Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Электроретинограммы Анализ визуальной ответ в данио рерио Личинки

15.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52662

⸱

16 марта 2015 г.

 ,  , 
1Department of Cell Biology and Physiology, University of North Carolina at Chapel Hill, 2Department of Ophthalmology, Duke University

В этой статье

Краткое содержание

Мы представляем метод электроретинографического (ЭРГ) анализа личинок данио-рерио с использованием методов микроманипуляций и электроретинографии. Это простой и понятный метод определения визуальной функции личинок данио-рерио in vivo.

Аннотация

Электроретинограммы (ERG) является неинвазивного электрофизиологического метода определения функции сетчатки. Путем размещения электрода на поверхности роговицы, электрической активности генерируется в ответ на света может быть измерена и использована для оценки активности клеток сетчатки в естественных условиях. Эта рукопись описывает использование ЭРГ для измерения зрительную функцию у рыбок данио. Данио рерио уже давно используется в качестве модели для позвоночных развития из-за легкости подавления генов с помощью морфолино олигонуклеотидов и фармакологической манипуляции. У 5-10 DPF, только шишки функционал в личиночной сетчатки. Таким образом, данио, в отличие от других животных, является мощным модельной системой для изучения конуса зрительной функции в живом организме. Этот протокол использует стандартный анестезии, микроманипуляция и стереомикроскопия протоколы, которые являются общими в лаборатории, которые проводят данио исследования. Изложенные методы использовать стандартный электрофизиологии эквоборудования, а также малой освещенности для направления размещения записи микроэлектрода на личиночной роговицы. Наконец, показано, как коммерчески доступный ЭРГ стимулятор / записывающее устройство первоначально разработана для использования с мышами могут быть легко адаптированы для использования с данио. ERG личинок рыбок данио обеспечивает отличную метод опробования конуса зрительную функцию у животных, которые были изменены морфолиновой инъекции олигонуклеотидов, а также новые технические методы, генома, такие как цинковый палец нуклеаз (ZFNs), активатора транскрипции-Like Effector Нуклеазы (Таленс), и Кластерные Регулярно Interspaced Короткие палиндромную повторов (CRISPR) / Cas9, все из которых привели к значительному увеличению эффективности и действенности генного таргетинга у рыбок данио. Кроме того, мы воспользуемся возможностью фармакологических агентов проникнуть данио личинки оценить молекулярные компоненты, которые способствуют фотоотклике. Этот протокол описывает установку, которая может быть изменена и используется исследователямис различных экспериментальных целей.

Введение

Электроретинограммы (ERG) является неинвазивного электрофизиологического метода, который широко используется в клинике для определения функции сетчатки у людей. Электрической активности в ответ на световой раздражитель измеряется путем помещения записи электродов на внешней поверхности роговицы. Характеристики стимула парадигмы и сигнала отклика определить нейронов сетчатки, способствующих ответ. Этот метод был адаптирован для использования с рядом моделей животных, включая мышей и данио. Типичный позвоночных ответ ERG имеет четыре основных компонента: а-волна, которая роговица-отрицательный потенциал происходит от фоторецепторов активности клеток; б-волна, роговица-положительный потенциал происходит от биполярного клеток; D-Wave, роговица-положительный потенциал интерпретируется как деятельности ВЫКЛ биполярных клеток; и C-волна, которая наступает через несколько секунд после того, как б-волны и отражает деятельность в Müller глии и в отставкеИнал пигментный эпителий 1-4. Дополнительные ссылки для понимания истории и принципы анализа ERG в организме человека и модельных животных онлайн учебник, WebVision из Университета штата Юта и текстов, таких как Принципы и практика клинического электрофизиологии Видение 4, 5.

Danio rerio (данио) уже давно выступает в качестве модели для позвоночных развития, в связи с быстрым созреванием и прозрачность, что позволяет для неинвазивной морфологического анализа систем органов, поведенческих тестов и прямом и обратном генетических экранов (для обзора см Fadool и Даулинг 6). Данио рерио личинки очень поддается генетической и фармакологической манипуляции, которые, в сочетании с их высокой плодовитостью, сделать их отличная модель животного для высокопроизводительного биологического анализа. Чем выше отношение конусам, чтобы стержней в личиночной данио - примерно 1: 1 по сравнению с мышами (~ 3% конусаS) - делают их особенно полезными при изучении функции конуса 7-9.

В сетчатки позвоночных, конусы развивать до стержней 10. Интересно, что данио конусы действуют уже в 4 денье, позволяя селективного электрофизиологического анализа конусов на этом этапе 6, 11,12. В отличие от этого, ответы эрг стержней появляются между 11 и 21 DPF 13. Таким образом, данио личинки 4-7 DPF служить функционально, как все-конуса сетчатки. Тем не менее, родной фотопического ERG ответ 4-7 DPF личинок преобладают б-волны. Применение фармакологических агентов, таких как L - (+) - 2-амино-4-фосфоно-масл ную кислоту (L-АР4), агонист для метаботропного глутамата (mGluR6) рецептора выражается ПО биполярных клеток, эффективно блокирует генерации В-волны и раскрывает изолированный рецепторный потенциал конус массу, ("волны") 14-17.

Здесь мы опишем простой и reliablе метод анализа ERG с использованием коммерчески доступного ERG оборудование, предназначенное для использования с мышами, которые были адаптированы для использования с данио личинок. Эта система может быть использована на данио личинок различной генетический фон, а также у пациентов, получавших фармакологических агентов, чтобы помочь исследователей в определении путей, которые способствуют визуальной чувствительности и световой сигнализации 16 адаптации. Экспериментальные методики, изложенные в этом протоколе поможет следователям в использовании анализа ERG, чтобы ответить на различные биологические вопросов, относящихся к видению, а также продемонстрировать строительство гибкой настройки ERG.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Животное содержание и экспериментальные протоколы были одобрены уходу и использованию Институциональные комитеты животных университета Северной Каролины в Чапел-Хилл, и отвечают всем требованиям NIH Управления лабораторных животных благосостояния и ассоциации по оценке и аккредитации лаборатории по уходу за животными International.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для получения личинок для анализа ERG, опубликованные протоколы для стандартного данио хозяйства и обслуживания были заняты 18. Личинки получают путем естественного размножения и размещены под 14 ч света / 10 ч темноты. Этот протокол был оптимизирован для личинок 5-7 дней после оплодотворения (DPF), но может быть идеально осуществляется на старшей рыбы с небольшими изменениями в процедуре. Здесь использование штамма TL дикого типа данио личинок 5 DPF.

1. Микропипетки Производство

  1. Потяните несколько микропипетки с помощью 1,5 х 0,86 мм (наружный диаметр по внутреннему диаметру) огневой полировкой боросиликатного стекла капилляров снить (температура плавления 821 ° C) и P-97 Flaming / коричневый микропипетки Puller оснащены коробка тепла нити. Используйте программу для вылепляя микропипетки, описанные в таблице 1.
  2. Проверьте каждый микропипетку под микроскопом с соответствующим координатной сетки правителя для того, чтобы советы 10-15 мкм в диаметре и имеет плавное открывание наконечник (то есть не зазубренными краями).
  3. Тщательно храните микропипетки для предотвращения повреждений наконечника и воздействия пыли. Параметры хранения включают чашки Петри с лабораторного ленты, с подкладкой из пенопласта коробки, или коммерчески доступных контейнеров для хранения микропипетка.
    Примечание: Другие микропипетки съемники и стеклянные капилляры могут быть использованы до тех пор, как правильный диаметр микропипетки и наконечник высокого качества достигается.
Давление Тепло Тянуть Скорость Время
500 560 - 30 200
500 450 - 30 200
500 410 55 40 200

Таблица 1: Программа для производства микропипетки с использованием P-97 Пламенный / коричневый микропипетки съемник, снабженную окно тепловой нити Микропипетки изготовлены с использованием 1,5 х 1,0 мм 2 (наружный диаметр по внутреннему диаметру) огневой полировкой боросиликатного стекла капилляров с нитью. (температура плавления, 821 ° С).

2. Подготовка буфера

  1. Используйте фильтруют, буфер кислородом золотых рыбок Рингера 19 в микроэлектродов капилляра и насытить поливиниловый спирт (ПВС) губку, на которую помещены личинки для экспериментов. Кроме того, использование E3 эмбрион СМИ или сбалансированный солевой раствор Хенкса.
  2. Получают раствор 10x золотых рыбок Рингера, как описано в таблице 2. доведения рН до 7,8, и стерилизуют с использованием фильтра 0,22 мкм и хранить 10x запас при 4 ° С.
  3. Создание рабочего раствора в день эксперимента путем разбавления раствора с 10-кратным Рингера до 1 раза деионизированной, дистиллированной воды. Фильтр с использованием системы фильтр 0,22 мкм. Кислородсодержащих барботажем 95% O 2/5% CO 2 газ в течение 10 минут. Крышка плотно после для того, чтобы решение остается кислородом.
NaCl 1,25 M
KCl 26 мм
CaCl 2 25 мм
MgCl 2 10 мм
глюкоза 100 мМ
HEPES 100 мМ
jove_content "> Таблица 2: Приготовление раствора 10x Золотая рыбка Рингера.

3. электроретинограммы Платформа

  1. Выполнение ЭРГ эксперименты на столе амортизирующего внутри клетки Фарадея, чтобы улучшить отношение сигнал-шум. Прикрепите пользовательские стальная платформа с таблицей анти-вибрации с помощью гайки. Разместить подвижную платформу с пластиковой вязкоупругого уретана полимер амортизирующим нижней на столе под источником света.
  2. Установите камеру с намагниченной стенде, направленных вниз, на подвижной пластиковой платформе. Установите микроманипулятор (который будет содержать записи микроэлектрода) со вторым намагниченной Встаньте справа подвижного пластиковой платформе. Убедитесь, что камера и микроманипулятор не будет беспокоить движения другого оборудования, и что они не блокируют освещение от источника света.
  3. Подключите камеру к видео монитор и установите его для просмотра глазЛичинка для размещения электрода в правильном положении.
  4. Убедитесь, что установка должным образом заземлен с медной проволокой. Чтобы проверить шум, поместите электрод сравнения и кончик записи микроэлектродом в 35 мм чашки Петри, заполненную раствором Рингера. Проверьте электрические уровень шума установки с помощью осциллографа или встроенную функцию аппарата ERG. Уровень шума должен быть не более ± 10 мкВ от базовой линии.

4. Губка Подготовка

  1. Вырезать небольшой прямоугольник сухого ПВА губка, которая будет плотно прилегать в 35 мм чашки Петри. Толщина губки не должны быть больше, чем глубина чашки. Используйте нож с чистой бритвой для резки.
  2. Сделать дополнительный разрез в губку, чтобы разместить электрод сравнения (либо мелкой разрезают вдоль по нижней части губки или бабочки сократить вертикально через одну из меньших сторон).
  3. Используйте химически стойкого маркерчтобы отметить маленькую точку на губке (где будут размещены личинка), которые могут быть использованы для позиционирования камеры.
  4. Замочите губку ПВА в растворе Рингера до насыщения. Снимите и быстро пятном на бумажное полотенце 2-3 раза. Поместите губку в чистой 35 мм чашки Петри.
  5. Установите чашку Петри, содержащую губку на пластиковой платформе, такой, что знак могут быть визуализированы с помощью камеры.

5. Подготовка электрода

Примечание: данио установка состоит из электрода в контакте с раствором, насыщенным PVA губки Рингера и записи электрода в контакте с роговицей. Электрод состоит из гранул Ag / AgCl. Электрод записи вытащил стекло микропипетка заполнена раствором Рингера и провел держателем микроэлектродов, содержащего провод Ag.

  1. Хлорида электроды путем замачивания их в 6-9 гипохлорита% натрия (отбеливатель) в течение 5 мин (запись mıcroelectrode проволоки) или 15 мин (электрод сравнения). Воздух сухой на Kimwipe в течение 5 мин.
    1. В зависимости от стиля надреза в шаге 4.2, установите Ag / AgCl осадок опорного электрода в (для вертикального разреза бабочки) или под (для мелкой разрезать вдоль на дне) губки. Прикрепите электродный провод к системе записи.
    2. С другой стороны, если установка ЭРГ имеет пространственных ограничений или есть особо прочные фотоэлектрические артефакты из электрода Ag / AgCl, соединить электрод на губку с помощью агаровой солевого мостика, чтобы переместить электрод из пути прохождения света.
  2. Прикрепите ~ 40 см подходящего размера трубы до 5 мл, не Luer замок шприцев. Заполните шприц с раствором Рингера. Держатели Микроэлектродные, обладающие порты давления, как правило, поставляются с адаптерами для размещения трубопроводов с внутренними диаметрами 1/16 ", 3/32", 1/8 "или 5/32".
  3. Заполните 1 мл нон-люэровского шприц сРаствор Рингера и, используя микро-фил, внимательно заполните держатель микроэлектродного. Не допускать образование пузырьков.
  4. Прикрепите шприц 5 мл с портом давления держателя микроэлектродов с трубкой и использовать его, чтобы убедиться, что держатель микроэлектрод полна раствор Рингера. Использование Micro-фил и 1-мл шприц, наполненный раствором Рингера, заполнить микропипетки стекла от кончика и обеспечить, чтобы не было пузырей нет.
  5. Прикрепите стекло микропипетки в держатель микроэлектродов, будьте осторожны, чтобы электродной проволоки прямой. После защиты использовать шприц 5 мл тщательно заставить раствор Рингера через микроэлектрода до небольшое количество раствора не видна на кончике. Иногда приложение давления к шприцу (если не применяется к роговице) предотвратит образование пузырьков воздуха, а также окклюзии из-за пыли или накопления соли, на кончике микропипетки.
    1. Если решение выходит в виде потока, заменить гдевушка микропипетка, как открытый, слишком большой или поврежден.
  6. Осторожно положите микроэлектрод записи в микроманипулятором и прикрепите провод к системе записи.

6. Анализ электроретинограммы

ПРИМЕЧАНИЕ: В связи с конусом доминирования личиночной сетчатки, высокое качество результатов ERG могут быть получены при подготовке к записи выполняются при низких уровнях косвенного белого света (<1 лк) или с короткими периодами (<1 мин) более высокой интенсивности ( ≤250 люкс) рабочее освещение. Короткий период адаптации к темноте по-прежнему требуется до записи (см шаг 6,7). Тем не менее, эксперименты могут быть выполнены при тусклом красном или инфракрасном свете с помощью инфракрасной чувствительная камера. Все эксперименты проводились в стерилизованным фильтрацией (0,22 мкм) системы воды из UNC данио рерио аквакультуры среды, но альтернативные носители эмбрион может быть использован.

  1. Вырежьте квадраты бумажного полотенца размером примерно 1см 2.
  2. Если измерения изолированных рецепторного потенциала конуса массы, инкубировать 3-5 личинок в воде системы с 500 мкМ (±) -2-амино-4-phosphonobutyric кислоты (APB) в течение 5 мин.
    Примечание: В то время как АПБ представляет собой рацемическую смесь активного (L) и неактивные (R) формы AP4, это же эффективным, как L-AP4 и дешевле.
  3. Обезболить 3-5 личинок в воде системы с 0,02% (вес / объем) до Tricaine отвечает, около 1-2 мин.
  4. Используйте пипетку Пастера и пипетки насос тщательно передачи индивидуальный личинок на бумажные полотенца квадратов под рассекает стереоскоп, используя минимальное освещение (≤250 люкс для <1 мин). Проверьте положение каждого личинки и выбрать кандидата, который является спинной стороной вверх с unoccluded глаза.
    1. При длительном записи (> 30 мин), держать личинки влажной остеклением тело до, но не включая голову 3% метилцеллюлозы с помощью тонкой верблюжьей шерсти.
  5. Использование щипцов, передача бумажных полотенец Squarе с личинки на влажной ПВА губки.
    1. Для расширенных записей (> 30 мин), применяются непрерывный поток воды, насыщенной 100% O 2 газа над личинки барботированием газа через airstone в боковой рукоятки колбу, содержащую дистиллированную воду. Расположите трубку из колбы боковой рычаг, который передает увлажненного кислорода вблизи головы личинки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Шаг 6.4.1 и шаг 6.5.1 продлит жизнь рыбы 16.
  6. При минимальных освещения, используйте микроманипулятора и камеру для позиционирования зонда микроэлектродного в середине между носовой и хвостовой концы глаза и слегка нажмите на спинной границе роговицы.
    ПРИМЕЧАНИЕ: смещениям кончика электрода к далеко дистальных отделах роговицы может привести к ЭРГ сигналов обратной полярности.
  7. Разрешить личинка до темно-адаптации в течение 5-10 мин.
  8. Запись тест флэш ответы на свете, предоставленного из светодиодного источника света или оптического стимулятор, используя Avaíэтикетку стимулирование и записывающие устройства. Отрегулируйте параметры протоколов, такие как интенсивность вспышки, длиной вспышка, вспышка цвета, интенсивности фона и цвета и параметры фильтра, чтобы соответствовать эксперимент.
  9. После завершения эксперимента, усыпить личинки в соответствии с директивами AVMA / IACUC.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Как правило, эрг, записанные на рыбок данио личинок 5 DPF, так как ряд исследований опубликованы ЭРГ записи на данном этапе 9, 16,20. Личиночные ответы были измерены в соответствии адаптируются к темноте условиях без фоновой подсветки с использованием 20 мс стимул белый светодиод. Мы использовали имеющийся в продаже ERG систему, состоящую из Ganzfeld света стимулятора и компьютерной контроллера / регистратора. Стимулятор использует жестко контролируется импульсная модуляция (ШИМ) системы собственностью импуль...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом протоколе простая процедура ERG записи личинок рыбок данио подробно. Эта процедура позволяет быстро и всестороннего анализа визуального function.There несколько важных шагов в течение всей процедуры, которые должны храниться в памяти. Личинки данио должны быть здоровыми, прежде чем эксперимент, чтобы предотвратить смерть во время возможных медикаментозного лечения и обеспечить длительную средств к существованию во время записи ЭРГ. Кроме того, важно, что личинки используют в экспериментах тесно соответствующего в...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

Мы благодарим членов предприятия UNC Zebrafish Aquaculture за обслуживание рыбок данио. Мы также хотели бы поблагодарить ООО «Диагнозис» за помощь в настройке аппарата ЭРГ. Кроме того, выражаем благодарность доктору Порции Маккой и лаборатории доктора Бена Филпота за помощь в применении электрофизиологических методов. Мы также хотим поблагодарить Лиззи Гриффитс за ее иллюстрацию личинки рыбки данио. Эта работа была поддержана наградами Национальных институтов здравоохранения F32 EY022279 (для J.D.C) и R21 EY019758 (для E.R.W).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Клетка Фарадея80/20 Incна заказИндивидуально разработанный алюминиевый "Промышленный конструктор" для каркаса клетки
ПВА губкаAmazonB000ZOWG1CОбеспечивает мягкую, влажную платформу для размещения личинок рыбок данио
150 мл Стерильные фильтрующие системыCorning431154Фильтрующие решения для предотвращения блокировки микропипеток мелкими члениками
Espion E2ООО «Диагносис»контактнаяМодульная электрофизиологическая система, способная генерировать визуальные стимулы для любого стимулятора и цифровую запись и анализ реакций с помощью собственного программного обеспечения, подробнее на http://www.diagnosysllc.com
ООО «КолодомныйДиагностосис»Контактный светостимулятор с RGB LED и ксеноновыми источниками света для Ganzfeld ERG, больше информации на http://www.diagnosysllc.com
МикроманипуляторDrummond3-000-024-RУдержание и позиционирование записывающего микроэлектрода
Магнитная кольцевая подставкаDrummond3-000-025-MBУдержание и позиционирование камеры и рефренсного электрода
Удлинителивыводов Grass TechnologiesF-LXЗапасные подводящие кабели 1,5 мм для подключения электродов
Наружный контакт к внутренней резьбе SAFELEAD Адаптер GrassTechnologiesDF-215/10Подключение контактов 2 мм к 1,5 контактам изголовья кровати
Рамка оконной сетки (металлическая) и шлицыLowes или Home DepotразличныеДля крепления медной сетки к каркасу клетки Фарадея
Фильтры Steriflip 50 млMilliporeSCGP00525Фильтрующие решения для предотвращения блокировки мелких шарнирных микропипеток Адаптер
BNC Monoprice4127Подключение камеры к кабелю BNC
BNC кабельMonoprice626Подключение камеры к видеоадаптеру
Объектив камерыNavitar1582232Визуализация расположения записывающего микроэлектрода на личиночной роговице
Сопряжение камерыNavitar1501149Визуализация позиционирования записывающего микроэлектрода на личиночной роговице
Luna BNC в VGA + HDMI ConverterSewellSW-29297-PROBNC-VGA адаптер, позволяющий проецировать изображение с камеры на монитор компьютера
APBSigmaA1910mGluR6 агонист, блокирует b-волну с возможностью анализа изолированного конусного рецепторного потенциала
массы боросиликатного стеклаSutterBF-150-86-10Боросиликатное стекло с огненной полировкой (температура = 821&d; В) с нитью накала и размерами 1,5 мм х 0,86 мм (наружный диаметр по внутреннему диаметру)
P97 Огненный/коричневый пуллерSutterP97Для вытягивания стеклянных микропипеток
Лист сорботанаThorlabsSB12AСинтетический вязкоэластичный уретановый полимер, помещенный под пассивные изолирующие крепления и платформу ERG для поглощения ударов и предотвращения скольжения, может быть разрезан по размеру
Макетная платаThorlabsB2436FВиброизоляционная пластина для стимулятора ERG и образца
данио-рериоПассивные изолирующие крепленияThorlabsPWA074Обеспечивает виброизоляцию макетной платы
Медная сеткаTWP022X022C0150W36TДля линии Фарадеевского клеточного
насоса для пипетокVWR53502-233Используется с пипетками Пастера для бережного переноса личинок данио-рерио
Пастеровские пипеткиVWR14672-608Используются с пипеточным насосом для бережного переноса личинок данио-рерио
КамераWatecWAT-902BВизуализация расположения записывающего микроэлектрода на личиночной роговице
Трикаин (MS-222)Western ChemicalTricaine-SАнестетик фармацевтического класса,
Micro-filWPIMF28G-5Заполняющий держатель микроэлектродов и микроэлектродное стекло
Держатель микроэлектродовWPIMEH2SW15Удерживает стеклянный микроэлектрод, подключается к оборудованию ERG
Электрод сравненияWPIDRIREF-5SHОсторожно отломайте последний сантиметр корпуса для слива электролита и обнажения спеченного электрода Ag/AgCl
Pellet Электрод сравнения (альтернатива)WPIEP1Альтернатива DRIREF-5SH. Ag/AgCl электрод, который должен быть подключен/припаян к соединительному проводу
Малошумящий кабель для держателя микроэлектродовWPI13620Подключение держателя записывающего микроэлектрода к адаптеру/изголовью кровати

Ссылки

  1. Dowling, J. E. The retina: an approachable part of the brain. , Harvard University Press. Cambridge, MA. (1987).
  2. Makhankov, Y. V., Rinner, O., Neuhauss, S. C. An inexpensive device for non-invasive electroretinography in small aquatic vertebrates. J Neurosci. Methods. 135, 205-210 (2004).
  3. Wu, J., Peachey, N. S., Marmorstein, A. D. Light-evoked responses of the mouse retinal pigment epithelium. J Neurophysiol. 91, 1134-1142 (2004).
  4. Heckenlively, J. R., Arden, G. B. Principles and Practice of Clinical Electrophysiology of Vision. , 2nd edn, The MIT Press. Cambridge, MA. (2006).
  5. Perlman, I. Webvision: The Organization of the Retina and Visual System. Kolb, H., Nelson, R., Fernandez, E., Jones, B. , (1995).
  6. Fadool, J. M., Dowling, J. E. Zebrafish: a model system for the study of eye genetics. ProgRetin. Eye Res. 27, 89-110 (2008).
  7. Doerre, G., Malicki, J. Genetic analysis of photoreceptor cell development in the zebrafish retina. Mech. Dev. 110, 125-138 (2002).
  8. Brockerhoff, S. E., et al. Light stimulates a transducin-independent increase of cytoplasmic Ca2+ and suppression of current in cones from the zebrafish mutant nof. J Neurosci. 23, 470-480 (2003).
  9. Rinner, O., Makhankov, Y. V., Biehlmaier, O., Neuhauss, S. C. Knockdown of cone-specific kinase GRK7 in larval zebrafish leads to impaired cone response recovery and delayed dark adaptation. Neuron. 47, 231-242 (2005).
  10. Harada, T., Harada, C., Parada, L. F. Molecular regulation of visual system development: more than meets the eye. Genes Dev. 21, 367-378 (2007).
  11. Branchek, T. The development of photoreceptors in the zebrafish, brachydaniorerio. II. Function. J Comp Neurol. 224, 116-122 (1984).
  12. Schmitt, E. A., Dowling, J. E. Early retinal development in the zebrafish, Daniorerio: light and electron microscopic analyses. J Comp Neurol. 404, 515-536 (1999).
  13. Bilotta, J., Saszik, S., Sutherland, S. E. Rod contributions to the electroretinogram of the dark-adapted developing zebrafish. Dev Dyn. 222, 564-570 (2001).
  14. Wong, K. Y., Adolph, A. R., Dowling, J. E. Retinal bipolar cell input mechanisms in giant danio. I. Electroretinographic analysis. J Neurophysiol. 93, 84-93 (2005).
  15. Nelson, R. F., Singla, N. A spectral model for signal elements isolated from zebrafish photopicelectroretinogram. Vis Neurosci. 26, 349-363 (2009).
  16. Korenbrot, J. I., Mehta, M., Tserentsoodol, N., Postlethwait, J. H., Rebrik, T. I. EML1 (CNG-modulin) controls light sensitivity in darkness and under continuous illumination in zebrafish retinal cone photoreceptors. J Neurosci. 33, 17763-17776 (2013).
  17. Gurevich, L., Slaughter, M. M. Comparison of the waveforms of the ON bipolar neuron and the b-wave of the electroretinogram. Vision Res. 33, 2431-2435 (1993).
  18. Westerfield, M. The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Daniorerio). , 5th edn, University of Oregon Press. Portland, OR. (2007).
  19. Kim, D. Y., Jung, C. S. Gap junction contributions to the goldfish electroretinogram at the photopic illumination level. Korean J PhysiolPharmacol. 16, 219-224 (2012).
  20. Brockerhoff, S. E., Dowling, J. E., Hurley, J. B. Zebrafish retinal mutants. Vision Res. 38, 1335-1339 (1998).
  21. Naka, K. I., Rushton, W. A. S-potentials from colour units in the retina of fish (Cyprinidae). J Physiol. 185, 536-555 (1966).
  22. Naka, K. I., Rushton, W. A. S-potentials from luminosity units in the retina of fish (Cyprinidae). J Physiol. 185, 587-599 (1966).
  23. Shao, X. M., Feldman, J. L. Micro-agar salt bridge in patch-clamp electrode holder stabilizes electrode potentials. J Neurosci. Methods. 159, 108-115 (2007).
  24. Brockerhoff, S. E., et al. A behavioral screen for isolating zebrafish mutants with visual system defects. ProcNatlAcadSci. U S A. 92, 10545-10549 (1995).
  25. Fleisch, V. C., Jametti, T., Neuhauss, S. C. Electroretinogram (ERG) Measurements in Larval Zebrafish. CSH protocols. , (2008).
  26. Seeliger, M. W., Rilk, A., Neuhauss, S. C. Ganzfeld ERG in zebrafish larvae. Doc Ophthalmol. 104, 57-68 (2002).
  27. Kainz, P. M., Adolph, A. R., Wong, K. Y., Dowling, J. E. Lazy eyes zebrafish mutation affects Müller glial cells, compromising photoreceptor function and causing partial blindness. J Comp Neurol. 463, 265-280 (2003).
  28. Lewis, A., et al. Celsr3 is required for normal development of GABA circuits in the inner retina. PLoS. genetics. 7, e1002239(2011).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Электроретинограммы Анализ визуальной ответ в данио рерио Личинки
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.