Целью данной презентации является демонстрация в естественных условиях и в пробирке методов выращивания энтомопатогенные нематод. IN VIVO методы рассмотреть выращивание этих нематод с войском насекомых, в то время как методы в пробирке использовать богатый агар СМИ.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
В естественных условиях и в пробирке разведение энтомопатогенных нематод (Steinernematidae и Heterorhabditidae)
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Энтомопатогенные нематоды (EPN) (Steinernematidae и Heterorhabditidae) имеют мутуалистических партнерство с грамотрицательных Гамма-Proteobacteria в семье энтеробактерий. Xenorhabdus бактерии, связанные с steinernematids нематод в то время как Photorhabdus являются симбионтами heterorhabditids. Вместе нематоды и бактерии образуют мощный инсектицидный комплекс, который убивает широкий спектр видов насекомых в интимной и конкретного партнерства. Здесь мы демонстрируем в естественных условиях и в пробирке методов, обычно используемых в воспитании этих нематод в лабораторных условиях. Кроме того, эти методы представляют собой ключевые шаги для успешного создания EPN культур, а также стать основой для других биопроб, которые используют эти организмы для исследований. Производство aposymbiotic (симбионтов бесплатный) нематод часто решающее значение для углубленного и комплексного подхода к изучению симбиоза. ЭтоПротокол не требует добавление антибиотиков и может быть выполнена в течение короткого периода времени со стандартным лабораторным оборудованием. Нематоды, полученные таким образом, являются относительно надежными, хотя их выживаемость при хранении может изменяться в зависимости от вида используемых. Методы, описанные в этой презентации соответствуют описанным различными авторами и уточнена лаборатории П. складе в, Университет Аризоны (Тусон, Аризона, США). Эти методы отличаются от тела методов, которые используются в массовом производстве этих организмов в целях борьбы с вредителями.
Введение
Энтомопатогенные нематоды (EPN) Steinernema и Heterorhabditis SPP. (Steinernematidae, Heterorhabditidae) и их бактериальных симбионтов, Xenorhabdus и Photorhabdus SPP (Enterobacteriaceae) считаются возникающим модель наземное животное-микроб симбиотических отношений 2-4,6,10,19. Xenorhabdus и Photorhabdus SPP. которые питал как симбионтов в кишечнике только свободно живущих стадии нематод, также известный как инфекционного несовершеннолетнего (IJ) или 3-м этапе инфекционного несовершеннолетних 8,10,13. Пара бактерия-нематода является патогенным для широкого круга насекомых и успешн....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1 В естественных условиях Разведение энтомопатогенных нематод с их Symboitic бактерий
- Обратить 100 х 15 мм пластиковый чашку Петри и поставить два диска фильтровальной бумаги (90 мм) в крышке блюдо.
- Равномерно распределить 1 мл на IJ (инвазионных личинок) водной суспензии (в концентрации 1000-2000 IJ / мл) на фильтровальной бумаге.
Примечание: ИЮ не должны быть поверхность стерилизуют. - Добавить 10 последнего возраста личинок большей waxmoth Galleria MELLONELLA к блюду. Цель состоит в том, чтобы обеспечить примерно 100-200 IJS / личинку.
- Накройте крышкой с нижней части чашки Петри (рисунок 1)
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Метод разведение в естественных условиях использует живых насекомых в качестве хозяев для роста нематоды и воспроизводства. Инфекция камеры представляют собой эффективный метод для раскрытия насекомых IJS. Это единственный этап в нематоды жизненного цикла, что векторы бактериальных симбионтов из одного насекомого хозяина к другому. Рисунок 1 показывает настроить для инфекции камеры, а также материалов, необходимых для создания этой камеры. В пробирке методы рогатый позволяют EPN расти .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Использование подходящего хозяина является ключевым фактором для успеха в естественных условиях выращивания EPN. Как правило, оба steinernematids и heterorhabditids может воспроизводить и успешно завершить свой жизненный цикл в личинок большей восковой моли, Galleria MELLONELLA (Lepidoptera: Pyralidae). Тем не менее, другие видов насекомых из разных семейств и / или заказов можно считать. Некоторые из описанных в настоящее время видов нематод, как известно, имеют специфичность в отношении конкретного.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Авторы хотели бы поблагодарить бывших членов складе лаборатории: Мин-Мин Ли, Кэтрин Plichta, Виктория Miranda-Томпсон и Сэм-Кю Ким за их вклад в улучшение многие из этих протоколов. Эта работа финансировалась в рамках гранта Национального научного фонда IOS-0840932 и IOS-0724978 С.П. складе
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Для In vivo Инфекции | |||
| 100 x 15 чашек Петри | VWR | 25384-088 | |
| Фильтровальная бумага, 9 см целлюлоза 1 сорта Ватман | /VWR | 28450-081 | Рекомендуется фильтровальная бумага 1 |
| класса Насекомые-хозяева | Timberline | http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG | Galleria mellonella являются recommended |
| Для печени и почек Агар (для 500 мл) | |||
| 60 x 15 мм Чашки Петри | VWR | 25384-092 | |
| Говяжья печень, 50 г | Местное производство; мясник или супермаркет | Оставшееся можно хранить замороженным и размораживать впрок | |
| Говяжья почка, 50 г | Местное производство; мясник или супермаркет | Оставшееся можно хранить замороженным и размораживать для будущего использования | |
| Хлорид натрия 2,5 г (конечная концентрация 0,5%) | Acros/VWR | 200002-434 | любой исследовательский сорт NaCl может быть использован |
| агар, 7,5 г (1,5% агар, конечная концентрация) | HiMedia/VWR | 95026-642 | любой средний агар может быть использован |
| 500 мл дистиллированный H2O | |||
| Для липидного агара (на 1 л) | |||
| 100 x 15 чашек Петри | VWR | 25384-088 | |
| Питательный бульон, 8 г | BD/VWR | 90002-660 | |
| Экстракт дрожжей, 5 г | EMD/VWR | EM1.03753.0500 | |
| Гексагидрат хлорида магния 10 мл (0,2 г/мл) | EMD/VWR | EM-MX0045-1 | |
| Кукурузное масло, 4 мл | Любая марка | Местное происхождение; супермаркет | Можно использовать |
| любую марку кукурузного маслаКукурузный сироп, 96 мл соединить 7 мл кукурузного сиропа в 89 мл подогретого H2O и закрутить для однородности | Karo Locally sourced; супермаркет | ||
| Агар, 15 г | HiMedia/VWR | 95026-642 | любой среды можно использовать агар |
| дистиллированного H2O, 890 мл | |||
Ссылки
- Akhurst, R. J. Morphological and functional dimorphism in Xenorhabdus spp., bacteria symbiotically associated with the insect pathogenic nematodes, Neoaplectana and Heterorhabditis. J. Gen. Microbiol. 121, 303-309 (1980).
- Dunphy, G. B., Webster, J. M.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
