Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Используя мышь опухоли молочной железы клетки научить радиатора Биология понятия: Простой модуль Лаборатория

12.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52528

⸱

18 июня 2015 г.

 ,  , 
1Department of Natural Sciences, Marymount Manhattan College

В этой статье

Краткое содержание

Описан возможный лабораторный модуль для студентов биологических факультетов, который исследует передовые клеточные и молекулярные концепции с использованием культуры клеток животных. Студенты выращивают, характеризуют и манипулируют моделью клеток рака молочной железы под воздействием химиотерапевтических агентов. Жизнеспособность клеток оценивается с помощью подсчета клеток с использованием как стандартного, так и нового метода.

Аннотация

Студенты бакалавриата по биологии должны изучать, понимать и применять различные концепции и методы клеточной и молекулярной биологии при подготовке к биомедицинским, аспирантским и профессиональным программам или карьере в науке. Чтобы решить эту проблему, был разработан простой лабораторный модуль для обучения концепциям клеточного деления, клеточной коммуникации и рака с применением методов культивирования клеток животных. Здесь клеточная линия опухоли молочной железы мышей (ММТ) используется для моделирования рака молочной железы. Студенты учатся выращивать и характеризовать эти животные клетки в культуре и проверять влияние традиционных и нетрадиционных химиотерапевтических препаратов на пролиферацию клеток. В частности, студенты определяют оптимальную концентрацию клеток для осаждения и выращивания клеток, узнают, как готовить и разбавлять растворы лекарств, определяют наилучшую дозировку и время лечения антипролиферативными агентами, а также выясняют скорость гибели клеток в ответ на различные методы лечения. В модуле используется как стандартная методика подсчета клеток с использованием гемоцитометра, так и новый метод подсчета клеток с использованием программного обеспечения для микроскопии. Экспериментальная процедура позволяет проводить открытые исследования, поскольку студенты могут изменять критические этапы протокола, включая тестирование гомеопатических агентов и безрецептурных препаратов. Короче говоря, этот лабораторный модуль требует, чтобы студенты использовали научный процесс для применения своих знаний о клеточном цикле, клеточных сигнальных путях, раке и методах лечения, развивая при этом ряд лабораторных навыков, включая культивирование клеток и анализ экспериментальных данных, которые обычно не преподаются в аудитории бакалавриата.

Введение

Часто в бакалавриата Общая биология, темы регулирования и рака цикла затронуты, но не детально изучены, потому что широта содержания в этих курсах, оставляет мало времени для глубины. Кроме того, студенты биологии обычно не подвергаются передовых методов, связанных с животным клеточной культуре. Чтобы помочь студентам развить глубокое понимание этих понятий, в то время как применение и анализа, что они узнали, лаборатория активность была разработана как модификация Уолтера Рида Армии института исследований (WRAIR) расширенной деятельности лаборатории 1. Модуль Лаборатория использует поэтапный, экспериментальные стратегии, которая включает растет и характеризующие модель раковых клеток, разработке и реализации методов подсчета клеток, установления оптимального времени курс и дозировки для лечения клетки с анти-пролиферативных агентов, и выявление аберрантных клеток-сигнальных путей , Эксперимент также позволяет открыт-ended запрос.

Большинство методов, необходимых для этой активности может быть достигнуто в типичной биологии-преподавательский лаборатории. Занятие начинается со студентами, характеризующих морфологию и скорости роста опухоли молочной железы мыши (ММТ) клеточной линии, модель человеческого рака молочной железы 2. Рак молочной железы был выбран в качестве модели рака из-за его распространенности в популяции, его знакомство для студентов колледжа возраста, и широко распространенных имеющихся данных. Клеточная линия ММТ был специально выбран потому, что это легко доступны, хорошо изученным, имеет короткое время удвоения и легко выращивать. Кроме того, ММТ клетки эстроген-зависимыми, что согласуется с большинством женщин рака молочной железы. Студенты затем определить аномальные клетки-сигнальных путей в клетках ММТ обработкой клеток с химиотерапевтических препаратов, механизм действия которых хорошо established.The концентрация препаратов и продолжительности лечения разнообразны позволяет студентамоценить влияние этих переменных на скорость деления клеток. Ключ анализа этой деятельности является определение жизнеспособности клеток, который просто требует подсчета клеток, с помощью одного из двух методов. Каждый метод зависит от сильных навыков микроскопии. Студенты определяют жизнеспособность клеток с помощью стандарта, метод гемоцитометре и новый способ фотомикроскопии и предложить. Основываясь на своих выводах, они могут предложить и проверить изменения в деятельности. Затем студенты представляют свои данные и интерпретировать результаты для уточнения своей гипотезы и разрабатывать новые экспериментальные стратегии.

Эта лаборатория деятельность подходит для новичка или на уровне второкурсника студентов, специализирующихся в области биологических наук. Он конденсируется в одну неделю модуля лаборатории, которые могут быть завершены в течение первого года, общая биология или второй год, клеточный / Молекулярная биология курс. Навыки, необходимые для правильного завершения деятельности включают в себя основные арифметические и алгебра, знакомство с массивом Cруды лабораторные навыки (например, пипетки, делая решение, метод стерильных), анализ данных, основной световой микроскопии и управление временем, вместе с инструктором знаний культуры клеток и электронными таблицами. Реагенты, необходимые включают животной модели клеточной линии рака (например, молочной железы мыши опухолевые клетки ММТ 2), химиотерапевтическими агентами (например, тамоксифен, куркумин, метформин, и аспирин), трипанового синего и среда культуры клеток (например, минимальную поддерживающую среду Игла ; ЕМЕМ) с соответствующими дополнениями (например, донор лошадей и эмбриональной бычьей сыворотки). Инструменты, необходимые включают перевернутый оптический микроскоп с цифровой камеры привязанности, компьютер, 100 мм и 24-луночных планшетах для культивирования тканей, СО 2 инкубатора (или эквивалент), биобезопасности кабинета (BSC; Класс II), гемоцитометр и программного обеспечения цифровой микроскопии.

Есть хорошие примеры конкретных лабораторных видов деятельности, которые полагаются на животных клеток культуры TEACСтуденты бакалавриата ч около концепций в области клеточной биологии. 3 Однако многие требуют расходных материалов или методов, которые не легко доступны (например, радиоактивные изотопы, живая ткань животных, современное оборудование изображений 1,4,5), описывают протоколы, которые являются довольно продвинутый (например, подходит для 400 уровня, конечно 6), или требует нескольких неделю или семестр проектов 6,7. Лабораторная работа описана здесь проста и может быть проведена в течение одной недели с общим лабораторного оборудования.

В целом, эта лаборатория модуль эффективно вводит или укрепляет концепции клеточного цикла, клеточных сигнальных путей и рака, а уча основные и дополнительные навыки лаборатории, экспериментальный анализ данных, метод животных клеток культуры и научного процесса. Лабораторный модуль является простым и экономически доступными и обеспечивает гибкость и возможность для открытого состава запрос. Деятельность поощряет студентов творчествопутем предоставления шаблона экспериментальную стратегию, которая действует в качестве руководства, но не рецепт. Самое главное, что деятельность удовлетворяет всех учебных областях таксономии водорослей 8, как это требует запоминания, понимания, применения, анализа, оценки и создания путем привлечения студентов в процесс, который тянет их из учебника и в мире научных исследований.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Примечания: Проведение всех работ с клетками и клеточной культуры реагентов в шкафу биобезопасности класса II (BSC) 9. MMT клетки классифицируются как уровень биологической безопасности I, как они представляют низкой до умеренной биологическим риском. Применить надлежащие Очистка и обеззараживание процедуры КБС между использования (например, ультрафиолетовый свет, 70% этанола протереть).

1. Grow ММТ клеток

  1. Рост клеток в 10 см чашках для тканевых культур, содержащих 10 мл питательного мультимедиа, который состоит из орлов минимальная поддерживающая среда (EMEM) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 2 мМ глутамина и 1% противогрибкового / антибиотик (10 единиц пенициллина , 100 мкг стрептомицина, 0,25 мкг амфотерицина). Выращивают клетки в увлажненной 5% CO 2 камеры, при 37 ° С. Пластина клеток при плотности 3,6 х 10 6 клеток / см 2 (см Подсчет клеток в шаге 2).
  2. Заменить половина клеточной культуральной среде со свежей средой и так каждые 48 часов UnlESS не указано иное. Проверьте жизнеспособность клеток и морфологию путем осмотра с перевернутой фазового контраста светового микроскопа.
    1. Примечание и охарактеризовать клетки по размеру, структуре, форме, организации и расчетного числа в при 100 - 200-кратное увеличение. При такой плотности, клетки должны появляться в одной плоскости, не слипаются друг с другом на вершине и в непосредственной близости. Каждая ячейка состоит из толстого, сферической ядра с тонкими, длинными, отраслевых, как расширений расширения от него, что прийти к точке (рисунок 1).
  3. Разделите клетки, когда они достигают плотности клеток 7,2 × 10 6 клеток / см 2. Клетки обладают удвоения скорости 1,8 × 10 6 клеток / см 2 за 24 часов. Назначить клетки Прохождение X (ПВ), чтобы обозначить количество раз они были расщеплены.
    1. При генерации 3 (то есть после трех проходов, P3), урожай, рассчитывать, и пластины клеток на 24 и планшета для культуры ткани в при плотности 3,6 х 10 6 клеток / см 2.
  4. Посмотреть клетки каждый день и записывать цифровые микрофотографии. Примечание и описать морфологию клеток (например, размер, форма, световозвращающими свойствами). Определить время удвоения клеток путем подсчета клеток регулярно касающийся прошедшее время количество клеток.

2. Граф ММТ клеток

Примечание: Граф клеток, чтобы определить, клетки должны быть пересевают, чтобы создать для эксперимента или для определения жизнеспособности клеток. Есть два способа, представленные здесь.

  1. Использование гемоцитометра, стандартный метод для подсчета клеток.
    1. Получить яркие строки гемоцитометр, 0,2% раствор трипанового синего красителя, соединение светового микроскопа, стерильных пробирках, пипеток и ручной счетчик клеток.
    2. Под BSC, использовать 10 мл пипетки, чтобы удалить клетки от 10 см блюдо культуры ткани. Если клетки выращивают на 24-луночного планшета используют пипетки 1 мл или 1000 мкл микропипетки для удаления информации.
    3. Draw клеток СМИ в пипетку, поместите кончик пипетки против дно тарелки и изгнать СМИ, сдвинув пипетки через пластины. Повторите 4 - 5 раз, чтобы помочь выбить клетки, отделить сгустки и привести к более точного подсчета клеток.
    4. Поместите полученную клеточную суспензию в 15 мл стерильной пробирке (или 1 мл микро центрифуги или другой небольшой объем труб). В противном случае оставьте клеток в исходной культуры ткани пластины / хорошо.
    5. Под BSC, объединить 10 мкл клеточной суспензии с 10 мкл трипанового синий раствор (1: 1) в нестерильной микро центрифуги или другого малого объема трубки.
      Примечание: Трипановый синий жизненно пятно, которое не поглощается здоровых жизнеспособных клеток. Когда клетки повреждены или мертвы, трипанового синего может войти в клетку, позволяющую мертвые клетки, которые будут учитываться (ака красить метод исключения). Поэтому под микроскопом, мертвые клетки появляются темно-фиолетовый, а жизнеспособные клетки яркий и светлый цвет.
    6. Высиживатьпри комнатной температуре в течение 5 мин.
    7. Поместите покровное на гемоцитометре. Применение 10 мкл трипанового синего смесь суспензии клеток в паз. Просмотр гемоцитометр на 100 - 200-кратное увеличение. Четыре угла сетки очевидно (см рисунок 2).
    8. Подсчитайте число жизнеспособных клеток (неокрашенных) по отношению к общей клеток в каждой сетке области. Нормальное четыре сетки и умножить на 1 х 10 4 для получения клеток / мл.
      1. Экстраполировать общее число клеток на чашку (или клеток / см 2). Используйте этот номер либо определить правильный объем клеточной суспензии, чтобы использовать, чтобы отобрать новый планшет для тканевых культур в требуемой плотности 3,6 х 10 6 клеток / см 2 или определить общее количество жизнеспособных клеток на пластине или в хорошо.
        Примечание: Для дополнительные указания по использованию гемоцитометре см 10.
  2. Используйте программное обеспечение и цифровой фотоаппарат рассчитывать жизнеспособных клеток.
    1. Получить диgital камеры, сопровождающих его программное обеспечение, 0,4% -ный раствор трипанового синего красителя, соединение световым микроскопом, стерильные пробирки, пипетки и компьютером.
      Примечание: Moticam 2000 цифровая камера с сопровождающей Motic программного обеспечения используется здесь. Любая сравнимая камера и программное обеспечение должно быть достаточно. Убедитесь, что программное обеспечение цифрового камера была откалибрована заранее (в соответствии с протоколом производителя).
    2. Под BSC, использовать 1 мл пипетки или 1000 мкл микропипетки удалить СМИ из клеток ММТ, растущих в культуре ткани блюдо 24 а. Вымойте прилипшие клетки осторожно нанести небольшое количество (примерно 500 мкл) ООН-дополняется (то есть, без каких-либо ЕМЕМ добавок) свежей среды к пластине, то ее удаления. Применение 10 мкл 0,2% трипанового синего (путем разбавления 1: 1 с не-дополнена ЕМЕМ) непосредственно в скважину.
    3. Инкубируют планшет при комнатной температуре в течение 5 мин.
    4. Просмотр пластины под микроскопом при 100 - 200-кратное увеличение жIth цифровая камера прилагается. Плита может быть промывают пищевую добавку СМИ, если окрашивания 2% трипанового синего слишком темный.
    5. Откройте программное обеспечение на компьютере а-я убедиться, что программное обеспечение будет настроен на цели, используемого на вкладке настроек. Должен появиться изображение поля зрения.
    6. Выберите сетку на вкладке Измерение. Примерно появится сетка из квадратов 0,005 см в ширину. Выберите сетки информация для подтверждения площадь каждого квадрата.
    7. Выберите удельную сетки рассчитывать клетки (то есть, 5 х 9 квадратов квадратов). Выберите прямоугольник на вкладке Измерение. Щелкните угол квадрата, и перетащите курсор, чтобы охватить квадраты выбора.
      Примечание: оттенок зеленого будет охватывать квадратов выбора и белой коробке появится в углу, что обеспечивает ширину, высоту, площадь и периметр сечения сетки выбранной (рисунок 3).
    8. Подсчитайте количество viabле клетки в определенной области. Сделайте то же самое для двух других местах в той же скважине или пластины, перемещая пластину под микроскопом.
    9. Будьте уверены, что измеряется площадь же и увеличения не изменилась. Рассчитайте среднее количество жизнеспособных клеток в этой области. Использование зону скважины (на 24-луночный планшет, одна скважина имеет площадь 2 см 2, в течение 100 мм чашку область 78,6 см 2), экстраполировать число жизнеспособных клеток из района, определенного в сетке Общее количество клеток в лунке (клеток / см 2).

3. Лечить ММТ клеток с антипролиферативным агентов

  1. Готовят растворы выбранных антипролиферативных терапевтических агентов (тамоксифен, куркумин и метформин) и дополнительным препарата, аспирин при КБС.
    1. Растворите куркумин и тамоксифен в 100% этанола, чтобы создать концентрацию акций 27 мм. Растворите метформин и аспирин в unsupplementред ЕМЕМ для создания концентрации акций 500 мм и 15 мм, соответственно.
  2. Установите дозу ответ.
    1. Лечить ММТ клетки с тремя антипролиферативных терапевтических агентов (тамоксифен, куркумин и метформин) и дополнительным наркотиков (аспирин) в различных концентрациях в течение 96 часов, чтобы создать кривую. Первоначально администрирование всех наркотиков в диапазоне концентраций, основанных на опубликованных отчетов 1,11-16, а затем в концентрации больше или меньше, чем тех, кто опубликован.
      Примечание: Ответ на дозу определяет минимальную концентрацию препарата, необходимого для получения желаемых результатов. Здесь желаемый результат является снижение клеточной пролиферации по сравнению с контролем.
      1. Для тамоксифена и куркумин, используйте концентрации (и соответствующие объемы) от 0,054 мм (1 мкл), 0,108 мм (2 мкл), 0,162 мм (3 мкл) и 0,216 мм (4 мкл).
      2. Для метформина, используйте концентрации (и соответствующие объемы) 2 мм (2 мкл), 4 мМ (4 мкл), 6 мМ (6 мкл), 8 мМ (8 мкл) и 10 мМ (10 мкл).
      3. Для аспирина, использовать концентрации (и соответствующие объемы) от 0,030 мм (1 мкл), 0,060 мм (2 мкл), 0,099 мМ (3,3 мкл), 0,150 мм (5 мкл) и 0,216 мМ (6,7 мкл).
    2. Разделение ММТ клеток из 10-см чашку на 24-луночный планшет в концентрации 3,6 × 10 6 клеток / см 2. Определить начальную концентрацию клеток обоих методов клеточной подсчета (шаг 2). Назовите этот новый 24-луночного планшета клеток "День Split".
    3. 24 ч после посева клеток, лечения клетки ММТ с каждым из антипролиферативные терапевтических агентов, тамоксифен, куркумин, метформин и аспирин, в концентрациях, описанных в шаге 3.2.1. Относятся к этому как "день 0".
      1. Поскольку каждый хорошо может держать максимум 500 мкл среды, использование микропипеток с стерильных советы микропипетки и новый наконечник каждый раз новый колодец обработке, чтобы избежать крзагрязнение ОС. Использование двух скважин в качестве контролей: клетки, выращенные в отсутствие какого-либо медикаментозного лечения (отрицательный контроль) и клеток, выращенных в присутствии 100% -ного этанола (контроль растворителя).
    4. Рост клеток и повторно вводить лекарства в описанных концентрациях, когда клетки кормили каждый день (этап 1.2) в течение 96 часов (до 4-й день) в дни 1 - 4. Лечения, наблюдать клетки под микроскопом и с помощью рассчитывать Метод в шаге 2.2 (рисунок 4).
    5. Повторите эксперимент, по крайней мере три раза.
    6. Определить оптимальную концентрацию каждого препарата путем построения графика отношения между жизнеспособностью клеток и дозы наркотиков в течение продолжительности эксперимента (рисунок 5).
  3. Установите курс времени.
    1. Treat ММТ клетки с трех антипролиферативным терапевтических агентов (тамоксифен, куркумин и метформина) при фиксированной концентрации для различных периодов времени. Используйте оптимальной концентрации IDENTIFIED через экспериментах доза ответ (см Шаг 3.2).
      1. Используйте следующие концентрации: 0,216 мМ тамоксифен, 0,216 ммоль куркумин и 10 мМ метформина.
        Примечание: время, конечно, определяет количество времени, необходимого для производства лекарственного средства для его оптимального желаемого результата. Здесь, желаемый результат является снижение клеточной пролиферации по сравнению с контролем.
    2. Разделение ММТ клеток из 10-см чашку на 24-луночный планшет в концентрации 3,6 × 10 6 клеток / см 2. Определить начальную концентрацию клеток обоих методов клеточной подсчета (шаг 2). Назовите этот новый 24-луночного планшета клеток "День Split".
    3. 24 ч после посева клеток, лечения клетки ММТ с каждым из антипролиферативные терапевтических агентов, тамоксифен, куркумин, метформин и аспирин, в оптимальных концентрациях, указанных в пункте 3.2. Относятся к этому как "день 0".
      1. Поскольку каждый хорошо может держать максимум 500 мкл среды, насе микропипетки со стерильным советы микропипетки и новым наконечником каждый раз новый колодец обработке, чтобы избежать перекрестного загрязнения.
      2. Использование двух скважин в качестве контролей: клетки, выращенные в отсутствие какого-либо медикаментозного лечения (отрицательный контроль) и клеток, выращенных в присутствии 100% -ного этанола (контроль растворителя).
  4. Рост клеток и повторно вводить лекарства в выбранном концентрации, когда клетки кормили каждый день (этап 1.2) в течение 96 часов (до 4-й день). В дни 1 - 4 лечения, наблюдать клетки под микроскопом и рассчитывать методом в шаге 2.2 (рисунок 4).
  5. Повторите эксперимент, по крайней мере три раза.
  6. Определить оптимальное время экспозиции ММТ клеток в каждой препарата путем построения графика отношения между жизнеспособности клеток и длины (времени) лекарственного лечения в выбранной концентрации (рисунок 6).

4. Модуль Лаборатория

Примечание: Ниже 5 днейГрафик лаборатории для лабораторного модуля. Фиг.7 представляет собой блок-схему, что повлекло бы за собой график течение 5 дней. Для этого деятельность должна быть завершена в течение пяти дней либо время курса или кривую генерируется. Существует не достаточно времени, чтобы генерировать обе кривые. Эксперимент доза-ответ описано ниже. Эксперимент время курс может быть легко поменять местами

  1. Сплит класс на группы: у одной группы установить реакцию дозы и другой ход времени, выбирая концентрацию в середине предлагаемых концентрации дозы.
    1. Поддержание достаточного культур и запасов наркотиков в соответствующих концентрациях. Если не указано иное, выполнять все работы в соответствии с BSC.
  2. День 1
    1. Прямые студентам сделать средства массовой информации и роста клеток (как в шаге 1).
    2. Как студенты получают запас ММТ клеток на 10 см пластины, прямые студенты, чтобы подготовить для культивирования клеток и дать учебник в использовании hemocytomeтер, цифровой микроскопии и цифровой программное обеспечение камеры микроскопии (как в шаге 2).
    3. Калибровка программного обеспечения целям, используемых на микроскопе (например, 4X, 10X, 20X) в настоящее время, используя протокол изготовителя.
  3. День 2
    1. Пусть студенты подтверждают общее количество клеток и жизнеспособность клеток (как в шаге 2).
    2. Студентам рассчитывать клеток на 100 мм чашку с использованием как программное обеспечение микроскопии и методы гемоцитометра, чтобы подтвердить, аналогичные результаты получены.
    3. Прямые студентам получить 24-луночного планшета и раскол клетки от 100 мм блюдо к 24-луночных планшетах до желаемой исходной плотности клеток покрытия (как в шаге 1). Это считается день Сплит. Поместите луночный планшет в инкубаторе для клеточных культур 24 в течение 24 часов.
  4. День 3
    1. Выращивают ММТ клеток в течение 24 часов на 24-луночный планшет. Попросите учащихся наблюдать клетки под микроскопом и с помощью микроскопии рассчитывать программное обеспечение (как в шаге 2).
    2. Дайте студент / TEЯ образцы запасов лечения рака наркотиков. Попросите их подготовить и разбавить оригинальную маточного раствора (как в шаге 3). Добавьте различных концентраций препаратов в камеры, чтобы установить кривую. Это называется день 0.
    3. Инкубируйте клетки (шаг 1.2) с препаратами для максимум 48 часов.
  5. День 4
    1. Попросите учащихся наблюдать обработанные клетки через 24 часов. Это день 1.
    2. Граф каждый хорошо, используя программное обеспечение микроскопии. Запись фотографий каждой лунки так, что подсчет может проводиться вне лаборатории (как в шаге 2).
    3. Инкубируйте клетки (шаг 1.2) с препаратами для еще 24 часов.
      Примечание: Инструктор обеспечивает дополнительные учебные пособия и отзывы анализа данных и графического представления. Студенты учатся создавать рисунки, графики и статистический анализ на следующий день сбора данных.
  6. День 5
    1. Студентам обработанных клеток после 48 часов, день 2.
    2. Граф друга с помощью микроскопии программного обеспечения. Запись фотографий каждой лунки так, что подсчет может проводиться вне лаборатории (как в шаге 2).
    3. Урожай и сбора клеток для подсчета традиционным методом гемоцитометре как средство проверки студент способность эффективно использовать метод микроскопии программного обеспечения (как в шаге 2).
      Примечание: Сбор данных и сделать выводы или пересмотреть гипотезы, соответственно.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Рост ММТ клетки и сравнивая методы подсчета.

Молочной железы мыши опухолевые клетки были успешно выращены и характеризуется (рисунок 1) и новый метод подсчета клеток, разработанный с помощью программного обеспечения Motic, цифровая камера связанный программу для микроскопа. Этот новый метод подсчета клеток по сравнению с традиционным методом подсчета с использованием гемоцитометра (рисунок 2) и было показано, что в равной степени точным при определе...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Модуль Лаборатория представлены, который направлен преподавать различные темы в области клеточной биологии с помощью развитых методов животных культуры клеток. Модуль достигает этого путем анализа последствий ряда антипролиферативных химических веществ на репликацию клеток, которые моделируют рака молочной железы человека. Первичный анализ основан на фундаментальном технике подсчета клеток и вводит новый способ подсчета клеток с использованием микроскопии программное обеспечение. Деятельность, содержащие модуль может бы...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не получают никакой финансовой или сравнимую поддержку от Motic.

Благодарности

Эта работа поддержана Фондом Джозефа Александра, премией ASBMB Undergraduate Research Award, 2013-2014, и грантом Science Award, Marymount Manhattan College, 2012-2013.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Капюшон для культуры тканейESCO Labculture ReliantClass II Type A2 Шкаф биологической безопасности
Waterjactor CO2 ИнкубаторCEDCOModel 1510
Bright-line ГемоцитометрAmerican Opticalс двумя отдельными сетками
Motic Images PlusMac OSX Verison 2.0 или выше
Gilson PipetmanRainin instrument co. incP-20D, P-200D, P-1000D
CK30/CK40 Микроскоп культурыOlympus4 объектив микроскоп инвертированного света с камерой
200 μ l Наконечники ПипетаMidSci40200C
1,000 μ l Наконечники для пипетокMidSciAVR4
10 мл Сериологические ПипецTPPTP94010
24 лункиCoStar - Cluster Tissue Culture Cluster352424 лунки, диаметр лунки 16 мм, радиационно стерилизованный
Trypan Blue Solution 0,4%SigmaT8154100 мл, проверенные на клеточной культуре без дымки
Bright-line Hemacytometer replacement coverclosure, недымчатыеSigma
Клетки опухоли молочной железы мыши (MMT)ATCCCCL-51
Eagle Minimum Essentail Medium (EMEM)ATCC30-2003500 мл
Фетальная бычья сывороткаSigmaF0926500 мл
Метформина гидрохлоридSigmaPHR1084500 мг
ТамоксифенSigmaT5648белый или бело-желтый порошок
CurmuminSigmaC1386желто-оранжевый порошок
AspirinSigmaA2093соответствует спецификациям тестирования USP
Z375357

Ссылки

  1. Hammamieh, R., et al. Students investigating the antiproliferative effects of synthesized drugs on mouse mammary tumor cells. Cell Biol Educ. 4 (3), 221-234 (2005).
  2. Sykes, J. A., Whitescarver, J., Briggs, L. Observations on a cell line producing mammary tumor virus. J Natl Cancer Inst. 41 (6), 1315-1327 (1968).
  3. Palombi, P. S. J., Snell, K. Learning about Cells as Dynamic Entities: An Inquiry-Driven Cell Culture Project. Bioscene: Journal of College Biology Teaching. 33, 27-33 (2008).
  4. Ledbetter, M. L. S., Lippert, M. J. Glucose Transport in Cultured Animal Cells: An Exercise for the Undergraduate Cell Biology Laboratory. Cell Biology Education. 1 (3), 76-86 (2002).
  5. Weaver, D. Cardiac Cells Beating in Culture: A Laboratory Exercise. American Biology Teacher. 69, 407-410 (2007).
  6. Marion, R. E., Gardner, G. E., Parks, L. D. Multiweek cell culture project for use in upper-level biology laboratories. Advances in Physiology Education. 36, 154-157 (2012).
  7. Mozdziak, P. E. P., James, N., Carson, S. usanD. An Introductory Undergraduate Course Covering Animal Cell Culture Techniques. Biochemistry and Molecular Biology Education. 32 (5), 319-322 (2004).
  8. Anderson, L. W., et al. A taxonomy for learning, teaching and assessing: A revision of Bloom's Taxonomy of educational objectives (Complete Edition). , Longman, London, England. (2001).
  9. Centers for Disease Contol and Prevention. Appendix A - Primary Containment for Biohazards: Selection, Installation and Use of Biological Safety Cabinets. , (2014).
  10. Davis, J. M. Basic Cell Culture: A Practical Approach. , 2nd edn, Oxford University Press. Oxford, UK. (2002).
  11. Algra, A. M., Rothwell, P. M. Effects of regular aspirin on long-term cancer incidence and metastasis: a systematic comparison of evidence from observational studies versus randomised trials. Lancet Oncol. 13 (5), 518-527 (2012).
  12. Anand, P., Sundaram, C., Jhurani, S., Kunnumakkara, A. B., Aggarwal, B. B. Curcumin and cancer: an 'old-age' disease with an 'age-old' solution. Cancer Lett. 267 (1), 133-164 (2008).
  13. Ararat, E., Sahin, I., Altundag, K. Mechanisms behind the aspirin use and decreased breast cancer incidence. J BUON. 16 (1), 180(2011).
  14. Ararat, E., Sahin, I., Altundag, K. Aspirin intake may prevent metastasis in patients with triple-negative breast cancer. Med Oncol. 28 (4), 1308-1310 (2011).
  15. Blandino, G., et al. Metformin elicits anticancer effects through the sequential modulation of DICER and c-MYC. Nat Commun. 3, 865(2012).
  16. Kunnumakkara, A. B., Anand, P., Aggarwal, B. B. Curcumin inhibits proliferation, invasion, angiogenesis and metastasis of different cancers through interaction with multiple cell signaling proteins. Cancer Lett. 269 (2), 199-225 (2008).
  17. Burstein, D. E., Blumberg, P. M., Greene, L. A. Nerve growth factor-induced neuronal differentiation of PC12 pheochromocytoma cells: lack of inhibition by a tumor promoter. Brain Res. 247 (1), 115-119 (1982).
  18. Nazarali, S. A., Narod, S. A. Tamoxifen for women at high risk of breast cancer. Breast Cancer (Dove Med Press). 6, 29-36 (2014).
  19. Cui, J., et al. Cross-talk between HER2 and MED1 regulates tamoxifen resistance of human breast cancer cells). Cancer Res. 72 (21), 5625-5634 (2012).
  20. Komm, B. S., Mirkin, S. An overview of current and emerging SERMs. J Steroid Biochem Mol Biol. 143C, 207-222 (2014).
  21. Kaplan, R. M., Satterfield, J. M., Kington, R. S. Building a better physician--the case for the new MCAT. N Engl J Med. 366 (14), 1265-1268 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Методы культивирования клетоканализ пролиферации клетоктестирование химиотерапевтических препаратовподсчет в гемоцитометреанализ с помощью программного обеспечения для микроскопииконцепции клеточного циклапути клеточной сигнализацииобразование в области биологии ракаразвитие лабораторных навыков
Используя мышь опухоли молочной железы клетки научить радиатора Биология понятия: Простой модуль Лаборатория
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.