Оптимизированный Экс-ово Культивирование куриных эмбрионов в продвинутых стадиях разработки

Краткое содержание

Просмотр и доступ к куриному эмбриону во время развития может быть сложной задачей. Мы разработали метод ex ovo, который является простым, экономичным и может быть легко использован в классе или в исследовательской среде. Этот метод обеспечивает доступ к эмбриону на поздних стадиях эмбрионального развития (HH 40).

Аннотация

Исследования в области анатомии, эмбриологии и биологии развития в значительной степени опирались на использование модельных организмов. Для изучения развития живых эмбрионов часто используются модельные организмы, такие как курица. Курица является отличным модельным организмом из-за своей низкой стоимости и минимального обслуживания, однако она представляет трудности для наблюдения, поскольку заключена в непрозрачную яичную скорлупу. Для того, чтобы правильно рассмотреть эмбрион по мере его развития, скорлупу необходимо закрыть окном или снять. Методы работы с окнами и ex ovo были разработаны, чтобы помочь исследователям в изучении эмбрионального развития. Однако каждый из методов имеет свои ограничения и проблемы. В этой статье мы представляем простую, оптимизированную технику ex ovo культивирования куриных эмбрионов, которая позволяет наблюдать за эмбриональным развитием от стадии HH 19 до поздних стадий развития (HH 40), когда развилось множество органов. Этот метод легко применять как на занятиях бакалавриата, так и в более продвинутых исследовательских лабораториях, где проводятся манипуляции с эмбрионами.

Введение

Ex ovo культивирование сыграло важную роль в изучении развития курицы^{1, 2}. Этот метод культивирования использовался для изучения неврологических заболеваний, развития конечностей, черепно-лицевого развития, а также в качестве модели для исследования пороков развития, связанных с диабетом ^{3, 4, 5}.

Существует множество вариаций техники ex ovo. Наиболее распространенным подходом является использование чашки из пенополистирола^6,7,8 или стеклянной чаши⁵. При этих методах чашку или миску настилают полиэтиленовой пленкой, чтобы удержать эмбрион, на чашку надевают крышку, а затем эмбрио....

Протокол

Примечание: Все материалы приведены в таблице 1.

1. Хранение куриных эмбрионах

1. Выдержите куриные яйца штамма Gallus Gallus горизонтально на 37 ^{° С} с примерно 40% влажности и превратить яйца один или два раза в день. Обращаясь яйца важно для предотвращения эмбрион от присоединения к яичной скорлупы.
2. Не превратить яйцо в 24 ч до создания культуры как в противном случае эмбрион будет расположен брюшной массы желтка и будут повреждены при открытии яйцо в шаге 3. Кроме того, держать яйца в 4 ^{° С} градусов не более чем за одну неделю до инкубации «пресекать» развития, но это не является идеальн....

Результаты

Это экс ово метода позволяет для наблюдения эмбрионов от ранних стадиях развития (чч 19/20) и поздних стадиях развития (чч 40-41) (рис 1А и 1В). Настройка культуру HH 19-20 увеличивает выживаемость эмбрионов в культуре. До головки поворота (до 53 HPF) живучесть очень низка в культуре и после стадии 21, эмбрион, как правило, придерживаться более к корпусу на удалении, так получают меньше интактные зародыши. В общем, живучесть эмбриона в экс ово культуры высотой до HH 35.......

Обсуждение

Экс ово культивирование и оконной оба имеют свои преимущества и вызовы. Здесь мы сравнить преимущества и вызовы чашки экс пенополистирола ово метода и метода оконной к наш оптимизированный для экс ово способом, показанным здесь. Наш метод позволяет манипуляции и удобства наблюдения куриного эмбриона на поздних стадиях развития, и наши уточнений к традиционной экс ово метода ^{1, 2, 3} сделать это дополнительно очень проста в использовании в Вузовский лабораторных заня.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Пенициллин/стрептомицин	Sigma	P4458	Делать небольшие аликвоты во избежание замерзания/оттаивания
Квадратная чашка			9,5 см x 9,5 см
Весить лодку	Fischer Scientific	8732113	88 x 88 x 23 мм
Контейнер с застежкой-молнией	Н	/Д 12	см x 12 см x 6 см

Петри