Методическая статья

Neural трансплантации стволовых клеток в экспериментальной Contusive модели с повреждением спинного мозга

DOI:

10.3791/52141

⸱

17 декабря 2014 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Pharmacology, Department of Health Sciences, University of Milan, 2Department of Neuroscience, College of Medicine, The Ohio State University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Травма спинного мозга является травматический состояние, которое вызывает сильную заболеваемости и высокой смертности. В этой работе мы подробно контузии модель травмы спинного мозга у мышей с последующим трансплантации нервных стволовых клеток.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Травма спинного мозга является разрушительным клиническое состояние, характеризуется комплексом неврологических дисфункций. Животные модели травмы спинного мозга может быть использована как для изучения биологических ответов на травмы и тестирования потенциальных методов лечения. Ушиб или сжатия травм доставлены в хирургическое подвергаются спинного мозга являются наиболее широко используется модели патологии. В этом докладе экспериментальный ушиб осуществляется с помощью бесконечного горизонта (IH) ИМПАКТОРА устройство, которое позволяет создание воспроизводимой модели на животных травмы в результате определения конкретных параметров травмы. Трансплантация стволовых клеток обычно считается потенциально полезной стратегией для лечения этой изнурительной состоянии. Многочисленные исследования оценивали эффекты трансплантации различных стволовых клеток. Здесь показано, адаптированный способ травмы спинного мозга с последующим хвостовую вену инъекцией клеток у мышей CD1. Короче говоря, мы предоставляем процедуры: I) мечения клеток Wiго жизненного индикатора, II) предоперационная уход мышей, III) исполнение в contusive травмы спинного мозга, и IV) внутривенное введение посмертного нейронных предшественников. Эта модель контузии может быть использована, чтобы оценить эффективность и безопасность трансплантации стволовых клеток в регенеративной медицине подход.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Травмы спинного мозга (SCI) является наиболее распространенным повреждения, вызванные высокой энергии травмы, как автотранспортных средств аварий, падений, спортивных и насилие 1. При тяжелой SCI, травмы сила разрушает или повреждает нервную ткань, вызывая внезапную потерю неврологической функции. Травматический SCI часто встречается в молодых взрослых в возрасте от 10 до 40 лет. Это сильно влияет на психическое и физическое состояние пациента и наносит огромный экономический эффект для общества 2. Подход к лечению в острой фазе часто ограничивается высокой дозы кортикостероидов, хирургическая стабилизация и декомпрессии, возможно, ослабить даль....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Примечание: Все процедуры были одобрены комитетом по рассмотрению университета Милане и встретился с итальянским рекомендаций для лабораторных животных в соответствии с Европейской директивой Сообщества от ноября 1986 (86/609 / EEC).

1. Подготовка клеток для трансплантации

ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте нервные стволовые клетки между 5-м и 9-м проходе в культуре в течение этих экспериментов; проверить культуры для пролиферации и дифференцировки способности перед помечены для трансплантации. Определить степень дифференциации иммуноцитохимически 12.

  1. Ресуспендируют клеток в концентрации 1 х 10

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Общее количество трансплантированных клеток 1 × 10 6 клеток и был разделен на три последовательных инъекций в хвостовую вену. Мы вводили 3,3 × 10 5 клеток в 50 мкл фосфатного буферного раствора (PBS). Первую инъекцию проводили в течение 30 мин после травмы, второй 6 ч позже, и наконец 18 ч после повреждения. Выбор срока в 18 часа после ТСМ по управлению PM-НПС определяли по оптимальной проницаемости гематоэнцефалического барьера в это время 14. Для оценки эффекта инъекции стволовых клето.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этой статье мы описали метод получения воспроизводимых модель травматического повреждения спинного мозга с использованием бесконечного горизонта Impactor в силу 70 Кдыне (тяжелой). Использование большего силы парадигму (80 Kdyně), мы можем вызвать более серьезные травмы, которые, к сожалению, связано с более высокими мышей смертности. Для того чтобы избежать этой проблемы, мы обычно выбирают умеренной силы парадигму (70 Kdyně), который связан с повторяемой поражения с постепенным восстановлением функции и снижению сме.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют никакого конкурирующие между собой финансовые интересы.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы выражают признательность за экономическую поддержку со стороны FAIP (Federazione Associazioni Italiane Paraplegici), Фонда "Neurogel-en-Marche" (Франция), Fondazione "La Colonna".

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
PKH26GL-1КТ Sigma091M0973
Импакторное устройство с бесконечным горизонтом (IH) Прецизионные системы и контрольно-измерительные приборы, ОООМодель 0400 Серийный 0171
Гентамицин 10 мг/млЕвроклонECM0011B1 мг/мл в стерильном физиологическом растворе
Изофлуран-Вет 250 млМериалB142J12A
Блефаролин ПОМ ОФТ 10 г
Подогреватель слайдов2Biological InstrumentsHB101-sm-402
Скальпель, размер 10Lance Paragon26920
Маленькие щипцы Graefe2Биологические инструменты11023-14
RongeurMedicon Instruments07 60 07
Микроножницы2Биологические инструменты15000-00
Рассасывающиеся шовные материалы (4/0)Safil QuickC0046203
Hemostat2Биологические инструменты13014-14
Аппликатор для зажимов для ран Reflex 72Biological Instruments12031-07
7 мм Рефлекторные зажимы для ран2Biological Instruments12032-07
NGSEurocloneECS0200D
Triton X 100Merck Millipore1086431000
Anti Microtubule Assocoated Protein  (MAP) 2миллипорыAB5622
Alexa Fluor 488InvitrogenA11008
FluorSave Реагент 
нервных стволовых клеток г/мл гепарина (соль натрия, класс II; Sigma-Aldrich), bFGF (человеческий рекомбинантный, 10 нг/мл; Life Technologies) и EGF (человеческий рекомбинант, 20 нг/мл; Life Technologies) 
DMEM-F12ЕвроклонASM5002
l-глутаминЕвроклонECB3000D
глюкозойSigma-AldrichG8270-100G
путресцинSigma-AldrichP5780-25G
прогестеронSigma-AldrichP6149-1MG
Натрий-селенитSigma-AldrichS9133-1MG
трансферринSigma-AldrichT 5391
ИнсулинSigma-AldrichI1882
Гепарин натрия-сольSigma-AldrichH0200000
bFGFLife TechnologyPHG0024
h-EGFLife TechnologyPHG6045
Шприц 0,33 мл 29 гTerumoMYJECTOR 
бупренорфинSchering Plough SpATEMGESIC
гель для глазBausch & ЛомбЛИПОШИЧ
Среда Calbiochem 345789 DMEM-F12 (Euroclone), содержащая 2 мм l-глутамина (Euroclone), 0,6% глюкозы (Sigma-Aldrich), 9,6 г/мл путресцина (Sigma-Aldrich), 6,3 нг/мл прогестерона (Sigma-Aldrich), 5,2 нг/мл селенита натрия (Sigma-Aldrich), 0,025 мг/мл инсулина (Sigma-Aldrich), 0,1 мг/мл трансферрина (Sigma-Aldrich) и 2 μ

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cord Injury Statistical Center: spinal cord injury facts and figures at glance. , https://www.nscisc.uab.edu/PublicDocuments/fact_figures_docs/Facts%202013.pdf (2013).
  2. Yip, P. K., Malaspina, A. Spinal cord trauma and the molecular point of no return. Molecular Neurodegeneration. 7, 6(2012).
  3. Fehlings, M. G., Cadotte, D. W., Fehlin....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

PKH 26

Похожие статьи