Это видео знакомит с процедурами подготовки, записи и анализа источников ЭЭГ высокого разрешения на крысах с седативными препаратами с особой доклинической моделью фокальной эпилепсии в неинвазивных условиях.
Методическая статья
Это видео знакомит с процедурами подготовки, записи и анализа источников ЭЭГ высокого разрешения на крысах с седативными препаратами с особой доклинической моделью фокальной эпилепсии в неинвазивных условиях.
Электроэнцефалограмма (ЭЭГ) традиционно используется для определения того, какие области мозга являются наиболее вероятными кандидатами на резекцию у пациентов с фокальной эпилепсией. Эта методология основана на предположении, что приступы происходят из тех же областей мозга, из которых возникают межприступные эпилептиформные разряды (СВУ). Доклинические модели очень полезны для поиска корреляций между местами СВУ и фактическими областями, лежащими в основе инициации припадков при фокальной эпилепсии. Крысы широко использовались в доклинических исследованиях эпилепсии1; Следовательно, существует большое разнообразие моделей фокальной эпилепсии у этого конкретного вида. Тем не менее, записать многоканальную ЭЭГ и выполнить визуализацию источника мозга у такого маленького животного сложно. Чтобы решить эту проблему, мы объединили запатентованную технологию получения 32-канальных записей ЭЭГ от грызунов2 и вероятностный атлас МРТ анатомических структур мозга у крыс Wistar для выполнения визуализации источника мозга. В этом видео мы знакомим с процедурами получения многоканальной ЭЭГ от крыс линии Wistar с фокальной корковой дисплазией, а также описываем шаги как для определения модели объемного проводника из атласа МРТ, так и для однозначного определения IED. Наконец, мы проверяем всю методологию, получая исходные изображения СВУ в мозге и сравнивая их с изображениями, полученными в разные временные рамки во время начала припадка.
Было показано, что межприступные эпилептиформные разряды (ИЭУ), наблюдаемые по данным ЭЭГ, являются полезными маркерами эпилептогенеза у пациентов с фокальной эпилепсией3. Области внутри мозга, из которых происходят эти СВУ, называемые раздражающими зонами, на практике могут быть локализованы на основе записей ЭЭГ. Доклинические модели необходимы для поиска корреляций между этими раздражающими зонами и фактическими областями, лежащими в основе инициации припадка. Тем не менее, запись ЭЭГ у мелких животных является сложной задачей из-за небольшой площади поверхности головы по сравнению с кожей головы человека. Несмотря на то, что инвазивные методы хронической регистрации у крыс могут быть использованы5, 6, в настоящее время не доступны методы получения традиционных записей ЭЭГ на грызунах в острых условиях без необходимости анестезии.
Чтобы решить эту проблему, мы применяем запатентованный мини-колпачокЭЭГ 2, который позволяет нам записывать 32-канальные данные ЭЭГ от грызунов неинвазивным способом. В этом исследовании мы также предоставляем доказательства необходимости использования анальгетика для сохранения частоты СВУ. Таким образом, хотя фиксация мини-колпачка ЭЭГ проводилась под действием изофлурана, записи ЭЭГ у крыс были получены только под седацией (дексдомитором)7. Предложенный в данном исследовании метод может быть использован на любой доклинической модели фокальной эпилепсии у крыс. Чтобы проиллюстрировать возможности этой методологии, мы применяем ее для понимания корреляции между зонами раздражения и начала судорог при фокальной корковой дисплазии (ФКД). Для этого мы используем модель FCD8 с двойным попаданием на крысах Wistar.
Для проведения анализа источника мозга требуется: а) точно извлечь ИЭУ из исходных данных ЭЭГ и б) получить модель объемного проводника для отдельной головы животного. Для создания практической модели объемного проводника мы используем МРТ-атлас in vivo, содержащий усредненные изображения интенсивности/формы и полученный путем нелинейной регистрации T2-изображений 31 крысыWistar9. Прямая модель для генерируемого объемного проводника была рассчитана методом граничных элементов (МГЭ)10. Как и в случае с людьми, были обнаружены два типичных типа СВУ (острые волны и спайки) и подклассифицированы в различные кластеры с помощью интеллектуального извлечения признаков, выбора признаков и процессаклассификации. Эти подклассифицированные сигналы используются для оценки локализации источников мозга, связанных с различными типами раздражающих зон. Мы представляем этапы анализа источников с помощью известного общедоступного программного обеспечения под названием Brainstorm12. Локализация источника ЭЭГ для каждого подтипа ИЭГ и временные рамки начала припадка были выполнены с помощью стандартизированной электромагнитной томографии мозга с низким разрешением (sLORETA)13, которая доступна в Brainstorm.
Заявление по этике: Все эксперименты проводятся следующие политики, установленных в учреждениях и использование комитета животных (IACUC) в Международном университете Флориды (IACUC 13-004) по.
1. ЭЭГ Записи

Рисунок 1. картина мини-колпачком ЭЭГ, размещенной на определенной крысы.
Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
2. Брейн Сорс изображений









После того, как все процедуры правильно завершена, по оценкам источников могут быть визуализированы на поверхности мозга доклинической модели. Рисунок 5 показывает предполагаемые источники из одного конкретного подтипа шипов (вверху) и острых волн (внизу) от самодельных взрывных устройств. Кроме того, рисунок 6 дисплеев, как меняется распределение источник в последовательных временных рамок во время создания захват. Эти результаты подтверждают возможность предлагаемых методик для записи в высоком разрешении на ЭЭГ крыс с фокальной эпилепсией и проводить анализ исходного, используя записанные ЭЭГ.

Рисунок 5. Расчетная места источника мозг самодельных взрывных устройств в отношении различных кластеров в шипов (вверху) и острых волн (нижней). () Временной ряд, (Б) ЭЭГ топографии, и (C) корковых тока кислыйCES. Оценка выполняется в определенный момент времени, помеченный красной вертикальной линией (А).
Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры. 
Рисунок 6. Предполагаемые источники мозга во время приступа. В моменты времени обозначены красными вертикальными линиями.
Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Новая методика неинвазивного запись многоканального ЭЭГ в определенном доклинической модели фокальной эпилепсии описаны. Сведения для процедур регистрации и анализа, с конкретными экспериментальными советы, которые предоставляются. Были ключевые факторы, чтобы рассмотреть достижения успешных результатов. Во-первых, для ЭЭГ, получения сигналов высокого качества имеет важное значение. Правильное вязкость пасты ЭЭГ должны быть применены к каждому электроду во время подготовки мини-колпачка, головы и ушей волосы крысы должны быть полностью удалены во время бритья. Сопротивление проверка самый важный шаг, чтобы подтвердить качество записи ЭЭГ. Во-вторых, для получения изображения источника мозг, создавая подходящую модель объем проводника имеет решающее значение. Каждая поверхность должна быть совместно зарегистрированы. Кроме того, генерируемые электродов позиции должны иметь минимальную ошибку расстояние от реальных местах электродов на кожу головы крысы.
Даже если эта рукопись представляет источникпроцедуры анализа с использованием штурм 12, они могут быть проведены с использованием программного обеспечения другие открытые 16,17 и 18,19 коммерческие продукты. Кроме того, помимо sLORETA 13, другие обратные решения, такие как несколько моделей дипольных и Beamformer могут быть применены 4.
Одно ограничение этого подхода состоит в том, что анализ поведения не может быть проведено так ЭЭГ осуществляется под наркозом. Тем не менее, по сравнению с другими методами ЭЭГ у крыс 5,6, этот подход является неинвазивным.
Наши предварительные результаты подтверждают важность для точной классификации IED маркеров из ЭЭГ для определения раздражающие зон в крыс с фокальной эпилепсией, а также для оценки их отношения с основных механизмов для изъятия начала 11. Кроме того, было показано, что источником ЭЭГ локализации для таких конкретных СВУ показали хорошее соответствие с соответственноective BOLD активации и деактивации области 20.
Наше исследование будет стимулировать использование доклинических моделей для оценки стратегий кровати скамьи кровать, разработанные биомедицинских инженеров. Например, СВУ добыча ныне осуществляется в больницах вручную, что требовало значительного усилия человека. Методология, предложенная в данном исследовании делает это автоматически. Мы предполагаем, что использование этой методологии будет производить аналогичные результаты при применении у пациентов с ГТД. Мы готовим IRB протоколы для оценки этого и других аспектов методологии в человеческом данных.
Кроме того, использование доклинических моделях поможет нам понять возможности и ограничения локализации источника ЭЭГ при эпилепсии 21. Точная оценка источников, лежащих в основе мозга эпилептогенез имеет решающее значение для терапевтических стратегий и хирургического планирования. Кроме того, наличие стандартной платформы для регистрации ЭЭГ у крыс будет полезеноценка эффективности нескольких анти-эпилептических препаратов в доклинических испытаниях. Это первое исследование, в котором эпилептические крыс записываются неинвазивного под наркозом, который откроет новые двери для оценки биомаркеров ЭЭГ эпилепсии. Тем не менее, все методики представлены в данном исследовании продолжается до других экспериментальных условиях и мозговых нарушений. ЭЭГ мини-крышка также может быть использован в других видах грызуна.
В прошлом, лапка стимуляция парадигма у крыс Вистар были использованы для оценки качества и воспроизводимости данных, записанных с ЭЭГ мини-колпачка 2. Кроме того, валидации для реконструкции источника мозга были выполнены из черепа ЭЭГ высокого разрешения одновременно записанной с ламинарным локальных потенциалов поля от крыс Вистар под усов стимуляции парадигмы 22. Эта методика была разработана для крыс линии Вистар, из-за существования атлас МРТ для этой конкретной крыс споезд. Тем не менее, он может быть применен к другим типам грызунов с их стандартным форматом атласа включая мышь 23, Sprague-Dawley крыс через 24 и Paxinos и Watson крыс 25. Кроме того, основные процедуры предлагаемой методики могут быть использованы в любых грызунов доклинических моделей, для которых ЭЭГ является важным модальности. Тем не менее, многие аспекты этой методики, особенно при эпилепсии, особенно тех, которые связаны с ЭЭГ обработки (обнаружения и классификации СВУ). Кроме того, исследователи должны быть осведомлены о надлежащих лекарственных препаратов, используемых для седации в разных случаях. Использование ИФ и dexdomitor в нашем исследовании была тщательно рассмотрены в связи с пониженной воздействия на СВУ. Относительно ЭЭГ, в случае мыши, относительно небольшой площади поверхности кожи головы бы уменьшить количество каналов существенно.
Нет конфликта интересов объявлены.
Авторы хотели бы поблагодарить Педро А. Вальдес Эрнандес, Франсуа Tadel и Ллойд Смит за ценные советы и плодотворного обсуждения. Мы также благодарим Рафаэль Торрес для корректуры.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Компьютер сбора данных | Hewlett-Packard | Z210 Рабочая станция | |
| Дексдомитор | Orion Pharma | 6295000 | Дексмедетомидина гидрохлорид |
| Программное обеспечение для анализа ЭЭГ | The Mathworks Inc. | MATLAB R2011b | |
| Brainstorm Sylvain et al. 2001 | |||
| OpenMEEG | Gramfort et al. 2010 | ||
| Стример данных ЭЭГ | Tucker-Davis Technologies | RS4 Стример | |
| ЭЭГ электродная паста | Biotach | YGB 103 | |
| Предусилитель ЭЭГ | BioSemi | Active Two | |
| Brain Продукты | BrainAmp | ||
| Tucker-Davis Technologies | PZ3 Низкоимпедансный усилитель | ||
| Программное обеспечение для записи ЭЭГ | BioSemi | ActiView | |
| Программное обеспечение для записи ЭЭГ | Tucker-Davis Technologies | OpenEx - OpenDeveloper | |
| Разъем для ЭЭГ SCSI BioSemi | Active Два разъема | ||
| Продукты для мозга | D-sub Connector | ||
| Процессор ЭЭГ | Tucker-Davis Technologies | RZ2 BioAmp Процессор | |
| Tucker-Davis Technologies | Zif-Clif Digital Headstage | ||
| ЭЭГ высокого разрешения Mini-cap | Cortech Solutions | DA-AR-ELRCS32 | Заявка на патент США No 13/641,834 |
| Изофлуран, USP | VedcoPiramal Healthcare | NDC 66794-013-25 | |
| Изопропиловый спирт | Aqua Solutions | 3112213 | 90% v/v раствор |
| Лубрикант Офтальмологическая мазь | Rugby | NDC 0536-6550-91 | Стерильный |
| NaCl | Abbott 2B8203 | Vaterinary 0,9% Хрорид натрия для инъекций USP | |
| Программное обеспечение для регистрации физиологии | ADInstruments | LabChart 7.0 | |
| Система | регистрации физиологииADInstruments | PowerLab 8/35 | |
| Шприц | Monoject | 200555 | 12cc |
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение