Method Article

Экспертиза Rapid допамина Dynamics с быстрого сканирования циклической вольтамперометрии Во интраоральных Tastant администрации в Пробудитесь крыс

DOI:

10.3791/52468

⸱

August 12th, 2015

 ,  ,  , 
1Interdepartmental Neuroscience Program, Yale University, 2Department of Biotechnical and Clinical Laboratory Sciences, School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo, 3Department of Psychiatry, Yale School of Medicine, 4Department of Cellular and Molecular Physiology, Yale School of Medicine

In This Article

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. Read More ...

Erratum

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: Examination of Rapid Dopamine Dynamics with Fast Scan Cyclic Voltammetry During Intra-oral Tastant Administration in Awake Rats
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.

null

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Быстрые колебания внеклеточного дофамина (DA) опосредуют как обработку вознаграждения, так и мотивированное поведение у млекопитающих. В данной рукописи описывается совместное использование циклической вольтамперометрии быстрого сканирования (FSCV) и внутриперорального введения тастанта для определения того, как тастанты изменяют быстрое высвобождение дофамина у бодрствующих, свободно передвигающихся крыс.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Быстрое, фазовое высвобождение дофамина (DA) в мозге млекопитающих играет решающую роль в обработке вознаграждения, обучении с подкреплением и мотивационном контроле. Циклическая вольтамперометрия с быстрым сканированием (FSCV) — это электрохимический метод с высоким пространственным и временным (менее секунды) разрешением, который используется для изучения фазового высвобождения DA в нескольких типах препаратов. Эксперименты in vitro на отдельных клетках и срезах мозга, а также эксперименты in vivo на грызунах под наркозом были использованы для выявления механизмов, которые опосредуют высвобождение и поглощение дофамина в нормальных условиях и на моделях заболеваний. За последние 20 лет эксперименты in vivo с участием бодрствующих, свободно передвигающихся грызунов также позволили получить представление о дофаминергических механизмах обработки вознаграждения и его обучения. Одним из основных преимуществ бодрствующей, свободно движущейся подготовки является возможность исследовать быстрые флуктуации DA, которые привязаны по времени к конкретным поведенческим событиям или для поощрения или подачи сигнала. Тем не менее, одним из ограничений экспериментов по комбинированному поведению и вольтамперометрии является трудность диссоциации эффектов DA, специфичных для первичных вознаграждающих или аверсивных стимулов, от сопутствующих флуктуаций DA, которые опосредуют направленное на вознаграждение или другое моторное поведение. В данной статье мы описываем комбинированный метод с использованием FSCV in vivo и интраперальной инфузии у бодрствующей крысы для непосредственного исследования реакции DA на пероральные препараты. В этих экспериментах пероральные вкусовые препараты вводятся непосредственно в нёбо крысы в обход поведения, ориентированного на вознаграждение, и произвольного питьевого поведения, что позволяет напрямую исследовать реакцию DA на вкусовые стимулы.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Фазовое высвобождение DA играет важную роль в посредничестве в поведении, направленном на вознаграждение [1-3]. Тем не менее, выделение и изучение того, как первичное вознаграждение изменяет фазовое высвобождение DA, часто осложняется сопутствующими поведенческими или когнитивными процессами, которые также способны изменять фазовое высвобождение DA, такими как процессы принятия решений или моторное поведение, направленное на вознаграждение, для получения вознаграждения. В данной работе мы выделяем фазовые ответы DA на вкусовые препараты с помощью использования циклической вольтамперометрии in vivo с быстрым сканированием (FSCV) в сочетании с достав....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты были проведены в соответствии с Национальными Институтами (NIH) Руководство здравоохранения для ухода и использования лабораторных животных и были одобрены Институциональные уходу и использованию животных комитета Йельского университета (IACUC) по.

1) Предварительно хирургические Препараты

  1. Оральный приготовления раствора
    1. Создание решения 10% сахарозы и 0,005% L-ментола в деионизированной воде (рН 7,4). Храните эти решения в закрытых контейнерах, при комнатной температуре, и переделать каждые 2 недели, чтобы предотвратить деградацию.
  2. Калибровки электрода решения
    1. Сделать Трис....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

FSCV в сочетании с внутриротовой катетера имплантации был использован для изучения, как сахароза, в аппетитивную tastant, модулирует фазовое DA-релиз в ядре НАК. До tastant инфузии, электрической стимуляции (150 мкА, 60 Гц, 24 импульсов, с указанием красной полосой) в VTA производит надежные увеличение фазовый Д. выпуска в NAC (рис 1) Рис 1 показывает цветную участок с потенциалом на. Ось ординат, время на оси абсцисс, а ток (представлены в условных цветах) на оси. Ниже цвета участка концентрации Д.А. о.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Интраоральная доставка tastant в сочетании с FSCV позволяет анализ "реального времени" ответов на устные DA ароматизаторами. Есть три важных шагов в протоколе, которые необходимы для успешных измерений DA. Во-первых, собственно имплантация полости катетера имеет решающее значение для доставки ароматизаторов. Обеспечение того, чтобы катетер позади первого моляра и зажатый в место предотвращает катетер от потери проходимости и предотвращает случайное удаление животным. Промывка катетера в течение первых нескольк.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Исследование, о котором сообщается в этой публикации, было поддержано стипендией NSF Graduate Research Fellowship (RJW) и Национальным институтом по борьбе со злоупотреблением наркотиками Национальных институтов здравоохранения и Центром табачных изделий FDA (CTP) под номером P50DA036151(EJN и NAA). Ответственность за содержание лежит исключительно на авторах и не обязательно отражает официальную точку зрения Национальных институтов здравоохранения.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Стимулирующий электродПластикOneOneMS303/2-A/SPCпри заказе запросите разрез 22 мм ниже постамента
Канюля для электродаБиоаналитические системыMD-2251
Стеклянные капиллярныесистемы А-М системы624503
углеродного волокнаThornelT650
Съемник электродовNarishige InternationalPE-22
Neurolog stimulus isolatorfigure-materials-1 Digitimer Ltd.DS4
Термоусадка3MFP-301
Изолированные провода для электродовSquires electronicsCustomL 3.000 x 1.000s x 1.000s UL1423 30/1 BLU
MicromanipulatorУниверситет Иллинойса в Чикаго, Инженерный механический цех
Эпоксиднаясмола ITW Devcon14250"5 минут эпоксидная "
Сополимер перфтор-3,6-диокса-4-метил-7октен-сульфоновой кислоты и тетрафторэтиленаIon PowerLQ-1105т.е., Nafion
Silver paintGC Electronics22-023
Блок питанияBK Precision9110
Трубки для внутриротовые катетерыIntramedic427426PE 100, I.D. = 0,86 мм; O.D. = 1,52 мм
Трубка для внутриротовой инфузииFischer Scientific02-587-1AI.D. 1/32"; O.D. 3/32"
Шприцевой насос для проточной ячейкиPump Systems Inc.NE 1000
Хирургический цементDentsply Caulk675571 и 675572
Пневматический приводVICIA606-позиционный цифровой интерфейс клапана
Цифровой интерфейсклапана VICIDVI230 VAC
Quad HeadstageУниверситет Северной Каролины, Электроника Центр
электроника UEI Источник питанияУниверситет Северной Каролины, Электроника Объект
UEI коммутационная коробкаУниверситет Северной Каролины, Электроника Объект
Источник питания для шприцевого насоса TastantMed AssociatesSG-504
Tastant Шприцевой насосMed AssociatesPHM-107
Вольфрамовый микроэлектродMicroProbesWE30030.5A3
Серебряная проволока эталонный с AgClInVivo МетрическаяE255A
СахарозаSigma80497
Хлорид магнияSigmaM8266
Хлоид натрияSigmaS7653
Хлорная кислотаSigma244252
Соляная кислота (4 M)Sigma54435
Гидроксид соиSigma306576
Перекись водородаSigmaH1009
Дофамина гидрохлоридSigmaH8502
TarHeel HDCV SoftwareУниверситет Северной Каролины-Чапел ХиллНеобходимо запросить программное обеспечение: нажмите здесь, чтобы перейти на страницу запроса программного обеспечения

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Roitman, M. F., et al. Dopamine operates as a subsecond modulator of food seeking. J Neurosci. 24 (6), 1265-1271 (2004).
  2. Aragona, B. J., et al. Regional specificity in the real-....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Fast Scan Cyclic VoltammetryDopamine DynamicsIntra oral Tastant AdministrationAwake RatsNucleus AccumbensCarbon Fiber ElectrodesOral Catheter ImplantationPrinciple Component AnalysisSub second Dopamine ReleaseReward Processing

Related Articles