Использование флуоресцентной активированной сортировки клеток для изучения тип-специфической для клеток экспрессии генов в тканях мозга крыс

Jaclyn M. Schwarz

doi:10.3791/52537

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Использование флуоресцентной активированной сортировки клеток для изучения тип-специфической для клеток экспрессии генов в тканях мозга крыс

16.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52537

⸱

28 мая 2015 г.

Jaclyn M. Schwarz¹

¹Department of Psychological and Brain Sciences, University of Delaware

В этой статье

Краткое содержание

Целью этого протокола является использование метода сортировки флуоресцентно активированных клеток (FACS) для сортировки конкретных типов нервных клеток для последующего анализа экспрессии генов, специфичных для конкретного типа клеток, эпигенетических маркеров и/или экспрессии белков.

Аннотация

Мозг состоит из четырех основных типов клеток, включая нейроны, астроциты, микроглию и олигодендроциты. Несмотря на то, что нейроны не являются самым распространенным типом клеток в мозге, они являются наиболее широко изученными из этих типов клеток, учитывая их прямую роль в влиянии на поведение. Другие типы клеток в мозге также влияют на функцию и поведение нейронов через сигнальные молекулы, которые они производят. Нейробиологи должны понимать взаимодействия между типами клеток в мозге, чтобы лучше понять, как эти взаимодействия влияют на нейронные функции и заболевания. На сегодняшний день наиболее распространенным методом анализа экспрессии белка или гена является гомогенизация образцов целой ткани, обычно с кровью, и без учета типа клеток. Этот подход представляет собой информативный подход к изучению общих изменений в экспрессии генов или белков, которые могут влиять на нейронные функции и поведение; Тем не менее, этот метод анализа не способствует более глубокому пониманию экспрессии генов, специфичных для каждого типа клеток, и влияния межклеточной коммуникации на нейронные функции. Анализ поведенческой эпигенетики является областью растущего внимания, в которой изучается, как модификации структуры дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) влияют на долгосрочную экспрессию и поведение генов; Тем не менее, эта информация может быть релевантной только в том случае, если она анализируется специфичным для каждого типа клеток образом, учитывая дифференциальную линию и, следовательно, эпигенетические маркеры, которые могут присутствовать на определенных генах отдельных типов нервных клеток. Описанный ниже метод сортировки флуоресцентных активированных клеток (FACS) обеспечивает простой и эффективный способ выделения отдельных нервных клеток для последующего анализа экспрессии генов, экспрессии белков или эпигенетических модификаций ДНК. Этот метод также может быть модифицирован для выделения более специфичных типов нервных клеток в мозге для последующего анализа, специфичного для каждого типа.

Введение

Целью описанного ниже протокола является выделение отдельных типов клеток из гетерогенной популяции нервной ткани для последующего анализа экспрессии генов, специфичных для конкретного типа клеток, экспрессии белка или даже эпигенетических маркеров. Мозг состоит из многих типов клеток, которые происходят от различных клеток-предшественников и обладают свойствами и функциями, специфичными для каждого типа. Несмотря на эти различия, эти различные типы нервных клеток могут экспрессировать сходные рецепторы и внутриклеточные сигнальные молекулы, что затрудняет анализ этих более распространенных белков для измерения или интерпретации с помощью традиционных методов. Нейроби....