Цель этого протокола — продемонстрировать принципы и методы измерения и вычисления скорости клубочковой фильтрации, скорости потока мочи и экскреции натрия и калия у крыс. Эта демонстрация может быть использована для того, чтобы дать студентам общее концептуальное представление о том, как измерять функцию почек.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Физиология Лаборатория Демонстрация: клубочковой фильтрации у крыс
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Измерения скорости клубочковой фильтрации (СКФ) и фракционной экскреции натрия (Na) и калия (K) имеют решающее значение для оценки функции почек в норме и при заболеваниях. СКФ измеряется как установившийся почечный клиренс инулина, который фильтруется в клубочке, но не секретируется и не реабсорбируется вдоль нефрона. Фракционная экскреция Na и K может быть определена по концентрации Na и K в плазме и моче. Почечный клиренс инулина может быть продемонстрирован у животного, находящегося под наркозом, у которого катетеры находятся в бедренной артерии, бедренной вене и мочевом пузыре. Оборудование и расходные материалы, используемые для этой процедуры, обычно доступны в исследовательском центре, что делает эту процедуру практическим средством измерения функции почек. Цель этого видео — продемонстрировать процедуры, необходимые для проведения лабораторной демонстрации, в которой оценивается функция почек до и после приема диуретического препарата. Представленная методика может быть использована для оценки функции почек на крысовых моделях почечной недостаточности.
Введение
Наиболее важной функцией почек является гомеостатическая регуляция внеклеточной воды и содержания электролитов. Почки тесно регулируют внеклеточную воду, натрий (Na) и калий (K) для поддержания нормального физиологического уровня. Нарушения функции почек могут привести к серьезным метаболическим нарушениям, которые могут привести к летальному исходу. Основной почечный процесс происходит в нефроне и начинается с фильтрации плазмы у клубочка и заканчивается выведением мочи. Другими процессами, определяющими конечную концентрацию воды, Na и K в моче, являются секреция и реабсорбция внутри нефрона. Измерения скорости клубочковой фильтрации (СКФ) и фракционной экскреции N....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
До любой процедуры животных, уход за животными институциональная и использование комитет (IACUC) должен утвердить протокол. Этот протокол был одобрен Университет штата Мичиган IACUC.
1. Предварительная подготовка лаборатории FITC-инулин решения
- Теплые 20 мл физиологического раствора до 70 ° С и медленно перемешивают в 100 мг FITC-инулин (5 мг / мл FITC-инулин), пока все инулин не растворится.
- Холодный раствор до комнатной температуры и добавить 800 мг бычьего сывороточного альбумина (40 мг / мл БСА, лиофилизированный порошок, по существу, глобулина, низкое эндотоксин, ≥98% чистоты электрофорезом в агарозном гел....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Мочегонное используется в лабораторной демонстрации был фуросемид, который очень быстро ингибирует реабсорбцию Na и K фильтруется почками, что приводит к увеличению Na, К и воды экскреции в течение нескольких минут введения препарата. По его основного механизма, фуросемид должна иметь минимальное воздействие на СКФ и отфильтрованного нагрузки Na и К, но увеличит поток мочи, и фракционная экскреция Na и К.
Представительные результаты в таблице 3, показывают, что в анестезиров.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Соответствующий маркер для измерения СКФ должны соответствовать четырем критериям: быть свободно фильтруется в клубочках, несвязанного быть с белками плазмы, и ни поглощается ни секретируется в нефрона. Инулин фруктозы полимер, который удовлетворяет этим критериям. В результате, почечный клиренс инулина считается золотым стандартом для измерения СКФ 7. Продемонстрировали технику представляет традиционный подход определения почечного клиренса инулина, используя приурочен сбора мочи во время постоянной инфузии .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов. В мнения или утверждения, содержащиеся в данном документе, являются частные мнения автора и не должны быть истолкованы в качестве официальной или как отражающие взгляды Департамента армии или министерства обороны.
Благодарности
Источник финансирования для лабораторной демонстрации был NIGMS грант: GM077119. Мы благодарим д-р Джозеф Р. Хейвуд и д-ра Питера Коббет за их поддержку в коротких Couse в интегративной и органов системы фармакологии. Мы также благодарим г-жу Ханна Гарвер за техническую поддержку лаборатории демонстрации.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 5-0 Плетеный шелковый хирургический шовный материал | Surgical Specialties Corp | SP1033 | |
| Пробирная пластина, 96-луночный | Costar | 3922 | |
| Бычий сывороточный альбумин | Sigma Chemical Co | A2934-25G | |
| Центрифуга | Beckman Coulter | MicroFuge 18, 357160 | |
| Конические пробирки | для образцов Dot Scientific Inc. | #711-FTG | |
| Аппликаторы с хлопковыми наконечниками | Solon Manufacturing Co | 56200 | |
| Программное обеспечение для сбора данных | ADInstruments | LabChart Pro 7.0 | |
| Цифровые весы | Denver Instrument | APX-4001 | |
| FITC-инулин | Sigma Chemical Co | F3272-1G | |
| Марлевые губки | Covidien | 2146 | |
| Хирургическая кровать с подогревом | EZ-212 | ||
| Гепарин | Сагнет | NDC 25021-402-10 | |
| HEPES | Sigma Chemical Co | H3375 | |
| Изофлуран | Abbott Animal Health | IsoFlo, 5260-04-05 | |
| Изофлуран Вапорайзер | EZ-Анестезия | EZ-190F | |
| Микрорассекающие щипцы | Biomedical Research Instruments Inc. | 70-1020 | |
| Считыватель микропланшетов - Fluoroskan | ThermoScientific | Ascent FL, 5210460 | |
| NOVA 5+ Анализатор натрия/калия | NOVA BioMedical | 14156 | |
| Иглодержатели Ольсена-Хегара с ножницами | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| PE-190 (для катетера мочевого пузыря) | BD Медицинский | 427435 | |
| Преобразователь давления& НБСП; | Приложения | MLT1199 | |
| Pyrex Culture Tubes | Corning Inc. | 99445-12 | |
| Крысиный катетер бедренной артерии | Strategic Applications Inc. | RFA-01 | |
| Salix Furosemide 5% | Intervet | #34-478 | |
| Косоглазие Ножницы | Fine Science Tools | 14075-11 | |
| Студенческие хирургические ножницы | Fine Science Tools | 91402-12 | |
| Хирургические перчатки | Kimberly-Clark | Sterling Nitrile Gloves | |
| Шприцевой насос | Razel Scientific | R99-E | |
| Тканевые щипцы | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Тканевые ножницы | George Tiemann Co | 105-420 | |
5-0 Плетеный шелковый хирургический шовный материал Surgical Specialties Corp SP1033 Оценочная пластина, 96-луночный costar 3922 Бычья сыворотка Альбумин Sigma Chemical Co A2934-25G Центрифуга Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Конические пробирки для образцов Dot Scientific Inc. #711-FTG Аппликаторы с хлопковыми наконечниками Solon Manufacturing Co 56200 Программное обеспечение для сбора данных ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Весы Denver Instrument APX-4001 FITC-Инулин Sigma Chemical Co F3272-1G Марлевые губки Covidien 2146 Хирургическая кровать с подогревом EZ-212 Гепариновый сагнет NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Изофлуран Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Испаритель изофлурана EZ-Anesthesia EZ-190F Микрорассекающие щипцы Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Считыватель микропланшетов - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Анализатор натрия/калия NOVA Biomedical 14156 Olsen-Hegar Иглодержатели с ножницами Fine Science Tools 12002-12 PE-190 (для катетера мочевого пузыря) BD Medical 427435 Преобразователь давления Инструменты MLT1199 культуральных пробирках Pyrex Corning Inc. 99445-12 Катетер для бедренной артерии крысы Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemide 5% Intervet #34-478 Ножницы для косоглазия Fine Science Tools 14075-11 Хирургические ножницы Student Fine Science Tools 91402-12 Хирургические перчатки Kimberly-Clark Sterling Nitrile Gloves Шприцевая помпа Razel Scientific R99-E Тканевые щипцы Fine Science Tools 91121-12 Тканевые ножницы George Tiemann Ко 105-420 |
Ссылки
- Silverthorn, D. U. Human Physiology: An integrated approach. , Pearson. (2012).
- Hall, J. E. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 303-344 (2011).
- Levey, A. S.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
