Простой и недорогой метод для определения холодную чувствительность и адаптация в мышах

Summary

Холодный подошвенный анализ (CPA) измеряет чувствительность к холоду в диапазоне от 30 °C до 5 °C, а также может измерять адаптацию к холоду. В этом протоколе описывается, как использовать CPA для измерения гиперчувствительности к холоду, анальгезии и адаптации у мышей.

Abstract

Гиперчувствительность к холоду является серьезной клинической проблемой, затрагивающей широкую подгруппу пациентов и вызывающей значительное снижение качества жизни. Холодовой подошвенный анализ позволяет объективно и недорого оценить чувствительность к холоду у мышей, а также количественно оценить как анальгезию, так и гиперчувствительность. Мышей акклиматизируют на стеклянной пластине, а сжатую гранулу сухого льда прижимают к стеклянной поверхности под задней лапой. Задержка на вывод из охлаждающего стекла используется в качестве меры чувствительности к холоду.

Ощущение холода также важно для выживания в регионах с сезонными температурными сдвигами, и для поддержания чувствительности животные должны иметь возможность регулировать пороги своей тепловой реакции в соответствии с температурой окружающей среды. Холодный подошвенный анализ (CPA) также позволяет изучать адаптацию к изменениям температуры окружающей среды путем тестирования чувствительности мышей к холоду при температурах от 30 °C до 5 °C. Мышей акклиматизируют, как описано выше, но стеклянную пластину охлаждают до желаемой начальной температуры с помощью алюминиевых коробок (или пакетов из алюминиевой фольги), наполненных горячей водой, влажным льдом или сухим льдом. Температура пластины измеряется в центре с помощью щупа термопары Т-типа. Как только пластина достигает желаемой начальной температуры, животных тестируют, как описано выше.

Этот анализ позволяет тестировать мышей при температурах от безобидных до вредных. CPA дает однозначные и последовательные поведенческие реакции у нетравмированных мышей и может быть использован для количественной оценки как гиперчувствительности, так и анальгезии. В этом протоколе описывается, как использовать CPA для измерения гиперчувствительности к холоду, анальгезии и адаптации у мышей.

Introduction

Измерение холодной реагирования на грызунах важно для улучшения понимания потенциальных механизмов холодного чувствительности у человека в нормальных и патологических условиях. Холодная подошвенный анализа (CPA), изначально разработанная несколько лет назад ^1, предназначен для генерации воспроизводимые и однозначные мышиные поведенческих реакций на холодную стимул поставки при комнатной температуре. Более поздние усовершенствования этого анализа позволили воспроизводимое измерение холодной чувствительности в широком диапазоне температур ^2. Обе версии также разработан, чтобы быть относительно высокую пропускную способность и недорогой в использов....

Protocol

Все протоколы мыши были в соответствии с национальными институтами принципов здравоохранения и были утверждены Комитетом по исследованиях на животных из Вашингтонского университета медицины (Сент-Луис, штат Миссури) на.

1. Подготовка плиты и корпуса тестирования

1. Очистите поверхность стекла.
2. Безопасный Т-типа, термопарой нити на поверхность в середине стеклянной пластины с лабораторной ленты.
3. Поместите корпуса животного на стеклянную пластину в одну линию вдоль середины пластины.
4. Автор термопары через зонд животных корпуса центральной и вставьте в регистратор данных. Включите регистратор данных на п....

Results

Поведенческие реакции, индуцированные у мышей, начиная с 30 ° C, 23 ° C, 17 ° C, и 12 ° C высокой воспроизводимостью (4А) ^20. Для того чтобы измерить холодной стимул быть создан под задней лапы мышей анестезировали смесью кетамина / ксилазина / ацепромазина коктейль и их лапы были закреплены на стекло в верхней части Т-типа нитей термопары (фиг.4В) ^20. Стекло охлаждают или нагревают до желаемой полигоне. Хотя пластина охлаждается равномерно по длине пластины

Discussion

CPA может быть использован для оценки чувствительности к холоду и адаптации к холоду у мышей. Он обеспечивает доступный и эффективный способ измерения реакции на холод у неограниченных, акклиматизированных животных в широком диапазоне температур. Он также обеспечивает однозначную поведенческую реакцию с легко количественно определяемой и анализируемой выходной переменной. Он уже использовался для оценки изменений чувствительности к холоду, вызванных воспалением¹, нейропатической травмой¹, анальг.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Термопарный зонд Т-типа	Physitemp	IT-24p	Используется для измерения температуры поверхности стекла (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)
Стеклянная пластина	Местная стекольная компания (в Сент-Луисе, Stemmerich Inc)		Мы используем стекло pyrex (боросиликатный поплавок). В нашей лаборатории обычно используется 1/4 дюйма, но 3/16 дюйма и 1/8 дюйма также полезны
Терморегистратор данных	Extech	EA15	Термологгер для отслеживания температуры стекла (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
3 мл Шприц	BD	309657	Верхняя часть срезается, а сухой лед сжимается в шприце для создания холодного зонда
Компьютер	При использовании логгера Extech любой компьютер будет работать
Алюминиевые коробки	Вашингтонский университет в Сент-Луисе Коробки механического цеха		имеют длину 3 фута, ширину 4,5 фута и высоту 3 фута с герметичной крышкой. В одной короткой стороне каждого ящика, недалеко от дна, просверлено отверстие в 1/2 дюйма. Эти отверстия заполняются резиновыми запорными кранами, когда ящики заполнены влажным льдом или горячей водой.
Циркуляционный насос с подогревом VWR			Подойдет любая модель циркуляционного насоса с насосом
Игла 21 G	BD	305165	Точный размер иглы не важен
Ручной таймер			Подойдет любой ручной таймер
Зеркало			Подойдет любое плоское зеркало