Здесь мы создаем стеклянную пипетку с двойными функциями: ингибирование глубоких структур мозга с помощью микроинъекций лекарств и мониторинг их эффектов в реальном времени с помощью одновременных электрофизиологических записей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Одновременное Электрофизиологические Запись и Micro-инъекции агенты, ингибирующие в мозге грызунов
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Здесь мы опишем метод для строительства одноразовой "injectrode", используя коммерчески доступные и недорогие запчасти. Зондирующего система была разработана, что позволяет инъекции препарата во время записи электрофизиологических сигналов от пораженной нейронной население. Этот метод обеспечивает простой и экономичной альтернативой коммерческим решениям. Стеклянной пипетки была модифицирована путем объединения ее с иглой для подкожных инъекций и серебряной нити. Injectrode прикреплен к коммерческой микрошприц насос для доставки лекарственных средств. Это приводит в технике, что обеспечивает в режиме реального времени обратной связи фармакодинамики через многоквартирных внеклеточного сигналов, исходящих от места доставки наркотиков. Как доказательство концепции, мы записали активность нейронов от двухолмия вызванной вспышками света у крыс, одновременно с доставкой наркотиков через injectrode. Емкость записи injectrode позволяет функциональную характеристику инъекцотражения на сайте пользу точный контроль над локализацией поставки наркотиков. Применение этого метода также простирается далеко за пределы того, что показали здесь, как выбор химического вещества загружаются в injectrode огромен, в том числе отслеживание маркеры для анатомических опытов.
Введение
Инактивация областях коры и подкорковых ядер важно в изучении функциональных связей между различными структурами мозга 2-4. Последние исследования использованы потери из-функции химического или криогенные методы, чтобы изучить роль структур головного мозга 2,5. В отношении фармакологических микроинъекций, небольшие объемы препаратов можно вводить в область головного мозга с контролируемой скоростью при сведении к минимуму побочного ущерба окружающей ткани 6,7. Этот метод может быть использован для получения конкретной агонисты, обратные агонисты или антагонисты для изучения влияния различных фармакологических мишеней на нейронной акти....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры были выполнены в соответствии с директивами Канадского совета по защите животных и наблюдательный совет по этике в Университете Монреаля.
1. Ассамблея Запись впрыска пипетки
- Потяните приблизительно 7 см длинный стеклянный капилляр (1 мм наружный диаметр), используя пипетки съемник.
- Перерыв кончик капилляра и проверить отверстие под световым микроскопом. Убедитесь, что внутренний диаметр составляет от 30 мкм до 40 мкм.
- Вставьте длиной 7 см серебряной проволоки с в стеклянный капилляр с примерно 1 см, выступающих из Неклиновидная конце стеклянной пипетки.
- Изгиб избыток нити ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Конструкция injectrode показано на рисунке 1. серебряной проволоки (C) подается в стеклянную пипетку (D) с частью проволочной тяги и выступающие из отверстия. 30 G иглу (B) прикреплен и уплотнен к открытию стеклянной пипетки с клеем. После пипетка была заполнена веществом инъекции, стекло микро шприца (А) присоединен к игле. Важно, что есть хорошее уплотнение, где микро шприц соединяется с иглой (E) и где серебряный провод выступает из стеклянной пипетки (F). Рисунок 2 показывает фотогр.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Предложенный протокол был разработан, чтобы решить проблемы, связанные с текущим обратимых методов инактивации. В частности, этот проект направлен на уточнение методов, используемых для химических микроинъекций веществ, модулирующих активность нейронов, особенно в глубинных структурах головного мозга. Техническая задача выхода из этого типа установки является необходимость для обеих зондов для локализуется в той же ограниченного пространства в естественных условиях в целях получения точных записей в месте инъек.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нам нечего раскрывать.
Благодарности
Поддерживается грантами от CIHR (MOP231122) и NSERC (RGPIN-2014-06503). Мы хотели бы поблагодарить Женевьеву Сир за ее помощь в подготовке экспериментов и руководство лабораторными работами. MAL получила стипендию от Совета по естественным наукам и инженерным исследованиям Канады (NSERC).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Инжекционный насос (UltraMicroPump III) | WPI | ||
| Инжекционная консоль (контроллер Micro4) | WPI | #SYS-MICRO4 | |
| Шприц Hamilton | Hamliton | (80301) 701LT 10 µ L SYR | Шприцы от 5 до 10 мкм; l |
| Используется гибкий пластичный клей | Lepage | 393915 | Гелевая форма легче наносится на вал 30 G игла для подкожных инъекций, образующая водонепроницаемое уплотнение при высыхании. |
| Стеклянные пипетки | WPI | #TW100F-4 | тонкостенные, 1 мм OD, 0,75 мм ID с филаментными пипетками используется |
| 720 Needle Pipette Puller | Kopf | 720 | |
| Silver wire | A-M Systems, Inc. | 782500 | Голый 0.010" |
Ссылки
- Martin, J. H., Ghez, C. Pharmacological inactivation in the analysis of the central control of movement. Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 145-159 (1999).
- Ponce, C. R., Hunter, J. N., Pack, C. C., Lomber, S. G., Born, R. T.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
