Методическая статья

Методика свиной печени закупок и Ортотопическая трансплантации с использованием активного Порто-Caval шунт

16.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52055

⸱

7 мая 2015 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Multi Organ Transplant Program, Department of Surgery, Toronto General Hospital

В этой статье

Краткое содержание

Экспериментальные исследования на животных играют ключевую роль в развитии клинической практики трансплантации. Модель ортотопической трансплантации печени свиней (OLTx) очень похожа на человеческую и часто используется в клинически ориентированных исследованиях. Следующий протокол содержит всю информацию для надежной модели OLTx свиньи с использованием активного порто-кавально-яремного шунта.

Аннотация

Успех трансплантации печени привел к резкой нехватке органов. Каждый год значительное число пациентов в листе ожидания на трансплантацию печени умирают, не получив пересадку органа, или исключаются из списка из-за прогрессирования заболевания. Даже после успешной трансплантации отторжение и побочные эффекты иммуносупрессии остаются основными проблемами для приживаемости трансплантата и заболеваемости пациентов.

Экспериментальные исследования на животных сыграли важную роль в успехе трансплантации печени и до сих пор играют ключевую роль в развитии клинической практики трансплантации. В частности, модель ортотопической трансплантации печени свиней (OLTx) оптимальна для клинически ориентированных исследований из-за ее близкого сходства с размерами, анатомией и физиологией человека.

Декомпрессия кишечного застоя во время ангепатической фазы OLTx свиней важна для обеспечения надежного выживания животных. Использование активного порто-кавально-яремного шунта позволяет добиться отличной декомпрессии кишечника. Система может быть использована как для краткосрочных, так и для долгосрочных экспериментов по выживанию. Следующий протокол содержит всю техническую информацию для стабильной и воспроизводимой модели трансплантации печени у свиней, включая послеоперационный уход за животными.

Введение

Трансплантация печени Ортотопическая (OLTx) является единственным вариантом лечения для пациентов с терминальной стадией заболевания печени или гепатоцеллюлярной карциномы передовых. За последние 25 лет, количество кандидатов в списке ожидания постепенно увеличивается и в настоящее время намного превышает количество доступных трансплантатов. В большинстве регионов трансплантации, от 20 до 30% пациентов, включенных в список очередников для трансплантации печени умирают, не получая трансплантации или исключены из-за прогрессирования заболевания. Стратегии повышения доноров бассейн и, таким образом, количество доступных трансплантатов, отчаянно требуется. Развернутый критерии распределения орган, длительное сохранение трансплантата, и индукции иммунологической толерантности по-прежнему представляют собой основные клинические проблемы 1-3. Следовательно, экспериментальное исследование OLTx имеет решающее значение для того, чтобы оптимизировать клиническую практику OLTx.

Свиноводство является OLTx хорошо создана экспериментальная модель, которая напоминает человеческую OLTx во многих отношениях, включая лРазмер Iver, анатомия, и физиология 4-6. Таким образом, он стал стандартом экспериментальный метод в научных областях, таких как хирургические методы, физиологии, иммунологии, сохранение и ишемии-реперфузии. Многочисленные методы трансплантата закупок, получатель резекции печени, и, в частности сосудистой реконструкции, были описаны в литературе 5. Выбор подходящего метода варьируется в зависимости от предпочтений исследователя и технических возможностей.

В отличие от человека сценарии внутренностный заторов в течение anhepatic фазы представляет важную проблему в свиной OLTx. После кишечная ишемия и застойной сосудистой ущерб может привести к серьезным нестабильности гемодинамики, ставя под угрозу выживание свиньи и, таким образом, успех эксперимента 7-9. Таким образом, достаточно кишечного декомпрессии является обязательным, особенно в менее технически изысканных экспериментальных условиях.

НамIng активную порто-вены-шунт яремную для продолжительности anhepatic фазы является надежным вариантом, чтобы избежать перегруженности кишечника. Система может быть использована для ранних экспериментов реперфузионных а также сценариев долгосрочного выживания. Следующий протокол содержит всю информацию для стабильного и воспроизводимого печени трансплантации модели у свиней, в том числе доноров закупок печени, в том числе работы получателя резекции печени и конца в конец методов реконструкции судно, и послеоперационного ухода.

Протокол

Все животные получали гуманного ухода в соответствии с '' Принципы лабораторных животных '', сформулированных Национальным обществом для медицинских исследований и '' Руководство по уходу за лабораторными животными '' опубликован Национальными Институтами Здоровья, Онтарио, Канада , Уход Комитет животных в Торонто Генеральной научно-исследовательского института одобрил все исследования.

1. Орган поисковая

  1. Дом мужчины Йоркшир свиней от 30 до 35 кг в научно-исследовательский центр в течение 1 недели до трансплантации, чтобы предотвратить стресс-индуцированной физической реакции (которая может изменить исход перфузии в 10,11) и акклиматизироваться животных, чтобы жилищных условий. Быстрое свинью в течение как минимум 6 часов до индукции анестезии.
  2. Обезболить доноров свинью внутримышечной (IM) инъекции смеси кетамина (25 мг / кг), атропин (0,04 мг / кг) и мидазолама (0,15 мг / кг).
  3. До интубации, обеспечить свинья спонтанно дышит 2 л кислорода дозированное с 5% изофлуран. В положении лежа на спине, спрей голосовые связки с 2% лидокаин 2 мин перед интубации, чтобы избежать вокальные спазмы мозга. Для 35 кг свиньи, использовать 6,5 Fr трахеи трубки. Блок трахеи трубку с 3 - 5 мл воздуха в помещении.
  4. После интубации, используйте capnometry, чтобы подтвердить правильность интубации. Монитор сердечного ритма и насыщения кислородом по пульсоксиметрии в хвост свиньи. Опустите ИФ испаритель до 2%.
    1. Регулировка глубины анестезии минимальным альвеолярной концентрации (ПДК) значения; стремиться к 2 - 2,5 ПДК. Установите вентилятор 14 - 16 вдохов / мин и приливно-отливной объема 10 - 15 мл / кг массы тела.
  5. Разместить 18 г внутривенно (IV) катетер в одном из вен уха, чтобы вливание лактата Рингера (200 мл / ч). Скраб свинью и покрыть ее стерильными пеленками.
  6. Убедившись, стерильные условия, сделать срединной лапаротомии FOLLOво главе с левым боковым расширением. Используйте полотенце, чтобы покрыть большие и малые кишечника перед их перемещением с левой стороны.
  7. Разделите серповидной связки и треугольное связки, используя прижигания.
  8. Отпустите печень от диафрагмы на правой стороне, используя электро-прижигание; использовать ножницы для верхней части между веной и диафрагмы. Рассеките infrahepatic вены до филиала надпочечников вены на правой стороне и почечной вены на левой стороне.
  9. Отделите infrahepatic вены и аорты дистального друг от друга; перевязывать ветви аорты к позвоночнику; изолировать и бесплатных почечных артерий из клейкого ткани. Окружите каждый почечной артерии с 2-0 галстук.
  10. Черепно в левой почечной вене, рассекают аорты и брыжеечной артерии. Окружите брыжеечной артерии с 2-0 галстук.
  11. После открытия брюшины краниально к брыжеечной артерии, внимательно следить за аорты к чревного ствола. Проанализируйте чревного ствола каудально на портале вев; окружают селезенки и левой желудочной артерии, которые разветвляются в задней от чревного ствола. Проанализируйте чревного ствола от воротной вены.
  12. Отпустите воротной вены с помощью перитонеального разрез между поджелудочной железы и портальной вены. Галстук вены, впадающие из поджелудочной железы в воротной вене.
  13. Отделите желчный проток из печеночно связки и разделить его дистально после перевязки.
  14. Перевязывать лимфатические сосуды внутри печеночно связки, чтобы предотвратить утечку лимфатическую. Разделите гастродуоденальной артерии и артерии желудка правильные между связями. Перевязывать мелкие вены.
  15. Проанализируйте аорты позади диафрагмы между сердцем и чревного ствола. Поместите 2-0 галстук вокруг аорты краниально к чревного ствола.
  16. Удалить желчный пузырь и прижечь любое кровотечение из ложа желчного пузыря.
  17. Откройте диафрагму. Администрирование 1000 МЕ / кг массы донорской гепарина внутрисердечно или внутривенно указан изофлурана до 5% (> 2,5 ПДК) для того, чтобы достичьглубже анестетик уровень. Для донора после смерти кровообращения (ДКД) модели, вызвать остановку сердца в внутрисердечной инъекции 40 mval KCl 3 мин после введения гепарина. Установите остановка сердца в качестве отправной точки теплой ишемии.
  18. Галстук ранее установленные связи по всему почек, мезентериальных, селезеночной и левой, артерий желудка. Галстук аорты дистальнее почечных между и подвздошных артерий и аорты иглу с органной флеш линии.
  19. Свяжите от воротной вены, как проксимально, насколько это возможно, и иглу его с другим органом флеш линии.
  20. После закрытия предварительно заданного галстук вокруг проксимального отдела аорты, промойте печень с 2 л холодной университета Висконсина раствор (UW) с помощью двойной перфузии с помощью аорты (мешок) и давления воротной вены (тяжести приводом).
  21. Акцизный печень, оставив все остальные сосуды долго. Оставить щедрый диафрагмы обод вокруг suprahepatic вены. Поместите печень в стерильный мешок органов на льду.
  22. Во назад стола подготовки, клусилителя в suprahepatic вены, используя зажим Сатински и промойте печень второй раз с 0,5 л раствора UW ретроградно через нижний нижней полой вены до отток воротной вены не ясно.
  23. Свяжите от всех артериальных ветвей аорты и чревного ствола. Выполните перфузии артериального давления обратно стол с оставшимся 0,5 л раствора UW 12.
  24. Промойте желчный проток, используя решение UW.
  25. Обрезать диафрагмы патч для приличного размера. Закройте все диафрагмального вены - обычно 3, 1 слева и справа, и 1 задняя - с помощью 4-0 мононити полипропиленовые стежков.
  26. Закройте мешок органов и хранить печень на льду.

2. Получатель ГЕПАТЭКТОМИИ

  1. Обезболить свинью получатель с помощью внутримышечной инъекции смеси кетамина (25 мг / кг), атропин (0,04 мг / кг) и мидазолама (0,15 мг / кг).
  2. Поместите кота в положении лежа на спине на операционном столе поверх нагревательного мата. Накройте свиной Wiго тепла циркулирующим одеяло.
  3. До интубации, обеспечить свинья спонтанно дышит 2 л кислорода дозированное с 5% изофлуран. Спрей голосовые связки с 2% лидокаин 2 мин перед интубации, чтобы избежать вокальные спазмы мозга. Для 35 кг свиньи, использовать 6,5 Fr трахеи трубки. Блок трахеи трубку с 3 - 5 мл воздуха в помещении.
  4. После интубации, используйте capnometry, чтобы подтвердить правильность интубации. Монитор сердечного ритма и насыщения кислородом по пульсоксиметрии в хвост свиньи. Место и закрепите датчик температуры в рыло свиньи. Опустите ИФ испаритель до 2% (стремиться к 2 - 2,5 ПДК). Установите вентилятор 14 - 16 вдохов / мин и приливно-отливной объема 10 - 15 мл / кг массы тела.
  5. Используйте мазь на глазах, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
  6. Используйте технику Сельдингера 13 вставить оболочки индуктор (8,5 Fr) в левой наружной яремной вены. Используйте этот катетер позже для активного обхода портал-вены-яремной.
  7. Используйте Сельдингера techniquе, чтобы вставить общую парентерального питания (ТПС) катетер (9,5 Fr) в правой наружной яремной вены.
  8. В стерильных условиях, рассекают в правую сонную артерию и вставить катетер полипропилена (18 г) для мониторинга инвазивного артериального давления. Окружите артерии с 2-0 шелковый галстук, чтобы аварийный перевязка.
  9. Выключите изофлуран испаритель до 1% (1,5 - 2 ПДК) и добавить пропофол (5 - 8 мг / кг / ч внутривенно), чтобы сохранить глубину анестезии. Для обезболивания, использовать непрерывную внутривенную инфузию фентанилцитрата (наиболее предпочтителен, 2 мкг / кг / ч) или ремифентанил (второй вариант, 15 мкг / кг / ч).
  10. Перед разрезом кожи, дать 1000 мг цефуроксима и 500 мг метронидазола внутривенно. Настройка инфузионный насос, используя лактат Рингера с 5% глюкозы в 150 мл / ч.
  11. Поместите тепловой циркуляции одеяло на голову и область шеи. Скраб свинью и покрыть ее стерильными пеленками.
  12. В стерильных условиях, сделать срединной лапаротомии. Вставьте в животе гetractor, чтобы получить достаточный доступ к правом подреберье.
  13. Разделите falciforme связки и треугольное связки, используя прижигания.
  14. В нескольких шагах, разделить печеночно связки, близкий к печени между связями. Определить, разделить, и отметьте ветви артерии и желчного протока печени.
  15. Проанализируйте печеночной артерии ретроградным до разделения гастродуоденальной артерии. Убедитесь, что бульдог зажим подходит для вокруг общей печеночной артерии проксимальнее к гастродуоденальной артерии для последующего зажима.
  16. Освободите воротной вены из клейкого ткани.
  17. Мобилизация полую вену от забрюшинного пространства справа с использованием электро-прижигание. Используйте ножницы для верхней части между веной и диафрагмы. Рассеките infrahepatic вены до филиала надпочечников вены на правой стороне и почечной вены на левой стороне.
  18. Expose воротах селезенки. Примерно на полпути по длине селезенки, необходимо тщательно очистить оте селезеночной артерии и вены из прилипших брюшины слоев. Окружите как селезеночной артерии и вены с 4 2-0 шелковых галстуков.
  19. Вставьте 8,5 Fr оболочки индуктор с 2 дополнительными отверстиями в наконечнике катетера в селезеночной вены, указывая дистально к воротной вены. Закрепить катетер дистальнее его вставки с одной из 2-0 связей и закройте вены проксимальнее вставки с другим 2-0 галстука. Оставьте остальные 2 связи открытым.
  20. Забор крови из катетера, промыть ее с 10 мл физиологического раствора, и закройте фиксатор катетера.
  21. Заполните солевой раствор в байпас, состоящей из центробежного насоса, головки яремной трубки (3/16 "), и приток с обеих портальной ветви (3/16") и вены ветви (1/4 ", люэровского разъем на проксимальной открытие). Поместите зажим трубки на проксимальном конце полой трубки.
  22. Подключите портала и яремной открытие объездной в обоих оболочка для введения катетеров (рис 1) и запечатать Conneие с металлорукава зажимного кольца. Поместите центробежный насос голову в его положении насоса.
  23. Дайте 1000 мг транексамовой кислоты и 10 000 МЕ гепарина 3 мин IV до пережатия. Уменьшите скорость инфузии пропофола до 2 мг / кг / ч в течение времени anhepatic фазы. Отрегулируйте ИФ концентрации в артериального давления и реакционной свиньи.
  24. Откройте зажимы обеих оболочки для введения катетеров и кросс-зажима портальной вены. Убедитесь, что кровь проходит через байпас пассивно.
  25. Начните центробежный насос на около 1500 выстрелов / мин. Продолжить перекрестного зажима, если) свинья cardiovascularly стабильной и б) обхода работает около 500 мл / мин. Если свинья не терпит пережатие, заменить громкости (кристаллоидов или коллоидов) и инотропным агентов (норадреналина в малом комков).
  26. Крест зажим infrahepatic полую вену просто черепной в почечных вен с помощью зажима Де Бейки-Бек. Приложите усилие на TISS печениие выжать часть остатка крови. Кросс-зажим suprahepatic полую вену в том числе с использованием диафрагмы обода зажим Сатински а втягивания печени каудально.
  27. Вырезать suprahepatic полой вены непосредственно на ее границе с ткани печени. Затем разрезать на портальную вену возле печеночной воротах.
  28. Около 4 см краниально к infrahepatic вены зажима, вырезать отверстие в передней стенке полой вены. В это отверстие, поместите разъем открытия байпаса 'вены с люэровского перед вперед.
  29. Закрепите разъем в infrahepatic вены с 1-0 шелковых галстуков. Затем откройте зажим труб в вены филиала байпас.
  30. Наконец, откройте infrahepatic вены зажим, чтобы позволить вены-яремной байпас в дополнение к существующей порто-яремной байпас. Увеличение скорости насоса до примерно 2500 выстрелов / мин, так что отток байпаса на яремной стороне между 900 - 1100 мл / мин.
  31. Акцизный печень в оставшейся Connection краниально к разъему infrahepatic байпаса, гарантируя, что связи, обеспечивающие подключение байпаса не резать. Расположите обход трубки осторожно, чтобы избежать перегибов. Дайте 500 мг метилпреднизолона для инициализации иммунитета.

3. Реконструкция судно

  1. Использование 4-0 мононити полипропиленовые швов, закройте все 3 диафрагмального вены Остии на стороне получателя в отверстие в suprahepatic Cava в. Вышивание двойные вооружены 4-0 мононити полипропиленовые швов внутри-снаружи в обоих углах suprahepatic вены на стороне получателя.
  2. Удалить донорского органа мешок из коробки льда. Откройте сумку органов, удалить донорскую печень, и поместить его в брюшную полость.
  3. Для анастомоза конец в конец suprahepatic вены, отделка доноров suprahepatic полую вену, чтобы соответствовать стороне получателя. Использование внутри иглы стороне получателя угловых швов, сделать внутри-снаружи угловой шов на каждой из сторон в suprahepatic донор вены.
  4. Выстрел оба конца правой нити вместе. Приблизительная как Остии получателя и донора вены, затем связать обе концовки левой швом.
  5. Выстрел короткий конец и сделать снаружи внутри стежок вены реципиента задняя стенка рядом с галстуком. Запустите на задней стенке, в идеале выворачивания кава стены.
  6. Добавьте 2-3 передние стежки настенные с той же нити сразу правая сторона была достигнута, то снял это шовный концовку. Запустите на передней стенке, используя оставшиеся шов от левого угла. Свяжите оба швов, используемых для задней и передней стенок. Свяжите два других шовные окончания в правом углу.
  7. После обрезки донор воротной вены до соответствующей длины, выполнить воротной вены анастомоз конец-в-конец таким же образом, используя 6-0 мононити полипропиленовые швов. Незадолго до окончания с передней стенкой, интубация просвет вены infrahepatic с другим флеш линии и промойте решение UW 1 л физиологического растворапри комнатной температуре с помощью infrahepatic cavaportal вены.
  8. Заполните анастомоза и галстук швы, оставив примерно 0,5 см фактора роста. Иными Де Бек Bakey- зажим на доноров infrahepatic вены.
  9. Откройте suprahepatic вены зажим и проверить кровотечения. Затем, reperfuse печень, открыв портал зажим.
  10. Используйте 6-0 мононити полипропиленовые швов для гемостаза стежков. Уменьшить скорость обходного насоса до 1500 выстрелов / мин и закройте зажим портала оболочки для введения катетера.
  11. Reclamp сторону получателя infrahepatic полой вены и поставить хомут трубки на вены части объездной. Остановите центробежный насос.
  12. Вырезать связей с полой разъем и снимите его. Вернуться оставшуюся кровь через байпас к свинье через яремную катетер.
  13. Закройте зажим яремной катетер и отсоедините байпас. Получали 100 мг сульфата протамина антагонистами гепарина. Соблюдайте особую осторожность в пигемодинамика G во время этих шагов; использовать катехоламин для поддержания давления и замены бикарбоната натрия для метаболического ацидоза.
  14. Выполнение анастомоза конец в конец infrahepatic вены снова в порядке, описанном выше, с использованием 5-0 мононити полипропиленовые швов. Reperfuse в infrahepatic нижнюю вену, выпуская оба зажима.
  15. Обрезка аортальный патч вокруг чревного ствола донора. Галстук получателя гастродуоденальной артерии рядом с общей печеночной артерии. Положите бульдог зажим на общей печеночной артерии проксимальнее стыке гастродуоденальной артерии. Обрезать небольшой артериальное патч с ножницами Поттс, используя сосудистую ткань вокруг перехода.
  16. Промойте доноров печеночной артерии с 10 мл физиологического раствора гепарина и поставить еще бульдог зажим дальше дистально, чтобы избежать обратно кровотечение. Анастомозирует с артериальной Остии конец-в-конец в технике бега с парашютом, с использованием 6-0 Мононить полипропиленовая нить. Reperfuse первым ОПЕНин дистальной, а затем проксимальные бульдог зажимы.
  17. Анастомозирует с конца в конец желчного протока с 2 6-0 мононити полипропиленовые швов с использованием бегущего описанную выше методику. Убедитесь, что большие участки ткани peribiliary включены, потому что свиньи желчного протока очень хрупкие и легко рвется.
  18. После проверки гемостаза, удалить оболочку проводниковую катетер из селезеночной вены. Закройте первый и второй концы с остальными 2 связей.
  19. Закройте брюшной стенки с размером 1 мононити рассасывающиеся нити. Закройте кожу либо степлером кожи или любом 2-0 шва.

4. послеоперационном периоде

  1. Используйте грелку и тепловой циркуляции одеяло, чтобы держать свиней в тепле.
  2. Примеры газов крови ежечасно. Регулировка обезвоживание за счет увеличения скорости инфузии.
  3. Отучить анестезии. Проветривайте свинью еще на 2 часа.
  4. Снимите кожух проводниковую катетер из левой яремной вев. Нажмите твердо в течение нескольких минут, чтобы предотвратить кровотечение.
  5. Туннель ТПС катетер подкожно в сторону шеи свиньи. Закрепите его с 2-0 швов.
  6. Удалить артериальной линии после 2 часов, если свинья гемодинамически стабильным без поддержки катехоламинов. Убедитесь, что сторона прокол не кровоточит. В противном случае, сделать 6-0 кошелек-строку стежок вокруг артериальной отверстие, не закрывая артерии. Закройте разрез сайт.
  7. Остановите вентиляцию сразу свинья может самостоятельно дышать. Отключите трубку вентиляции от трахеи трубки. Повторно проверьте, если свинья достаточно дыхание.
  8. Поместите кота в положении лежа в одной ручкой животных, снабженной нагревательным лампы. Экстубации как только свиньи способны держать голову самостоятельно. Не оставляйте животное без присмотра, пока он не пришел в сознание достаточно, чтобы поддерживать грудины лежачее положение. Дом свинья отдельно для всей послеоперационном периоде.
  9. Предоставлятьдостаточно IV обезболивающее после операции (например, бупренорфин 0.01 - 0.05 мг / кг каждые 6 часов).
  10. Если свинья не пить самостоятельно, заменить достаточно Том IV
  11. Продолжить метилпреднизолон как иммуносупрессии (250 мг послеоперационный день (POD) 1 утром и затем 125 мг каждое утро). Начните цефалоспориновым 2 мг / кг перорально два раза в день с POD2 на.
  12. Администрирование 500 мг метронидазола и 1000 мг два раза в день cefazoline, а также 20 мг пантопразола один раз в день до POD3.
  13. Монитор свинью тесно. Не стесняйтесь принести в жертву, если она показывает признаки страдания (например, апатия, реинфузия пить, постоянный ацидоз или гипогликемия, или признаки кровотечения или перитонита). Для эвтаназии, обескровить свинью под глубоким наркозом изофлуран (5%,> 2,5 ПДК) путем разрезания suprahepatic вены.

Результаты

В первом исследовании трансплантации, сердечно-доноров бить модели (кч, N = 5), по сравнению с моделью DCD (N = 10) подвергается 45 мин теплой ишемии на месте. В обеих группах, трансплантаты были сохранены на льду в течение 10 часов после закупки.

В группе кч, 100% свиней получателей не дожили до конца последующей деятельности по 5-й день после трансплантации. В группе DCD, только 50% свиней-реципиентов выживали в течение 5 дней из-за проблем коагуляции или метаболического декомпенсации, в результате снижения послеоперационной функции печени.

Все образцы крови собирали из центрального венозного катетера. После центрифугирования, образцы сыворотки были получены и проанализированы для гепатоцеллюлярной травмы (аспартатаминотрансферазы, АСТ), желчных функции (общий билирубин и щелочной фосфатазы), и функции печени (INR). Конечно времени каждого маркера показано на рисунках 2 - 5.


Рисунок 1. Схема порто-вены-яремной шунта. Байпас заполнено раствором лактата Рингера. Затем вены часть зажимается зажимом труб, яремной и селезенки части соединены с заданными катетеров, байпас открыт, и центробежный насос запускается после зажима портальной венозной. После резекции печени, вены часть объездной вставляется и крепится в infrahepatic полой вены пень, от головы к почечных вен. Зажим трубки освобождается, чтобы вены декомпрессии, в дополнение к портальной декомпрессии.

figure-results-1
Рисунок 2. аспартатаминотрансферазы (AST) (ХАБАД N = 5, DCD N = 10). АСТ является чувствительным маркером гепатоцеллюлярной травмы. Пик кормовойER 24 часа в кч ниже, чем в группе DCD, предполагая, менее реперфузионного повреждения печени; стандартное отклонение меньше, показывает более однородные результаты в группе кч.

figure-results-2
Рисунок 3. Общий билирубин (ХАБАД N = 5, DCD N = 10). Общий билирубин, в качестве маркера желчных оформления и желчных протоков целостности, показывает стабильный и однородный тенденцию со значениями ниже 10 мкмоль / л в группе кч. Кривая билирубина в группе постепенно увеличивается DCD с течением времени и показывает высокую стандартное отклонение, предполагая, желчных травмы лишь в части экспериментальной группе.

figure-results-3
Рисунок 4. щелочной фосфатазы (ХАБАД N = 5, DCD N = 10). Щелочную фосфатазу яS показатель желчных травмы. Значения группы кч ниже, чем в группе DCD, что предполагает меньшую желчных травмы.

figure-results-4
Рисунок 5. INR (ХАБАД N = 5, DCD N = 10). Высокое значение указывает уменьшенное INR гепатоцеллюлярной функцию за счет снижения высвобождения факторов свертывания. В обоих HBD и DCD групп, значения INR возврата к нормальным значениям через 5 дней после трансплантации, предполагая, восстановление функции печени. Значения для группы кч появляются ниже.

Обсуждение

Экспериментальная свиной OLTx является сложной процедурой для настройки исследования без ресурсов интенсивной терапии клинического сценария. Возможные осложнения включают нестабильность гемодинамики, кровотечения, органов ишемии, переохлаждения, и метаболическое, а также органов дыхания, декомпенсация. Для любого исследовательской группы, достаточных процедурных обучение хирургической техники 5, а также свиньи анестезии 14,15 является обязательным для достижения представительные и воспроизводимые результаты.

Многие технические тонкости были описаны в литературе, особенно в отношении фазы реконструкция сосудов 5. Протокол OLTx описано выше обеспечивает необходимую информацию для кава-замены модели, напоминающей человеческую OLTx. Предоставленные результаты демонстрируют надежное выживание животных и восстановление трансплантата в обеих моделях HBD и DCD. Протокол применяется в краткосрочных сценариев выживания, используемых в привитой реперфузии EXPEriments, например, а также в моделях долгосрочное выживание исследований, таких как толерантность.

Один большой препятствием свиного OLTx является относительно плохая переносимость вены и воротной вены пережатия. Чревных заторов во время фазы anhepatic вызывает венозной гипертензии и капиллярной ущерб, который может привести к крупной кишечной ишемии и гемодинамической нестабильности в точке необратимого шока даже после реперфузии органов 7. С полой вены полностью встроен в паренхимы печени, процедура контрейлерных кава-сохранение не представляется возможным. Общая окклюзия полой вены во время фазы реконструкции вены ухудшает гемодинамические стабильности свиньи. Хотя несколько отчеты показывают, что свиной OLTx может быть достигнуто в течение полного вены и воротной вены окклюзии менее чем на 25 мин 16,17, техника обхода порто-кава-яремной на время реконструкции сосудов является более безопасным и более практичным вариантом 7- 9,18. В гоОпыт E авторов, пассивный байпас порто-яремной не является оптимальным, чтобы свиньи гемодинамически стабильной в течение anhepatic фазы. Модель байпас, в том числе активного декомпрессии как infrahepatic вены и воротной вены, позволяет спокойно фазу реконструкции suprahepatic полых и портальных анастомозов даже с длительного времени зажима из-за непредвиденных осложнений. Вопреки более ранним сообщениям 7, спленэктомия не является обязательным, когда байпас портал катетер удаляется. Оба селезеночной артерии и вены закрыты примерно на полпути вдоль длины селезенки уходит из проксимального половину достаточно перфузии. Осложнения, как кровотечение или воздушной эмболии из-за отключения обойти можно избежать путем обеспечения обхода осторожно помещают и закреплены должным образом.

В долгосрочной выживаемости OLTx экспериментов, желчных протоков анастомоз считается слабое место из-за его высокой частоты осложнений 19. Желчных ткани очень хрупкие и перед особое внимание, когда обрабатывается. Многие различные методы анастомоз были описаны 5,19. Анастомоз конец-в-конец технически легко и связаны с минимальными осложнениями 19. Непрерывный шов с не-резки иглы в том числе больших участков peribiliary соединительной ткани, кажется, превосходит прерванного шва. Желчных протоков находится под ненужного напряжения, когда отдельные стежки прерванной нити завязывают. Это может привести к ткани и слез подряд утечки желчи. Шовный материал - рассасывающиеся или не рассасывающиеся - это, как правило, не важно, учитывая его ограниченный срок службы до свинья не будет прекращено. Для моделей долгосрочного выживания в течение нескольких месяцев, рассасывающиеся швы - как в человеческом OLTx - предпочтительнее.

Удельный необходимо позаботиться с послеоперационной наблюдения. Достаточное питание и подачи жидкости, надежный протокол боли, и собственно иммуносупрессииРежим обязательны. Для долгосрочных экспериментов, иммуносупрессия представляется особенно важным. По сравнению с другими млекопитающими, свиней показывают удивительно низкий процент отказов иммунологической после OLTx 20,21. Круглые клеток инфильтрации максимальны в течение второй недели после трансплантации и уменьшить спонтанно, даже без иммуносупрессии. Отказ редко причиной смерти после свиного OLTx 22. Тем не менее, даже с протоколом иммуносупрессии с участием управляющей упомянули здесь стероиды внутривенно и перорально ингибиторы кальциневрина, отторжение трансплантата указывается умеренное увеличение трансаминаз, начиная с 4 дня после OLTx и подтверждается очевидной портал поля инфильтрации вокруг клеток. Ингибиторы кальциневрина может быть дано либо перорально или внутривенно 23,24 25,26; оба метода имеют свои недостатки. Даже при пероральном СПИДа приложений, фактическое количество достижении желудочно-кишечного тракта остается неясным. С другой стороны, Непрерывная инфузия IV вручка свиньи с активной животного трудно. Следовательно, приложение IV должна быть выполнена в виде болюса, что приводит к высокой концентрации лекарственного средства вместе с пиками потенциальных токсических эффектов. Тем не менее, оба метода применения по всей видимости, позволяют долгосрочное выживание.

Подобно клинической, послеоперационный стресс язвы профилактика рекомендуется. Послеоперационный кровотечение из пептической язвы является частой проблемой, и могут быть связаны с нарушениями функции печени 27. Через несколько случаев желудочно-кишечных кровотечений в обеих группах OLTx, авторы начали регулярные профилактику пантопразола и не испытывать никакого желудочно-кишечного кровотечения с тех пор.

Строгое соблюдение стерильных условиях во время операции, сопоставимых с условиями в клинической операционной и последующих антибиотикопрофилактики, снижает риск инфекционных осложнений.

В заключение, эта статья рrovides практическая информация для установления свиной программу OLTx в условиях исследования. Достаточно самоотверженность, практика, работа в команде и важно для того, чтобы уменьшить период обучения, для получения достоверных результатов, и, чтобы сократить расходы и количество подопытных животных.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Исследование было поддержано исследовательскими грантами от Исследовательского фонда трансплантации органов Roche (ROTRF) и Astellas. Маркус Зельцнер был удостоен премии ASTS за развитие карьеры. Маттиас Кнаак был поддержан исследовательской стипендией Астеллас. Мы благодарим Уве Мумменхоффа и семью из Бирмингема за их щедрую поддержку.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Атропина сульфат 15 мг/30 млСтропила 8 продуктов238481
бупренорфин 0,3 мг/млRB Pharmaceuticals LDTN/A
Цефазолин 1 гPharmaceutical Partners of Canada Inc.
Пероральный раствор циклоспорина 5 000 мг/50 млNovartis Pharmaceuticals Canada Inc.
Фентанилцитрат 0,25 мг/5 млSandoz Canada Inc.
Гепарин 10 000 МЕ/10 млLeo Pharma A/S453811
Изофлуран 99,9%, 250 млPharmaceutical Partners of Canada Inc.
Кетамина гидрохлорид  5000 мг/50 млBimeda-MTC Animal Health Inc.
Лактатный Рингер s + 5% Декстроза, 0,5 лBaxter Corporation61131
Lacteted Ringer' s, 1 лBaxter Corporation61085
Метронидазол 500 мг/100 млBaxter Corporation870420
Мидазолам 50 мг/10 млPharmaceutical Partners of Canada Inc.
Пантопразол 40 мгSandoz Canada Inc.
Хлорид калия 40 мг-экв/20 млHospira Healthcare Corporation37869
Пропофол 1,000 мг/100 млPharmascience Inc.
Сульфат протамина 50 мг/5 млPharmaceutical Partners of Canada Inc.
Физиологический раствор 0,9%, 1 лBaxter Corporation60208
Бикарбонат натрия 50 мг-экв/50 млHospira Healthcare Corporation261998
Солу-Медрол 500 мгPfizer Canada Inc.
Транексамовая кислота 1 000 мг/10 млPfizer Canada Inc.
University of Wisconsin Solution, SPS-1Organ Recovery SystemsSPS-1
Xylocaine Endotracheal 10 мг/50 млAstraZeneca2003767
Appose ULC 35 W кожный степлерCovidien Canada803712
Maxon, 1Covidien Canada606173
Sofsilk, 0Covidien CanadaS606
Sofsilk, 2-0Covidien CanadaS405
Sofsilk, 3-0CovidienCanada S404
Surgipro II, 4-0Covidien CanadaVP581X
Surgipro II, 5-0Covidien CanadaVP725X
Surgipro II, 6-0Covidien CanadaVP733X
Catheter i.v, 18 GBD Canada381147
Катетер Cook TPN, 9.5 FrCook Medical CompanyC-TPNS-9.5-90
PSI Kit для катетера оболочки, 8.5 FrArrow InternationalASK-09803-UHN
Инфузионный насос ЛинияSmith Medical ASD Inc.21-0442-25
Набор для администратора печени (линия смыва)CardioMed Supplies Inc17175
Mallinckrodt, трахеальная трубка, 6,5 ммCovidien Canada86449
Med-RX Аспирационная соединительная трубкаBenlan Inc.70-8120
Мешок для органовCardioMed Supplies Inc2990
Всасывающий наконечникTyco Healthcare Group LP8888501023
Valleylab, карандаш для прижиганияCovidien CanadaE2515H
Valleylab, электрод для возврата пациентаCovidien CanadaE7507
Байпасный соединитель 3/8" x 1/4"Raumedic AG955083-001
Разъем байпасный 3/8" x 3/8" Luer LockRaumedic AG955163-001
Перепускной соединитель Y 3/8" x 3/8" x 1/4"Raumedic AG961360-002
Трубка байпасная 1/4" x 1/16"Raumedic AG039505-010
Трубка байпасная 3/8" x 3/32"Raumedic AG039535-005
Центробежный насос RotaflowMaquet-DynamedHC 2821
Кольцо для шланга из нержавеющей стали, 5 ммOetiker16700007
Абдоминальный ретракторMedite GmbHN/A
DE BAKEY – Бек, Инфрапеченочный зажим для кавыAesculap Inc.FB519R
Deithrich, Атравматический зажим (воротная вена)Aesculap Inc.FB525R
Грегори Бульдог Зажим, изогнутыйAesculap Inc.FB382R
Грегори Бульдог Зажим, прямойAesculap Inc.FB381R
Поттс – Де Мартель, НожницыЭскулап Инк.BC648R
Satinsky, надпеченочный зажим для кавыAesculap Inc.FB605R
Зажим для симметричных трубокCodman Instruments198010
Наркозный аппарат, OptimaxModuflex Оборудование для анестезииSN5180
Байпасный расходомер, HT 110Transonic Systems Inc.
Щуп расходомера, H6XLTransonic Systems Inc.H6Xl689
Насос для теплотерапии, T/насосGaymar Industries IncTP500-G89D19
Инфузионный насос 3,000SIMS Graseby LTD.
Изофлуран Пар 19.1Draeger Medical Canada Inc.Н/Д
монитор, Datex AS 3Instrumentarium Corp./ HitachiD-VHC14-23-02
Центробежный привод RotaflowMaquet-Dynamed952301
Консоль RotaflowMaquet-Dynamed706035
Температурная терапевтическая площадкаGaymar Industries IncTP26E
Valleylab Force TxValleylab Inc.
аппарат искусственной вентиляции легких, медицинское оборудование AV 800DRE40800AVV
Warm Touch, система подогрева пациентаNellcor/ Covidien Canada5015300A
2237138215069722404342231929612316224290523067272244379213953723679632064413HT110B11106SN300050447216151480

Ссылки

  1. Mehrabi, A., Fonouni, H., Muller, S. A., Schmidt, J. Current concepts in transplant surgery: liver transplantation today. Langenbecks Arch. Surg. 393 (3), 245-260 (2008).
  2. Qiu, J., Ozawa, M., Terasaki, P. I. Liver transplantation in the United States. Clin. Transpl. , 17-28 (2005).
  3. Chalstrey, L. J. Technique of orthotopic liver transplantation in the pig. Br. J. Surg. 58 (3), 585-588 (1971).
  4. Esmaeilzadeh, M. Technical guidelines for porcine liver allo-transplantation: a review of literature. Ann. Transplant. 17 (2), 101-110 (2012).
  5. Calne, R. Y. Observations of orthotopic liver transplantation in the pig. Br. Med. J. 2 (5550), 478-480 (1967).
  6. Memsic, L., Quinones-Baldrich, W., Kaufman, R., Rasool, I., Busuttil, R. W. A comparison of porcine orthotopic liver transplantation using a venous-venous bypass with and without a nonpulsatile perfusion pump. J. Surg. Res. 41, 33-40 (1986).
  7. Torres, O. J. Hemodynamic alterations during orthotopic liver experimental transplantation in pigs. Acta. Cir. Bras. 23 (2), 135-139 (2008).
  8. Battersby, C., Hickman, R., Saunders, S. J., Terblanche, J. Liver function in the pig. 1. The effects of 30 minutes' normothermic ischaemia. Br. J. Surg. 61 (1), 27-32 (1974).
  9. Smith, A. C., Swindle, M. M. Preparation of swine for the laboratory. Ilar. J. 47 (4), 358-363 (2006).
  10. Swindle, M. M., Smith, A. C. Best practices for performing experimental surgery in swine. J. Invest. Surg. 26 (2), 63-71 (2013).
  11. Moench, C., Moench, K., Lohse, A. W., Thies, J., Otto, G. Prevention of ischemic-type biliary lesions by arterial back-table pressure perfusion. Liver Transpl. 9 (3), 285-289 (2003).
  12. Koski, E. M., Suhonen, M., Mattila, M. A. Ultrasound-facilitated central venous cannulation. Crit. Care Med. 20 (3), 424-426 (1992).
  13. Lange, J. J., Hoitsma, H. F., Meijer, S. Anaesthetic management in experimental orthotopic liver transplantation in the pig. Eur. Surg. Res. 16 (6), 360-365 (1984).
  14. Kaiser, G. M., Heuer, M. M., Fruhauf, N. R., Kuhne, C. A., Broelsch, C. E. General handling and anesthesia for experimental surgery in pigs. J. Surg. Res. 130 (1), 73-79 (2006).
  15. Heuer, M. Liver transplantation in swine without venovenous bypass. Eur. Surg. Res. 45 (1), 20-25 (2010).
  16. Gruttadauria, S. Porcine orthotopic liver autotransplantation: facilitated technique. J. Invest. Surg. 14 (2), 79-82 (2001).
  17. Falcini, F. Veno-venous bypass in experimental liver transplantation: portal-jugular versus caval-portal-jugular. G. Chir. 11 (4), 206-210 (1990).
  18. Filipponi, F., Benassai, C., Falcini, F., Martini, E., Cataliotti, L. Biliary tract complications in orthotopic liver transplantation: an experimental study in the pig. Ital. J. Surg. Sci. 19 (2), 131-136 (1989).
  19. Terblanche, J. Orthotopic liver homotransplantation: an experimental study in the unmodified pig. S. Afr. Med. J. 42 (20), 486-497 (1968).
  20. Calne, R. Y. Prolonged survival of liver transplants in the pig. Br. Med. J. 4 (5580), 645-648 (1967).
  21. Battersby, C., Egerton, W. S., Balderson, G., Kerr, J. F., Burnett, W. Another look at rejection in pig liver homografts. Surgery. 76 (4), 617-623 (1974).
  22. Net, M. The effect of normothermic recirculation is mediated by ischemic preconditioning in NHBD liver transplantation. Am. J. Transplant. 5 (10), 2385-2392 (2005).
  23. Guarrera, J. V. Hypothermic machine perfusion of liver grafts for transplantation: technical development in human discard and miniature swine models. Transplant Proc. 37 (1), 323-325 (2005).
  24. Minor, T. Hypothermic reconditioning by gaseous oxygen improves survival after liver transplantation in the pig. Am. J. Transplant. 11 (12), 2627-2634 (2011).
  25. Kelly, D. M. Porcine partial liver transplantation: a novel model of the 'small-for-size' liver graft. Liver Transpl. 10 (2), 253-263 (2004).
  26. Meijer, S., Hoitsma, H. F., Visser, J. J., de Lange, J. J. Long term survival following orthotopic liver transplantation in pigs; with special reference to gastric ulcer complications. Neth. J. Surg. 36 (6), 168-171 (1984).

Перепечатки и разрешения

Теги

Методика свиной печени закупок и Ортотопическая трансплантации с использованием активного Порто-Caval шунт
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.