Простые анализы для измерения чувствительности к этанолу и быстрой толерантности у дрозофил облегчают использование этого модельного организма для исследования этих важных поведенческих свойств, связанных с этанолом. В данной работе описывается относительно простой, масштабируемый анализ для измерения чувствительности к этанолу и быстрой переносимости у мух.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Недорогой, масштабируемая Поведенческая Анализ для измерения этанола седации Чувствительность и быстрый толерантности в
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Употребление алкоголя расстройства (AUD) является серьезной проблемой здравоохранения. Несмотря на большое наследственный компонент к AUD, несколько генов были однозначно вовлечены в их этиологии. Плодовая муха, дрозофилы, является мощная модель для изучения молекулярно-генетических механизмов, лежащих в основе поведения, связанных с алкоголем, и поэтому имеет большие перспективы для выявления и понимания функции генов, которые влияют на AUD. Использование модели Drosophila для этих типов исследований зависит от наличия анализов, которые надежно измерить поведенческих ответов на этанол. Этот отчет описывает анализ подходящий для оценки чувствительности этанола и быстрый допуск в мух. Чувствительность Этанол измеряется в данном исследовании зависит от объема и концентрации этанола, используемого, разнообразие сообщалось ранее генетических манипуляций, а также время, в течение мухи размещены без пищи непосредственно перед тестированием. В отличие от этого, этанола сensitivity измеряется в этом анализе не зависит от энергичности обработки зольной, пола мух и добавок в ростовой среде с антибиотиками или живых дрожжей. Три различные методы количественного чувствительности этанола описаны, все это ведет к существенно неразличимые результаты чувствительности этанола. Масштабируемая природа этого анализа, в сочетании с его общей простоты в настройке и относительно низкий расход, сделать его пригодным для малых и крупных генетического анализа чувствительности этанола и быстрого толерантности у дрозофилы.
Введение
Употребление алкоголя расстройства (AUD) является огромной проблемой здравоохранения во всем мире (обзор в 1). Хотя механизмы приводные развитие AUD сложны, эти расстройства имеют большое генетический компонент (например, 2). Большой наследуемость AUD и консервативных поведенческих реакций на этанол во многих видов (рассмотренных в 3,4), породили сильный интерес к использованию генетических модельных организмов проверки причастности конкретных генов в этаноле, связанных с поведением по отношению к лучшему пониманию молекулярных основ AUD. Плодовая муха, дрозофилы, стала ведущей моделью организма для изучения молекуля....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. День перед анализом
- Сбор мух в свежих флаконах продовольствие групп 11 (разового секса) под неглубоким (1-5 мин) CO 2.
- Разрешить мух для восстановления O / N в пищевых флаконах экологически контролируемом помещении (обычно 25 ° C, 60% относительной влажности, 12 ч цикл свет / темнота).
- Подготовка этанольного раствора (ов) путем разбавления чистого (100%) этилового спирта в очищенной (≥18 МОм) воды до конечной концентрации (ы), подходящей для запланированного эксперимента. Разрешить решение (ы), чтобы вернуться к РТ O / N.
Примечание: Разбавление этанола является экзотермической.
2. Д....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Необработанные данные из этого анализа этанола седации являются количество мух, которые седатированы в зависимости от времени экспозиции паров этанола. Необработанные данные преобразуются в процент активных мух, как функции времени (первичных данных, 1А, В, D - F). Чувствительность к этанолу седативного из первичных данных может быть количественно, как Торможение времени 50 (ST50), время, необходимое для 50% от мух, чтобы стать седативные или AEA под кривой (AUC), с помощью интерполяции.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Прямые анализы, что воспроизводимо количественно значимых фенотипов имеют большое значение для анализа поведения. Работа, описанная здесь рассматривается ряд практических аспектов в анализе для измерения чувствительности этанол седации и быстрый допуск у дрозофилы. Хотя это и не цель этой работы, поведенческие анализы способствует поддержанию окружающей среды и генетический фон константу для испытуемых в исследовании. Кроме того, сравнение, как правило, следует проводить различие между группами мух, выращенных .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Эти исследования были поддержаны грантами от Национального института здравоохранения, Национального института алкоголизма и злоупотребления алкоголем для M.G. (P20AA017828, R01AA020634, P50 AA022537). Авторы благодарят Джилл Беттингер за полезные обсуждения и Жаклин Делойт за техническую помощь.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| флаконы для пищевых продуктов | VWR | 89092-772 | узкие |
| флуги | Genesee/flystuff.com | 49-102 | узкая |
| силиконовая пробка | Fisher Scientific | 09-704-1l | #4 |
| этанол | Pharmaco-Aaper | 111000200 | 200 proof |
Ссылки
- Rehm, J., et al. Global burden of disease and injury and economic cost attributable to alcohol use and alcohol-use disorders. Lancet. 373, 2223-2233 (2009).
- Prescott, C. A., Kendler, K. S.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
