Синтез асимметричных форм ферроцена является сложной задачей с использованием методов решения. В этом отчете основное внимание уделяется методам, проведенным для получения биоконъюгата ферроцена-биотина с использованием легких и чистых реакций, осуществляемых с помощью твердофазного синтеза. Показано, что включение тиолатной части придает способность к иммобилизации на золотых поверхностях.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Синтетическая методология для асимметричных Ферроцен, полученных Bio-сопряженных систем через Solid методологии фазы смолу на основе
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Раннее обнаружение является ключом к успешному лечению большинства заболеваний, а особенно важно для диагностики и лечения многих видов рака. Наиболее распространенные методы, используемые являются визуализации формы, такие как магнитно-резонансная томография (МРТ), позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ), и компьютерной топографии (КТ) и являются оптимальными для понимания физической структуры болезни, но может быть выполнена только один раз в четыре- шесть недель в связи с использованием визуализирующих агентов и общую стоимость. Имея это в виду, развитие "точки ухода" методов, таких как биосенсоры, которые оценивают стадию заболевания и / или эффективности лечения в кабинете клинициста и сделать это своевременно, будет революционизировать протоколов лечения. 1, в качестве средство для изучения ферроцена на основе биосенсоров для обнаружения биологически соответствующих молекул 2, были разработаны методы для получения ферроцена-биотин био-конъюгаты, описанные в данном документе, Этот доклад будет посвящен биотин-ферроцена-цистеин системы, которая может быть иммобилизованным на поверхности золота.
Введение
Биосенсоры небольшие устройства, которые используют технологию биомолекулярной признание в качестве платформы для селективного анализа и используются для их специфичности, скорости и низкой стоимости. Электрохимические биосенсоры для выявления биомолекул находятся на переднем крае этой области из-за своей простоты, эффективности затрат и высокой чувствительностью. 1,3 общая анатомия этих датчиков является электрод оснащен молекулы распознавания специфичными для биологического маркера интерес , Связывание биомаркера молекулой распознавания приводит к локальному изменению потенциала или тока, который может быть обнаружен простым измерением. На сегодняшний де....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Синтез биотин-Fc-цистеина (1)
- Твердофазные методы, чтобы произвести смолой 1.
- Поместите биотин, загруженной смолы (250 мг, 0,145 ммоль) в дном шприца, и набухание смолы путем составления диметилформамиде (5 мл) и встряхивания шприца на лабораторном шейкере в течение 20 мин. Выгнать раствор и повторите диметилформамид отек еще раз.
- Удаления защитной группы Fmoc добавлением 4-6 мл 20% пиперидина в диметилформамиде в шприц, затем на 10-15 мин встряхивания. Повторите процесс снятия защиты с другими 4-6 мл пиперидина. Промыть смолу с последовательностью 3x диметилформамид, диметилформамид 3x: метанол (1: 1), 3x метанол: ди....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Смола связаны форма 1 показана на фиг.2. Ковалентное присоединение компонента ферроцена приводит к оранжевый оттенок гранул смолы, которая является стойким при непрерывной промывки и свидетельствует о иммобилизованной железа, содержащего комплекс, в отличие от абсорбции железа путем ПЭГ компонент смолы шарик. Смолу свободной форме 1 идентичен по цвету к гранул смолы. После удаления соединения из полимерных бусинок, чистота и выход (68%) в результате методов, намного пре.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Синтез асимметричных производных ферроцена является сложной задачей в растворе. Например, попытки произвести 1 в раствор в результате низких выходов целевого продукта (менее 20%). Кроме того, реакции, использующие 1'-амино-ферроцена карбоновой кислоты (без Fmoc) и смолой биотин в результате нерастворимый продукт в соответствии с полимеризованном продукта, сообщенные Baristic и др. и минимальный продукт. 47 Это осложняется еще и ферроцена и его производных быть чувствител.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
KG была поддержана Уэлч фонда РА гранта P-1760, TCU Эндрюс Институт математики и естественно-научного образования (в кг), ГТС исследований и творчества активность Грант (в кг) и TCU SERC Грант (для JHS).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Биотин Новатаг Смола NovaBiochem | 8550510001 | ||
| TORVIQ 10 мл Луэр Лок Фриттет Шприц | Фишер | NC9299151 | |
| пиперидин | Акрос | P/3520/PB05 | |
| нингидрин тест | Sigma-Aldrich | 60017-1ea | |
| 1'-Fmoc-амино-ферроцен-1-карбоновая кислота | Omm Научный | Специальный заказ | |
| N,N′ -Диизопропилкарбодиимид | Sigma-Aldrich | D125407-5G | |
| Fmoc-Cys(Trt)-OH | Novabiochem | 8520080025 | |
| трифторуксусная кислота | Sigma-Aldrich | T5408 | |
| 1,2-этанедитиол | Sigma-Aldrich | 2930 | |
| триизопропилсилан | Sigma-Aldrich | 233781 | |
| трубки Eppendorf (20 мл) | Любой источник | ||
| Метанол | Любой источник | Высушить с помощью молекулярных сит перед использованием и хранить в бутылке для фильтрующего материала объемом 100 мл для удобства использования | |
| Дихлорметан | любой источник | высушить с помощью молекулярных сит перед использованием и хранить в бутылке с фильтрующим материалом объемом 100 мл Для удобства использования | |
| Диметилформамид | любого источника | высушить с помощью молекулярных сит перед использованием и; хранить в бутылке со средой объемом 100 мл для удобства использования | |
| центрифуги | любого источника |
Ссылки
- Wang, J. Electrochemical biosensors: towards point-of-care cancer diagnostics. Biosens Bioelectron. 21 (10), 1887-1892 (2006).
- Scarborough, J. H., Brusoski, K., Brewer, S., Green, K. N. Solid phase synthesis of ferrocene-biotin bioconjugates and reactivity with avidin. A paradigm for development of electrochemical biosensors. , Texas Christian University. Fort Worth, Texas. (2014).
- Zhang, S., Zheng, F., Wu, Z., Shen, G., Yu, R.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
