Объект данио-рерио, подходящий для разведения и исследований in vivo, построен простым и доступным способом. Техническое обслуживание минимальное. Это помещение идеально подходит для участия студентов и независимых исследований.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Строительство доступного и простого в-СТРОЙ данио рерио фонда
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
В естественных условиях биомедицинских исследований имеет решающее значение для перевода в пробирке открытия в клинических достижений. Небольшие учебные заведения с ограниченными ресурсами найти практически невозможно построить и поддерживать типичные объекты грызунов для исследований. Данио рерио исследования было продемонстрировано, что полноценной альтернативой для исследований в области естественных в фармакологии, физиологии, развития и генетических исследований. Эта статья показывает, что функциональная данио объект может быть построен в легкой и доступной форме. Мы показываем, что такой объект мог бы быть построен примерно в один рабочий день с минимальными инструментами и опытом. Стоимость 27 1,8 л аквариума рыбок данио объекта, построенного в данном исследовании составляет примерно $ 1500. Мы считаем, что поддержание первоначального рабочего 150 рыб колонии в течение 3 месяцев составляет $ 1000. Этот проект вовлечены студенты, которые были введены в aquaculturing из рыбок данио для исследования предлагает.
Введение
В естественных условиях модели имеют важное значение в проведении всеобъемлющего биомедицинских исследований, так как они позволяют в исследовании пробирке для перевода на системы и организменном уровне. Например, исследование с мелких млекопитающих, а именно грызунов, было доказано необходимости в разработке лекарственных средств, и в улучшении доступных препаратов. Тем не менее, сложность (финансовую и материально-) может сделать это практически невозможно построить и поддерживать грызунов возможности для экспериментов предлагает на небольших научно-исследовательских академических институтов. Тем не менее, в естественных условиях исследования могут быть выполнены с использованием других видов животных, которые требуют менее сложной логистики. Данио рерио (Danio rerio), были успешно использованы в качестве модели в естественных условиях для изучения генетики, развития, патофизиологии и фармакологии 1,2,10,11,12. Ресурсы, необходимые для размещения данио для экспериментов относительно просты и значительно дешевле по сравнению с RОден объектов. Ким и др. 3 недавно подробно описаны 80 танка систему данио жилой недвижимости, что может быть построен примерно за $ 1500, которая включает в себя обе части и трудовые затраты. Это находится в резком контрасте с почти $ 8500, которые будут обязаны покупать готовую, система 80 танка из числа коммерческих поставщиков. Тем не менее, описание, данное Ким и др. может быть сложным и трудно следовать для новичков исследования рыбы. Мы считаем, что данио объект может быть построен в упрощенном порядке для инвестиций в размере $ 1500.
Создание объекта в естественных условиях на малых академических институтов обеспечивает свои способности дополнительный инструмент, с помощью которого для получения более мощный и тщательного исследования. Данные в пробирке, поддерживаемые в естественных условиях результаты в целом более полных биомедицинских исследований, чем данными, полученными с использованием только в подходах пробирке. Таким образом,внедрение в естественных условиях научно-исследовательский центр будет существенно улучшить эффективность учреждения в его общих научно-исследовательской деятельности (студент воздействия исследований, публикаций и коммуникаций, достижения внешнего финансирования и т.д.)..
Строительство данио рерио объекта, подобной описанной в данном исследовании, идеально подходит для научно-исследовательских академических учреждений с ограниченными удобствами (или учреждения без в естественных условиях научно-исследовательских учреждений) в течение сжимая Financial Times.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Эти протоколы в соответствии с руководящими IACUC пресвитерианской колледжа.
1. Приобретите материалов, перечисленных в таблице 1.
2. Соберите 5 Полка Chrome в соответствии с инструкциями производителя. Эта информация будет использоваться в дом центр.
3. Построить резервуар для воды и системы фильтрации (1А и 2).
- Использование рисунке 1а в качестве руководства, макет 18-галлонов ведро, насос, фильтры и УФ-лампы для определения окончательного места установки и размера.
- После того, как детали изложены, измерить и сократить ¾ "ПВХ труб до длины, необходимой для сборки. Вары длины всех труб в зависимости от конкретных космических потребностей и ограничений.
- Соберите трубы и фитинги, как изложено ранее с использованием праймера и цемента ПВХ, смотрите ниже (3.3.2 и 3.3.3).
- Песок вырезать края трубы с наждачной бумагой, пока они не являются гладкими на ощупь апd нет никакого мусора.
- Председатель пределами трубы и внутри фитинга с приобретенной ПВХ праймера с включенным тампона из ПВХ грунтовки.
- Цемент трубу и фитинг вместе с применением цемента ПВХ к наружной трубе с помощью прилагаемого тампон. Повторите эти действия для всех шагов, которые необходимо цементирования из ПВХ.
- Поместите 18 галлонов ведро с одной стороны конструкции полке.
- Установите разъем перемычки в стороне резервуара.
- Прикрепите ¾ "ПВХ трубы в переборку.
- Подключите другой конец ¾ "трубы к насосу, используя ¾" с резьбой облегчения установки.
- Подключите фильтры для насосу с помощью двух 90 градусов локти и ¾ "ПВХ труб.
- Используйте один бумажный фильтр следует один фильтров с активированным углем для того, чтобы отфильтровать мусор и снижения уровня хлора и химических веществ в воде.
- Подключите УФ-лампы в соответ фильтрынг с инструкциями изготовителя.
- Прикрепите насос и систему фильтров в верхней части первой полке стойки с использованием проводных связей. Измените порядок сборки и монтажа в соответствии с размером и планировкой полка / стойку выбрали.
- Добавить 1 BioBall на литр воды в бак для воды, как только насос и система фильтрации собраны и прикреплены к полке.
4. Построить главной линии (рис 1B и 2).
- Отмерьте и отрежьте кусок ¾ "ПВХ трубы для подключения УФ-лампы к источнику питания
- Используйте ¾ "ПВХ тройник, чтобы начать основную линию подачи путем подключения тройник с ¾" ПВХ выхлопных газов, поступающего из УФ-фильтром. ,
- Добавить на кран в нижней части тройника ПВХ в качестве стока для обслуживания промывки системы.
- Начните основную линию питания от верхней части ¾ "ПВХ тройник путем измерения и резки ¾" ПВХтрубы до нужной длины, чтобы обеспечить подачи трубы для каждого из полок на стеллаже.
- Установите ¾ "ПВХ тройники для горизонтальных линий, которые войдут каждую полку стеллажа.
- При желании (и предложил), добавьте ¾ "включения-выключения клапана для каждой полки линии подачи для обеспечения изоляции каждой полке и модульной конструкции системы.
- Используйте ¾ "ПВХ трубы в редукционного линии на верхней полке. Если эта линия проходит от задней части полки, использовать эту полку для хранения. Конец понижения давления линии в главном выпускном трубопроводе (рис 1б) с ¾ "на кран.
- После того, как эти шаги были завершены, премьер и цементировать трубы ПВХ вместе, как сделано ранее при построении резервуара и система фильтрации.
5. Построить главный выпускной линии (рис 1С и 2).
- Запуск вертикальную длину основной линии выхлопа на другой стороне стойки Fрум главной линии. Используйте 2 "трубы ПВХ для этой вертикальной линии получить основную линию подачи в верхней и дренажных линий от танков рыбы от каждой полке.
- Вырезать куски 2 "трубы ПВХ для основного вертикального выпускного трубопровода, и использовать 2" ПВХ тройники получить аквариум дренажными линиями с каждой полки. Конец основной линии выхлопа в товарной изгнать оборотной воды в течение губкой фильтра.
- Вырезать один дюйм отверстие на всю длину 2 "отрезков труб ПВХ и прикрепить к вертикальной основной линии выхлопа с тройники ПВХ для горизонтальных линий вытекать из аквариумов.
- Крышка "горизонтальные линии слива с 2" 2 ПВХ крышкой.
- Премьер и цемента части, используя необходимые фитинги (соединители, соски или локти).
6. Построить аквариумы (рисунок 3).
- С сверла, вырезать 1 1/8 "отверстие в задней части бака рыбы 1" ниже верхнего края с кольцевой пилы. Слайд резьбой ¾ "ПВХ мужской адаптер (с # 18 O кольцо прилагается) через отверстие (с внутренней стороны резервуара наружу).
- Прикрепите и затяните на 90 градусов 3/4 "с резьбой ПВХ локтем в штырем для создания аквариума выхлопную трубу. Добавить кусочек мелкой сеткой до завинчивания удерживающую гайку, чтобы предотвратить данио, проходящий через систему выпуска отработавших газов.
- Поместите аквариум с его выхлопной трубы окончания в открытое пространство дренажной линии за танками
7. Запуск системы водоснабжения
- В некоторых контейнерах, таких как той, которая используется для резервуара, измерения в три раза больше воды, содержащейся в системе. Пусть эта вода при комнатной температуре для кондиционирования в течение 48 ч.
- Добавить воду в систему и пусть он циркулировать в течение как минимум 3 дней.
- Изменение воды в системе энергично в течение начальных 3 дней циркуляции для того, чтобы избавить систему от загрязнений Тат находятся в трубах.
- Добавить стартера данио и позволяют азотный цикл устроиться. Нормализация рН до постоянной 7. Держите семь данио в 1,8 л, и кормить их два раза в день в течение дней недели и один раз в день в выходные дни как это было предложено LiNbO 4 и МакНабба 6.
- Монитор нитратов (<75 мг / л), нитрит (<10 мг / л), и аммония (0 мг / л) ежедневно в течение первой недели после добавления рыбу, и два раза в неделю После получения желаемого уровня были сохранены с регулярными заменами воды ,
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Строительство насосной системы и Flters
После того, как стойка собраны и создали первый шаг заключается в создании насоса и фильтра системы. Фильтры подключен к системной насоса и расположены выше нижнего уровня первого полке, что позволяет для легкого обслуживания фильтра и замены. Кроме того, УФ-лампа связано с ПВХ трубы к фильтру и удерживается на месте с пластиковыми проволочными стяжками для обеспечения легкой замены УФ-лампы при необходимости (рис 4а). Сразу же после насоса бумажный ...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Основная цель этой статьи заключается в демонстрации того, что строительство функционального данио объекта не представляется сложным и может быть построена начинающих рыбы исследователей с минимальными знаниями строительства. Кроме того, эта статья показывает, что материалы для этого функционального данио объекта могут быть приобретены легко и доступно из местных зоомагазинах питания или хозяйственных магазинах. После того, как все материалы и инструменты были приобретены строительство системы и аквариумы занимает около...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют никакого конфликта интересов в рамках данной статьи.
Благодарности
Авторы хотели бы поблагодарить Управление исследований пресвитерианской Колледжа фармации для финансовой поддержки этого проекта через небольшой аптечных наград за исследования и сотрудничество (SPARC) премии. Авторы выражают благодарность г-н Джон Smink, менеджер исследовательской лаборатории водных животных, Клемсон университет, Клемсон, SC за его технической рукописи помощь пересмотра.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Количество товара | Марка | 74 | |
| дюйма В x 48 дюймов Ш x 18 дюймов Г 5 полок Сталь Отдельно стоящий стеллаж | Выбор | стиля 1 | |
| 18-галлон Общее ведро / контейнер | Centrex Пластик: ООО & nbsp; Прочная сумка-тоут | 1 | |
| 6-розетный удлинитель с 15-футовым шнуром | Мастер-электрик | 1 | |
| 9-ваттный УФ-осветлитель для водного сада FiIter и УФ-лампа | Smartpond | ||
| Фильтр для замены воды для всего дома | Whirlpool | 6 | |
| Непрозрачный корпус предварительной фильтрации для всего дома | Whirlpool | 2 | |
| Ниточная уплотнительная лента | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC ПВХ Цемент | Oatey | ||
| 8-жидкая унция грунтовки LO-VOC | Oatey | ||
| 1/4 дюйма x 100 футов Виниловая трубка для капельного орошения | Mister Landscaper | ||
| 1/4-дюймовый колючий капельный полив вкл/выкл клапан | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-портовый коллектор NPT для полива с | фильтром Mister Landscaper | 6 | |
| Встраиваемый фильтр с домом | Whirlpool | 6 | |
| 2-дюймовый диаметр 90-градусный ПВХ колено | LASCO | 3 | |
| 2-дюймовый диаметр 90-градусный тройник | LASCO | 3 | |
| 3/4-дюймовый диаметр 90-градусный скользящий колено | LASCO | 15 | |
| 3/4-дюймовый адаптер из ПВХ диаметра | LASCO | 7 | |
| 3/4-дюймовый тройник из ПВХ | диаметра LASCO | 12 | |
| 2-дюймовый колпачок из ПВХ | LASCO | 3 | |
| 1 дюйм x 3/4 дюйма Адаптер LASCO | 2 | ||
| 3/4 дюйма Гнездо из ПВХ Линейный шаровой кран | Американский клапан | 5 | |
| 1/2-дюймовый диаметр x 3/4-дюймовый адаптер из ПВХ | Lasco | 8 | |
| 3/4-дюймовый колпачок из ПВХ | Lasco | 1 | |
| 2-дюймовый x 5-футовый труба из ПВХ | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾ Вход x 10-футовая труба из ПВХ | Труба Шарлотта | 3 | |
| 11/16x1-7/80 кольцо из ПВХ | SXT | 10 | |
| & frac12; ” Адаптер с наружной резьбой | ПВХ SXT | 1 | |
| ¾ ” Муфты из ПВХ | SXT | 1 | |
| ½ ” Адаптер с внутренней резьбой ПВХ | SXT | 1 | |
| звено | |||
| 1,8 л Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾ ” Адаптер с наружной резьбой из ПВХ (с уплотнительным кольцом #18) | SXT | 28 | |
| 90-градусов ¾ ” резьбовой ПВХ колено | SXT | 27 | |
| Мелкоячеистый | Н/Д | 1 Ярд | |
| Соединитель переборки | Н/Д | 1 | |
| Ножовка | Н/Д | 1 | |
| Дрель | Н/Д | 1 | |
| Дырорезная пила | Н/Д | 1 | |
| Разводной ключ | Н/Д | 1 | |
| Плоскогубцы | Н/Д | 1 | |
| Рулетка | Н/Д | 1 | |
| Защитные очки | Н/Д | 1 | |
| Рабочие перчатки | Н/Д | 1 |
Ссылки
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. Modular, easy-to-assemble, low-cost facility. Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196(2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
