Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Вертикальный Визуализация

7.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52636

⸱

13 марта 2015 г.

 , 
1Department of Biological Sciences, University of Maryland Baltimore County

В этой статье

Краткое содержание

Метод вертикальной визуализации, описанный в этом протоколе, позволяет детально визуализировать полюса развивающегося яйца Drosophila melanogaster. Этот взгляд со стороны дает новый взгляд на расположение и морфологию нескольких типов клеток в фолликулярном эпителии.

Аннотация

Оогенез Drosophila melanogaster обеспечивает идеальный контекст для изучения различных процессов развития, поскольку яичник относительно прост по архитектуре, хорошо охарактеризован и поддается генетическому анализу. Каждая яйцевая камера состоит из клеток зародышевой линии, окруженных одним эпителиальным слоем клеток соматического фолликула. Подмножества фолликулярных клеток подвергаются дифференцировке на определенных стадиях, превращаясь в несколько различных типов клеток. Стандартные методы в первую очередь позволяют получить боковой обзор яйцеклеток и, следовательно, ограниченный взгляд на организацию и идентичность фолликулярных клеток. Протокол вертикальной визуализации описывает технику монтажа, которая позволяет получить новый вертикальный вид яйцевых камер с помощью стандартного конфокального микроскопа. Образцы сначала монтируются между двумя слоями глицеринового желе в боковом (горизонтальном) положении на предметном стекле стеклянного микроскопа. Затем желе с оболочкой из яйцевых камер разрезают на блоки, перекладывают на покровную крышку и переворачивают, чтобы установить яйцевые камеры вертикально. Смонтированные яйцевые камеры могут быть визуализированы как в вертикальном, так и в перевернутом конфокальном микроскопе. Этот метод позволяет изучать спецификацию фолликулярных клеток, организацию, молекулярные маркеры и развитие яйцеклеток с новыми подробностями и с новой точки зрения.

Введение

Исследование дрозофилы оказывает большое понимание генетического регулирования в широком диапазоне явлений. В частности, было обширное исследование развития яиц, потому что оогенез обеспечивает послушный путь, чтобы исследовать различные процессов развития, в том числе ткани рисунка, изменения клеточной полярности, переключение клеточного цикла и поступательного регулирования 1,2,3,4. Одним из важных событий во морфогенетического оогенезе это спецификация, приобретение подвижности и миграции из набора клеток, называемых пограничные клетки (обзор в 5). Поскольку миграции клеток является ключевым признаком животного морфогенеза, и из-за генетического регулирование этого процесса хорошо сохраняется, механизмы, определенные в мух могут быть важными в других контекстах. Таким образом, мы исследуем молекулярную контроль миграции границы ячейки. Для наших исследований мы разработали новый метод, чтобы наблюдать передней полюсов развития яиц,где возникают пограничные клетки, чтобы изучить, как они развиваются в деталях.

В яичнике, яичные камеры на различных стадиях развития существуют вдоль цепочек, называемых овариол, которые заключены в тонкий оболочки (рис 1А). Каждое яйцо камера будет перейти к форме одно яйцо. Во время оогенеза, несколько различных типов элементов должны развиваться в скоординированной манере. D. MELANOGASTER яйцо камера состоит из 16 зародышевой линии клеток, в том числе один ооцит, окруженный однослойной фолликулярного эпителия 6. Небольшое количество специализированных клеток, называемых полярных клетки, возникают на передней и задней опор эпителия. Пограничные клетки 6-8 происходят в передней эпителия яйцевой камеры, вызванного полярных клеток 5,7. В середине оогенеза (стадия 9), пограничные клетки отделяются от своих соседей и мигрируют между питающих клеток, чтобы достичь яйцеклетки на заднем яйцевой камеры 5,7. Это движение должно быть выполненов то время как пограничные клетки остаются в кластере окружающей два неподвижных белых клеток, что делает этот тип коллективной миграции клеток. Успешное миграция границ клеток кластера обеспечивает правильное развитие микропиле яичной скорлупы, которая необходима для оплодотворения.

Передние полярные клетки указания судьбу границы клеток путем активации каскада трансдукции сигнала. Полярные клетки секретируют цитокин, непарных (UPD), который связывается с рецептором трансмембранной, Domeless (купол), на соседней ячейки стручка на стадии развития 8 ооцитов 8,9. Связывание UPD вызывает Janus тирозин-киназы (ЯК) фосфорилировать сигнал датчика и активатора транскрипции (STAT) 8,10,11. STAT затем переходит к ядру, чтобы активировать транскрипцию. Медленные Клетки границе (SLBO) является фактором транскрипции, который является прямым транскрипции цель STAT и также необходим для границы миграции клеток 12. Боковые виды яиц камер указывают тшляпа STAT деятельность регулируется в градиенте через передний эпителий 8,11,13. Фолликулярных клеток близкие к полярным клеток имеют самые высокие уровни активированного STAT, таким образом, они становятся пограничные клетки и вторгаются в соседнюю зародышевой линии ткани.

Чтобы понять, как пограничные клетки указан внутри и отделить от эпителия, мы должны наблюдать, как ткань организована. Если мы рассматриваем яичные камеры от передне-на перспективу, можно было бы ожидать радиальную симметрию STAT деятельности в фолликулярных клеток, окружающих полярные клетки. Конечный на виду также более точно показать различия мембранных белков и межклеточных интерфейсов до и во время отрыва, чем сравнение клеток в различных фокальных плоскостях. Поскольку яйцо камеры продолговатые и прикреплены друг к другу с помощью стебля клеток, они оседают на предметные стекла в поперечном направлении, что делает его трудно наблюдать переднюю архитектуру. Таким образом, много информации о клетках на полюсах яиц камеры имеетбыли выведены из боковых взглядов. Хотя некоторая информация может быть получена путем алгоритмических 3-D реконструкций оптических секций, комбинационного рассеяния света, Фотообесцвечивания и бедных рамки резолюции в Z-оси сделать эту информацию более подробно и надежны в отсутствии дорогих методов, как супер-разрешением микроскопии 14 , Другие виды секции на основе изображений (например, электронная микроскопия или микротом секционирования) требуют больших манипуляций тканей, в том числе обезвоживания, увеличивая вероятность для артефактов. Таким образом, мы разработали новый метод к фотографиям D. MELANOGASTER яичные камеры в то время как в вертикальном положении. Этот метод уже доказали свою полезность в объяснении, как подвижные клетки суждено (см репрезентативные результаты и штатное др рассматривается), и, вероятно, будет более широко ценным при исследовании других аспектов оогенеза.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Вскрытие овариол

  1. Перевести около пятнадцати 2-4-дневных женского мух и несколько мужчин к новому лету пищевой флакон с добавлением активных сухих дрожжей. Используйте хлопок в качестве плагина для флаконов и добавить несколько капель воды к хлопку, чтобы сохранить высокую влажность.
  2. Место флакона в 25 ° C инкубаторе в течение 14-16 ч, чтобы максимизировать количество стадия 8-10 яиц камер.
    Примечание: Время инкубации варьируется в зависимости от температуры и желаемой стадии.
  3. Подготовка рассечение СМИ, 0,1 М КПО 4 и NP40 решения по мере необходимости в течение следующего дня (см Материалы).
  4. Обезболить мух с помощью CO 2, и поместите под микроскопом рассечение. Внесите несколько капель рассечение СМИ в каждой полости в стекле депрессии слайда.
  5. Держите щипцы в каждой руке на примерно 30 ° углом к ​​поверхности стола и сориентироваться одна женщина летать с опущенными крыльями. С вашей не доминантной рукой, забрать самку с помощью щипцов, схватив ее в аnterior живота, недалеко от грудной клетки, и погрузите ее в рассечение СМИ в депрессию слайд (рис 1А вставке).
  6. С другой парой щипцов, держитесь экзоскелет на вентральной задней части брюшной полости и пробить. Возьмите яичников у заднего конца, то вытащить их из брюшной полости и поместить в свежую среду с другой стороны впадины слайда. (1А вставка). Избегайте потянув за исключением кишечник. Откажитесь от туши.
  7. Повторите с другими женщинами мух, пока все яичники не расчленены. Откажитесь от мужчин.
  8. С одной парой щипцов, удерживая яичника на заднем конце (около крупнейших яичных камер), а также с другой стороны использовать пару щипцов, чтобы зажать один из самых передних яиц камер (гермарии). (1А).
  9. Медленно и постепенно, тянуть ovariole цепь из яичника оболочки. Продолжайте рассекать из овариол индивидуально, пока все нужные яичные камеры не гemoved.
  10. Повторите шаги 1.7-1.8 для всех расчлененный яичников.
  11. После завершения передачи овариол в 0,6 мл трубки с помощью пластиковой пипетки передачи.
  12. Пусть овариол оседают на дно трубки, а затем приступить к фиксации и окрашивания шагов.

2. Иммунофлуоресцентного (IF) Окрашивание овариол

  1. Осторожно снимите рассечение СМИ от овариол с помощью пипетки. Будьте уверены, что не удалите все овариол яйцо или камеры. Оставьте примерно 50 мкл овариол и рассечение СМИ.
  2. Добавить 50 мкл 16% параформальдегидом до 150 мкл 0,1 М КПО 4 буфера в трубке, и добавить решение яиц камер, чтобы исправить их. Инкубируют в то время качания в течение 10 мин. ВНИМАНИЕ: параформальдегиде является токсичным.
  3. Удалить фиксатор и промыть в два раза с 0,5 мл NP40 промывочного буфера.
  4. Вымойте два раза в течение 15 минут каждый при комнатной температуре.
  5. Обратитесь к стандарту, если протокол 15 для последующих шагов.
    1. Если коротко, то после фиксации, добавитьПервичные антитела на соответствующих разведений и инкубировать O / N при 4 ° С. Промыть в NP40 несколько раз, а затем добавить вторичные антитела (1: 200) разведений.
    2. Промыть несколько раз в NP40, затем добавить DAPI (1: 1000) в течение 10 мин, а затем повторить стирок. Один раз, если протокол будет завершена, добавить 200 мкл 50% глицерина в PBS, чтобы яйцо камер и оставьте при комнатной температуре в течение 2 часов.
    3. Удалить решение заменить его 70% глицерина в PBS, и накрыть фольгой. Поместите образец на 4 ᵒC до готовности для монтажа. Между тем, продолжите с шага 3.

3. Предварительная подготовка глицерина желе слайдов

  1. Измерьте по крайней мере 4 мл глицерина желе с помощью шпателя и заполнить трубу стекло культуре клеток в половине пути знак. Melt глицерина желе на водяной бане при 55 ° С в течение 30 мин.
  2. Налейте небольшое падение глицерина, примерно 300 мкл, от маточного раствора на два микроскопа. Использование ткани, распространяется глицерин в тонком LAЙер на каждом из слайдов. Это обеспечивает основу и позволяет легко удаления глицерина желе на этапе 5.6.
  3. Отрежьте кончик от фильтрованного пипетки 1000 мкл. Использование пипетки сокращают для передачи 1000-1500 мкл теплой желе глицерина медленно каждому предметное стекло. Позаботьтесь, чтобы предотвратить пузыри.
  4. Пусть глицерин желе скользит сидеть в течение 5 мин при комнатной температуре, чтобы установить.
  5. Поместите каждую глицерин желе слайд в 60 мм × 15 мм чашки Петри и накрыть полиэтиленовой пленкой. Место в 4 ° CO / N. Возможно, магазин глицерина желе слайды до 5 дней при 4 ° С.

4. Монтаж яйцо палаты

  1. Использование образцов, начиная с шага 2.5, пипетки несколько 3 мкл капель яичных камер в 70% глицерине через один глицерина желе слайда. Продолжить Пипетирование 3 мкл капли, пока все яйца камеры не на этом слайде. Убедитесь, что каждая капля содержит, по меньшей мере, десять яиц камер. Между тем, нагреть пробирку глицерина желе в C на водяной бане 55 °,
  2. Поместите глицерин желе слайд с яйцом камер под микроскопом рассечение. Регулировка увеличения так, что только одна капля яиц камер в поле зрения (Фиг.1В).
  3. Использование 30 иглы, ложки, подобрать нужный стадии яйца камеры. При необходимости, отдельные желаемые яичные камеры из в ovariole цепочку с помощью иглы, как ножом.
  4. Чтобы избежать мусора, которые могут помешать изображений, передачи яйцо камеры во вторую глицерина желе слайд, с передней обращенной влево (фиг 1E -1). Повторяйте, пока не существует, по крайней мере семь яиц камеры выстроились в колонну (рис 1в).
  5. Форма новые столбцы из семи, пока все нужные яичные камеры не передаются на второй глицерин желе слайда.
  6. Оторвите небольшой кусочек ткани и твист. Используйте это, чтобы поглощать избыточную PBS глицерин из яиц камер, слегка касаясь каждой из них. Будьте осторожны, чтобы не удалить яичные камеры.
  7. Отрежьтекончик пипетки фильтруют 200 мкл. Используйте это, чтобы передать 150 мкл глицерина желе, чтобы покрыть все столбцы яиц камер.
    ПРИМЕЧАНИЕ: количество глицерина желе, необходимых для покрытия столбцы основан на этапах камеры яйцо и число столбцов. Количество может быть отрегулирована.
  8. Пусть установленные яичные камеры сидеть в течение 5 мин при комнатной температуре, пока верхний слой глицерина желе не будет полностью затвердевает (рис 1D).
  9. Место слайд конных яиц камер в 60 мм × 15 мм чашки Петри и накрыть полиэтиленовой пленкой. Хранить при температуре 4 ° СО / N, чтобы позволить глицерин желе слои, чтобы укрепить вместе (место в темноте, если есть опасения по поводу фотообесцвечиванию).

5. Подготовка яичных палат для работы с изображениями

  1. Поместите слайд смонтированных яиц камер под микроскопом рассечение. Отрегулируйте увеличение, так что только одна колонка яиц камер находится в поле зрения.
  2. Использование угол 45 ° миниатюрный скальпель, вырезать straigHT линии с правой стороны от первого столбца яиц камер (близких к задней стороне яйца камер). (Рисунок 1D-Е)
  3. Далее, на голову выше первого яйца камеры в верхней и ниже последнего яйца камеры в колонке. В этот момент колонна яиц камер должны быть сокращены с трех сторон.
  4. Использование microknife, срез вдоль левой стороны колонки, как можно ближе к передней стороне яйца камер (рис 1E -3).
  5. Пипетировать 100 мкл холодной 1X PBT через колонку вырезом.
  6. Используйте круглый краями шпателя, чтобы удалить лишнюю желе глицерина вокруг трех сторон разреза колонны яичных камер и отказаться, оставив остальное на слайде.
  7. Вставьте шпатель в надреза на передней стороне яйца камер и отделить столбец из основного блока глицерин желе.
  8. Подготовка образцов для любой перевернутые (5.8.1) или вертикально (5.8.2) микроскопии.
    1. Для инвертированный микроскоп: трансфер Tон колонна яиц камер для покровное с передней стороны яичных камер вниз. Повторите шаги 5,2-5,8 пока все столбцы глицерина желе не были удалены и установлены. Добавьте пару капель 50% PBS-глицерина на каждом блоке яичных камер, чтобы предотвратить их от высыхания. Изображение яичные камеры непосредственно на покровное.
    2. Для вертикального микроскопа: Трансфер столбец из яиц камер для предметное стекло микроскопа с передней стороной вверх. Повторите шаги 5.2-5.9, пока все столбцы глицерина желе не были удалены и установлены на предметных стеклах. Добавьте пару капель 50% PBS-глицерина на каждом блоке яичных камер и крышки блоков с # 1 ½ покровное.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Метод прямой визуализации позволил нам увидеть непосредственно в организацию клеток в передней фолликулярного эпителия на стадии 8. общим маркером для судьбы фолликул клеток, об отсутствии Глаза (ЕЯ) белок, а также маркер ядерной ДНК DAPI, показали даже выражение по этой области клеток, и показали, что все клетки можно рассматривать с аналогичными интенсивности окрашивания (Фигура 2В "). Белки, регулируемые в ответ на цитокинов UPD, однако, показали переменных модели и уровни экспрессии. Полярные к...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Здесь мы опишем метод монтажа и изображение небольшой, развивающееся яйцо камеры с точки зрения конечного дальше. Общие методы для работы с изображениями яйца камер оптимизированы для боковым видом и, прежде всего, позволяют точно визуализировать Медио-боковая фолликулярных клеток при окраске флуоресцентными антителами. Использование Z-стеки или 3-D реконструкций средств при просмотре нескольких фокальных плоскостей, но по-прежнему недостаточно для субклеточном разрешением полюсов эллиптических яиц камер (рис 2D...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Мы ценим помощь членов сообщества мух, особенно доктора Дениз Монтелл, доктора Линн Кули и доктора Пернилле Рорт, в отношении реагентов. Мы благодарим Flybase, Bloomington Drosophila Stock Center и Developmental Studies Hybridoma Bank за информацию и предоставление запасов мух и антител соответственно. LM поддерживается грантом Министерства образования, учебной стипендией Graduate Assistance in the Areas of National Need (GAANN) (P200A120017) и грантом NIGMS Initiative for Maximizing Student Development Grant (2 R25-GM55036). Часть работы по микроскопии была поддержана грантом NSF MRI DBI-0722569 и Keith R. Porter Core Imaging Facility. Исследование было частично поддержано премией NSF CAREER Award (1054422) и премией Бэзила О'Коннора Starter Scholar Award от March of Dimes, которые были присуждены MSG.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0,1 М буфер фосфата калия (KPO4 Buffer)Добавьте 3,1 г2PO4• H2O и 10,9 г Na2HPO4 (безводный) в дистиллированную H2O для получения объема 1 л. pH конечного раствора будет равен 7,4. Этот буфер может храниться до 1 месяца при температуре 4°C.
16% Параформальдегид водный раствор, класс EMЭлектронная микроскопия Sciences15710без метанола для сохранения флуоресценции GFP
30G x 1/2 дюйма игла VWRBD305106Регулярный скос
Активные сухие дрожжиGenesee Scientific62-103Для откорма самок
Сыворотка крупного рогатого скота АльбуминPAA-клеточная культура компанииA15-701Используется в буфере для промывки NP40
Щипцы Dumont #5 Инструментыдля тонкой науки11295-10Сплав Dumostar, биологический наконечник; острые кончики необходимы для вскрытия
овариолаDAPI (4′,6-Diamidino-2-фенилиндола дигидрохлорид)Sigma AldrichD95425 мг/мл стоковый раствор   
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Life Technologies16140-071Добавлен в добавку диссекционной среды (10%) 
Стеклянная пробирка для культивированияVWR47729-57614 мл
Стеклянные депрессионные стеклаVWR470019-020толщиной 1,2 мм, двухполостное
глицериновое желе Electron Microsocpy Sciences17998-10Монтажная среда
ГлицеринIBI ScientificIB1576070% в PBS
IGEPAL CA-630Sigma AldrichI3021-500ML(взаимозаменяемый для Nonidet P-40)  Используется в буфере для стирки NP40 
Флуоресцентный стереоскоп Leica Leica Microsystems
Leica SP5 Конфокальный микроскопLeica Microsystems40x/0.55NA сухой объектив 
Микрошпатель VWR82027-518
Предметное стекло для микроскопаVWR16004-36875x25x1 мм
NP40 Буфер50 мМ TRIS-HCl, 150 мМ NaCl, 0,5% ипегал, 1 мг/мл BSA и 0,02% азид натрия
Пенициллин-стрептомицин-глутаминLife Technologies10378-016Добавлен в дополнение к среде для вскрытия (0,6X)
Петридиш-Полистерин, стерильныйVWR82050-54860 Вт x 15 Н мм
Фосфатный буфер физиологический растворSigma AldrichP3813-10PAK10 упаковок порошкового
фосфата калия двухосновногоSigma AldrichP3786-500Gиспользуется в 0,1 м KPO4 Buffer 
Калийфосфат одноосновнойSigma AldrichP9791-500Gиспользуется в 0,1 м КПО<под>4 Буфер 
[header]
Schneider' s Insect MediumLife Technologies
11720018		с L-глутамином и бикарбонатом натрия
Азиднатрия Sigma AldrichS2002-25GИспользуется при окрашивании флуоресцентными антителами
Хлорид натрияSigma AldrichS3014-500GИспользуется в буфере для промывки NP40
TRIS-HClIBI ScientificIB701441 м TRIS-HCl, pH 7,4
Volocity 3D изображение Аналитическое программное обеспечениеPerkinElmerДля обработки конфокальных Z-стеков
мух из нержавеющей стали для промывки

Ссылки

  1. Hudson, A. M., Cooley, L. Methods for studying oogenesis. Methods. 68 (1), 207-217 (2014).
  2. Bastock, R., St Johnston, D. Drosophila oogenesis. Curr Biol. 18 (23), R1082-R1087 (2008).
  3. Wu, X., Tanwar, P. S., Raftery, L. A. Drosophila follicle cells: morphogenesis in an eggshell. Semin Cell Dev Biol. 19 (3), 271-282 (2008).
  4. Bilder, D., Haigo, S. L. Expanding the morphogenetic repertoire: perspectives from the Drosophila egg. Dev Cell. 22 (1), 12-23 (2012).
  5. Montell, D. J., Yoon, W. H., Starz-Gaiano, M. Group choreography: mechanisms orchestrating the collective movement of border cells. Nat Rev Mol Cell Biol. 13 (10), 631-645 (2012).
  6. Spradling, A. C., Bate, M., Marinez-Arias, A. Developmental genetics of oogenesis. The Development of Drosophila melanogaster. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-70 (1993).
  7. Montell, D. J. Border-cell migration: the race is on. Nat Rev Mol Cell Biol. 4 (1), 13-24 (2003).
  8. Silver, D., Geisbrecht, E., Montell, D. Requirement for JAK/STAT signaling throughout border cell migration in Drosophila. Development. 132 (15), 3483-3492 (2005).
  9. Ghiglione, C., et al. The Drosophila cytokine receptor Domeless controls border cell migration and epithelial polarization during oogenesis. Development. 129 (23), 5437-5447 (2002).
  10. Denef, N., Schüpbach, T. Patterning: JAK-STAT signalling in the Drosophila follicular epithelium. Curr Biol. 13 (10), R388-R390 (2003).
  11. Beccari, S., Teixeira, L., Rørth, P. The JAK/STAT pathway is required for border cell migration during Drosophila oogenesis. Mech Dev. 111 (1-2), 115-123 (2002).
  12. Montell, D., Rorth, P., Spradling, A. slow border cells, a locus required for a developmentally regulated cell migration during oogenesis, encodes Drosophila C/EBP. Cell. 71 (1), 51-62 (1992).
  13. Xi, R., McGregor, J., Harrison, D. A gradient of JAK pathway activity patterns the anterior-posterior axis of the follicular epithelium. Dev Cell. 4 (2), 167-177 (2003).
  14. Toomre, D., Bewersdorf, J. A new wave of cellular imaging. Annu Rev Cell Dev Biol. 26, 285-314 (2010).
  15. McDonald, J., Pinheiro, E., Kadlec, L., Schupbach, T., Montell, D. Multiple EGFR ligands participate in guiding migrating border cells. Dev Biol. 296 (1), 94-103 (2006).
  16. Van de Bor, V., Zimniak, G., Cérézo, D., Schaub, S., Noselli, S. Asymmetric localisation of cytokine mRNA is essential for JAK/STAT activation during cell invasiveness. Development. 138 (7), 1383-1393 (2011).
  17. Hayashi, Y., et al. Glypicans regulate JAK/STAT signaling and distribution of the Unpaired morphogen. Development. 139 (22), 4162-4171 (2012).
  18. Airoldi, S. J., McLean, P. F., Shimada, Y., Cooley, L. Intercellular protein movement in syncytial Drosophila follicle cells. J Cell Sci. 124 (Pt 23), 4077-4086 (2011).
  19. Rørth, P., et al. Systematic gain-of-function genetics in Drosophila). Development. 125 (6), 1049-1057 (1998).
  20. Lee, T., Lee, A., Luo, L. Development of the Drosophila mushroom bodies: sequential generation of three distinct types of neurons from a neuroblast. Development. 126 (18), 4065-4076 (1999).
  21. Shimada, Y., Burn, K. M., Niwa, R., Cooley, L. Reversible response of protein localization and microtubule organization to nutrient stress during Drosophila early oogenesis. Dev Biol. 355 (2), 250-262 (2011).
  22. Quiñones-Coello, A. T., et al. Exploring strategies for protein trapping in Drosophila. Genetics. 175 (3), 1089-1104 (2007).
  23. Buszczak, M., et al. The carnegie protein trap library: a versatile tool for Drosophila developmental studies. Genetics. 175 (3), 1505-1531 (2007).
  24. Belu, M., et al. Upright imaging of Drosophila embryos. J Vis Exp. (43), (2010).
  25. Witzberger, M. M., Fitzpatrick, J. A., Crowley, J. C., Minden, J. S. End-on imaging: a new perspective on dorsoventral development in Drosophila embryos. Dev Dyn. 237 (11), 3252-3259 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Вертикальный Визуализация
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.