Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Внутримышечных инъекций по плитам двигателя End: Минимально инвазивная подход к Shuttle TRACERS Непосредственно в моторные нейроны

12.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52846

⸱

13 июля 2015 г.

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Эффективность внутримышечного поглощения и ретроградного транспорта молекул к соответствующим моторным нейронам зависит от расположения мест инъекций относительно моторных концевых пластин (MEP). В этой статье мы описываем, как расположить MEP на скелетных мышцах для оптимизации ретроградного транспорта индикаторов в моторные нейроны.

Аннотация

Болезни, влияющие на целостность спинного мозга двигательных нейронов являются одними из самых изнурительных неврологических заболеваний. За последние десятилетия, разработка нескольких моделей животных этих расстройств нервно-мышечных предоставил научное сообщество с различных терапевтических сценариев, направленных на затягивание или обратить вспять прогрессирование этих условиях. Воспользовавшись ретроградной техники нейронов, один из этих подходов в том, чтобы предназначаться скелетные мышцы для того, чтобы челночных терапевтических генов в соответствующие спинного мозга двигательные нейроны. Хотя когда-то перспективным, успех таких генов подхода доставка была затруднена суб-оптимальным количеством преобразованных двигательных нейронов, что до сих пор, показанных на выход. Со стороны двигателя пластины (MEPS) являются узкоспециализированными области на скелетной мускулатуры, которые находятся в непосредственном контакте с синаптической спинного мозга α моторных нейронов. В связи с этим, важно отметить, что до сих пор усилия, чтобы ретроградноГены передачи в моторных нейронов были сделаны без ссылки на положения региона MEP в целевых мышцах. Здесь мы опишем простой протокол 1), чтобы показать точное местоположение Европарламента на поверхности скелетных мышц и 2) использовать эту информацию, чтобы направлять внутримышечной доставки и последующего оптимального ретроградного транспорта ретроградных индикаторов в моторных нейронов. Мы надеемся, что использовать результаты этих экспериментов розыска в дальнейших исследованиях в расследовании ретроградного транспорта терапевтических генов в нейронах спинного мозга двигательных через адресности Европарламента.

Введение

Потеря контроля добровольного движения, что приводит от неврологических заболеваний, таких как болезни двигательных нейронов и spinal-, а также мышечной атрофии Дюшенна является изнурительных условие, которое имеет высокую и длительную влияние на каждый день жизни пострадавших лиц. За последнее десятилетие, научно-исследовательские усилия, направленные, чтобы остановить или, по крайней мере задержать пагубные последствия этих нервно-мышечными заболеваниями была приоритетом для многих клиницистов и ученых по всему миру. В связи с этим, в последнее поколение животных моделях, которые имитируют эти нервно-мышечных заболеваний играет важную роль в получении фундаментальн....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все экспериментальные процедуры, описанные здесь, выполнил уход и комитет по этике животных в Австралии и UNSW были проведены в соответствии с Национальным здравоохранения и Совета по медицинским исследованиям Австралии правил экспериментов на животных. Все процедуры в этом протоколе должны быть выполнены в соответствии с требованиями соответствующего ухода за животными и комитет по этике.

1. Ацетилхолинэстераза Гистохимический Окрашивание

  1. Подготовка ацетилхолинэстеразы реакционной смеси
    1. Добавить 290 мг иодида Acetylthiocholine к 200 мл 0,1 М фосфатном буфере (PB). Смешайте с помощью магнитной мешалки при 900 оборотах ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Ацетилхолинэстеразы гистохимические окрашивание показывает расположение конечных двигателя пластин по ширине мышц. Рисунок 1 иллюстрирует результаты такого окрашивания выполненной по целому крыс передней конечности. Предлагается оптимизировать концентрацию раствора сульфида аммония (например., 5-7% вместо 10%), а также время образец погружают в раствор при неспецифическое окрашивание фона на мышечных волокон слишком чрезмерным. Рисунок 2 иллюстрирует колонки меченых мотонейроно.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Внутримышечное таргетинг и последующее ретроградная передача терапевтических трансгенов в соответствующих α моторных нейронов для экспериментального лечения нервно-мышечной состоянии не новая стратегия. Например, этот способ доставки был использован для задержки нервно-мышечную дегенерацию на различных этапах прогрессии БАС в SOD1 мышей и крыс 1,9-12, а также у мышей с SMA 13. Несмотря на то, перспективным, эффективность этих сценариев генной терапии была ограничена. В связи с этим, мы полагаем, чт.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальной медицинской и медицинского исследовательского центра (NHMRC) проекта гранта РМ

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Флюоро-ГолдФлуорохром, ОООНилРазведенный до 5%
Drummond PCR Micropipets 1-10 &микро; lDrummond Scientific5-000-1001-X10в сочетании с поршнями
Ацетилтиохолин ЙодидSigma Life ScienceA5751-25G
Сульфат меди (II) СульфатСигма-Олдрич61230-500G-F
Ткань-Тек O.C.T СоединениеСакура Finetek25608-930
ГлицинAjax Finechem1083-500G
Декстран, тетраметилродамин и биотинLife TechnologiesD-3312дилютированные в дистиллированной воде
IsothesiaProvetISOF001000 мг/г Изофлурана ингаляционный пар
Autoclip 9 мм Wound ClipsTexas Scientific Instruments, LLC205016
Lethabarb Enthanasia InjectionVirbac (Australia) Pty Ltd.
Раствор формальдегидаAjax FinechemA809-2.5L PL
SuperFrost Plus стеклянные стеклаMenzel-GlaserJ1800AMNZ
Сульфид аммонияSigma-AldrichA1952Разведенный до 10%
Маркаин Спинал 0.5% (Бупивакаина гидрохлоридAstrazencaРазбавленный до 0.25%
LETHA450)

Ссылки

  1. Kaspar, B. K. Retrograde Viral Delivery of IGF-1 Prolongs Survival in a Mouse ALS Model. Science. 301 (5634), (2003).
  2. Ishiyama, T., Okada, R., Nishibe, H., Mitsumoto, H., Nakayama, C. Riluzole slows the progression of neuromuscular dysfunction in the ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Внутримышечная инъекцияретроградный транспортгистохимия ацетилхолинэстеразыфлуоресцентная микроскопиямотонейроны спинного мозганейроанатомические трейсерытаргетинг на скелетные мышцыдоставка средств генной терапиинервно-мышечные заболевания