4), 668-681 (2010).
  26. Ioannidou, K., Anderson, K. I., Strachan, D., Edgar, J. M., Barnett, S. C. Time-lapse imaging of the dynamics of CNS glial-axonal interactions in vitro and ex vivo. PloS one. 7 (1), e30775(2012).
  27. Ghoumari, A. M., Baulieu, E. E., Schumacher, M. Progesterone increases oligodendroglial cell proliferation in rat cerebellar slice cultures. Neuroscience. 135 (1), 47-58 (2005).
  28. Azim, K., Butt, A. M. GSK3β negatively regulates oligodendrocyte differentiation and myelination in vivo. Glia. 59 (4), 540-553 (2011).
  29. Hussain, R., El-Etr, M., et al. Progesterone and nestorone facilitate axon remyelination: a role for progesterone receptors. Endocrinology. 152 (10), 3820-3831 (2011).
  30. Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue. Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 8 (10), 839-845 (2007).
  31. Lubetzki, C., Demerens, C., et al. Even in culture, oligodendrocytes myelinate solely axons. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (14), 6820-6824 (1993).
  32. Demerens, C., Stankoff, B., et al. Induction of myelination in the central nervous system by electrical activity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (18), 9887-9892 (1996).
  33. Wood, P. M., Bunge, R. P. Evidence that sensory axons are mitogenic for Schwann cells. Nature. 256 (5519), 662-664 (1975).
  34. Stevens, B., Tanner, S., Fields, R. D. Control of myelination by specific patterns of neural impulses. The Journal of Neuroscience. 18 (22), 9303-9311 (1998).
  35. Stevens, B., Porta, S., Haak, L. L., Gallo, V., Fields, R. D. Adenosine: a neuron-glial transmitter promoting myelination in the CNS in response to action potentials. Neuron. 36 (5), 855-868 (2002).
  36. Wake, H., Lee, P. R., Fields, R. D. Control of local protein synthesis and initial events in myelination by action potentials. Science. 333 (6049), New York, N.Y 1647-1651 (2011).
  37. Rosenberg, S. S., Kelland, E. E., Tokar, E., De la Torre, A. R., Chan, J. R. The geometric and spatial constraints of the microenvironment induce oligodendrocyte differentiation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (38), 14662-14667 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

NG2

Похожие статьи