Методическая статья

Одновременный Экс естественных условиях Функциональное тестирование двух сетчатки по В естественных условиях Система электроретинограммы

DOI:

10.3791/52855

⸱

6 мая 2015 г.

 , 
1Department of Ophthalmology and Visual Sciences, Washington University in St. Louis

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ex vivo ERG может быть использован для записи электрической активности клеток сетчатки непосредственно из изолированной интактной сетчатки животных или человека. Здесь мы демонстрируем, как распространенные системы ЭРГ in vivo могут быть адаптированы для записи ЭРГ ex vivo с целью анализа электрической активности клеток сетчатки.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Сигнал электроретинограммы (ЭРГ) in vivo состоит из нескольких перекрывающихся компонентов, происходящих от различных типов клеток сетчатки, а также шума от внешних источников сетчатки. Ex vivo ERG представляет собой эффективный метод анализа функции клеток сетчатки непосредственно из интактной изолированной сетчатки животных или донорских глаз. Кроме того, ex vivo ERG может быть использована для проверки эффективности и безопасности потенциальных терапевтических агентов на тканях сетчатки животных или человека. Здесь мы показываем, как коммерчески доступные системы ERG in vivo могут быть использованы для проведения ex vivo ERG записи с изолированной сетчатки мыши. Мы комбинируем блоки световой стимуляции, электронные и нагревательные блоки стандартной системы in vivo с специально разработанным держателем образца, системой перфузии с гравитационным управлением и электромагнитным шумозащитным экраном для одновременной записи малошумящих сигналов ex vivo ERG с двух сетчаток глаза с программным обеспечением для сбора данных, включенным в коммерческую систему in vivo Системы. Кроме того, мы демонстрируем, как использовать этот метод в сочетании с фармакологическими методами лечения, которые удаляют определенные компоненты ЭРГ, чтобы препарировать функцию определенных типов клеток сетчатки.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Электроретинограмму (ЭРГ) является хорошо отработанной технологией, которая может использоваться для записи электрической активности сетчатки, вызванного светом. Сигнал ЭРГ генерируется в основном изменения напряжения, вызванных радиальных токов (вдоль оси фоторецепторов и биполярных клеток), протекающей в резистивном внеклеточном пространстве сетчатки. Первый сигнал ЭРГ был записан в 1865 году Холмгреном от поверхности рыбий глаз 1. Эйнтховен и Джолли 1908 2 делится ответ ERG в начале света в трех различных волн, называемых А-, B- и С-волн, которые в настоящее время, как известно, отражает главным образом деятельность фоторецепторов, ПО биполярных клеток и пигментного эпителия Клетки, соответственно 3-8. ЭРГ может быть записан от глаз под наркозом животных или человека (в естественных условиях), с изолированной подготовки глаз 9, по изолированной неповрежденной сетчатки (экс естественных условиях) 3,10-15 или через определенные слои сетчатки с микроэлектродов (местноеЭРГ) 4,16. Из них в естественных условиях ЭРГ в настоящее время наиболее широко используемый метод для оценки функции сетчатки. Это неинвазивный метод, который может быть использован в целях диагностики или следовать прогрессирование заболеваний сетчатки у животных или пациентов. Тем не менее, в естественных условиях ERG записи производят сложную сигнал с нескольких перекрывающихся компонентов, часто загрязнены экстраокулярной физиологического шума (например, дыхания и сердечной деятельности).

Местное ЭРГ может быть использован для записи сигнала через конкретных слоев сетчатки, но это наиболее инвазивная и имеет самый низкий сигнал-шум (SNR) по сравнению с другими конфигурациями записи ЭРГ. Местное ЭРГ также технически сложных и требует дорогостоящего оборудования (например, микроскопа и Микроманипуляторы). Transretinal ЭРГ от неповрежденной, изолированные сетчатки (экс естественных ЭРГ) предлагает компромисс между в естественных условиях и местных методов ЭРГ позволяет стабильно и HIGч SNR записи из неповрежденных сетчатки животных и человека. 17 В последнее время этот метод был успешно использован для изучения функции палочек и колбочек фоторецепторов в млекопитающих, приматов и человека сетчатки 18-20. Кроме того, из-за отсутствия пигментного эпителия в сетчатку экс естественных условиях, положительно компонент с волны сигнала ERG удаляется и ярко выраженными негативными медленная компонента PIII раскрывается в Экс Vivo записей. Медленная компонента PIII было показано, происходят из деятельности Клетки Мюллера клеток в сетчатке 21-23. Таким образом, экс виво метод ЭРГ также может быть использован для изучения Мюллера клеток в интактной сетчатке. Несколько исследований также показали, что экс естественных условиях ERG записи может быть использован для измерения концентрации фармакологических агентов по сетчатке 24 и проверить безопасность и эффективность препаратов 25-27.

Несколько коммерческих систем в естественных условиях имеются ииспользуется во многих лабораториях, которые не обязательно имеют большой фон электрофизиологии. В отличие от экс естественных устройства не не были доступны до недавнего 17, и в результате только очень немногие лаборатории в настоящее время воспользоваться этой мощной техники. Это было бы выгодно, чтобы экс естественных ERG записи доступны более лабораториями в целях продвижения наши знания о сетчатки физиологии и патологии, а также разработать новые методы лечения для ослепления заболеваний. Покажем здесь простое и доступное экс виво ERG устройство 17 и показать, как оно может быть использовано в сочетании с несколькими коммерчески доступных систем в естественных условиях ЭРГ записывать rod- и конуса-опосредованной передачи сигналов (А- и В-волны) и функция Müller клеток (замедлить PIII) из неповрежденных сетчатки мыши дикого типа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все экспериментальные протоколы были в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных и были одобрены Комитетом институциональной исследования животных в Вашингтонском университете в.

1. Настройка перфузии и Держатель образца

  1. Получают раствор для сетчатки перфузии свежей на день эксперимента. Используйте дистиллированную и деионизированную воду. Используйте один из следующих трех решений.
    1. Подготовьте бикарбонат-содержащие 'решение (1 л): 1 бутылка Эймса Ames' СМИ и 1,9 г NaHCO 3,
    2. Получают раствор Локка (в мм): 112,5 NaCl, 3,6 KCl, 2,4 MgCl 2, 1,2 CaCl 2, 10,0 HEPES, 20,0 NaHCO 3, 3,0 Na сукцинат, 0,5 Na глутамат, 0,02 ЭДТА и 10,0 глюкозы, 0,1% MEM витаминов и амино кислоты
    3. Подготовьте HEPES-буферный раствор Рингера (в мМ): NaCl 133,3, KCl 3,3, 2,0 MgCl 2, CaCl 2, 1,0, 10,0 глюкозы, 0,01 ЭДТА, 12,0 HEPES, рНдоводят до 7,5 с ~ 5,8 мл 1 М NaOH, добавляют 0,72 г / л культуральной среды Леибовиц L-15. Используйте 20 - 50 мкМ DL-AP4 и 50 - 100 мкм BaCl 2 изолировать ответ фоторецепторов с любой перфузии средств массовой информации.
  2. Получают раствор для электродов 28 (в мм): 140,0 NaCl, 3,6 KCl, MgCl2, 2,4, 1,2 CaCl 2, 3 HEPES, 0,01 ЭДТА и доведения рН до 7,4 - 7,5 с помощью NaOH. Электрод раствор можно хранить при комнатной температуре в течение нескольких месяцев.
  3. Подготовка и проверить держатель образца.
    1. Клей черный / серый фильтр на верхней части купола нижней части держателя образца (см рисунок 1А). Распространение двухкомпонентный 5 мин эпоксидный клей тщательно по краям плоскими вершинами куполов. При необходимости, сделайте это под микроскопом рассечение.
    2. Подождите, пока клей не станет почти сухим (около 4 минут), а затем нажмите на фильтровальную бумагу купола с помощью плоской пункта. Клей бумажный фильтр, по крайней мере за один день до эксперимента.фильтровальная бумага может быть использована несколько раз, но должен быть заменен после месяца записи. Используйте 70% этанола тщательно очистить от купола остатков клея перед установкой замены бумаги.
    3. Заполните электродов каналов с решением электрод пытается избежать пузырьков воздуха и винт на пеллетах электроды, заключенные с резьбовым переходником электродных каналов (см 1А и В). Подключите верхние и нижние части держателя образца с помощью четырех винтов и заполнить перфузии линии с раствором электрода.
    4. Измерьте сопротивление и напряжение между выводами каждой пары электродов, используя мультиметр (рис 1B). Сопротивление должно быть ниже 100 П & и ниже 10 мВ напряжения, если каналы пузырьков и электроды находятся в хороших условиях.
  4. Залить 400 - 700 мл перфузии средств массовой информации в стеклянной бутылке. Отдельная еще 300 мл, которые будут использоваться в рассечения сетчатки и сразорвал его в холодильнике. Установите трубки перфузии в блоке теплообменника и поместите предварительно нагретой блок на нагревательной пластины (рис 1D).
  5. Приложите бутылку с крышкой, которая имеет соединения с CO 2 / O 2 газа (если используется Эймс "или Локка) и для перфузии трубки (рис 1D). Разогреть бутылку со СМИ до 37 ° С и поместить его на нагревательной пластины или на верхней части света единицы стимуляции в водяной бане до 37 - 39 ° С 17.
    1. Премьер перфузии линии, заполняя их перфузии СМИ инициировать поток тяжести приводом.
      1. В системе LKC, поместить бутылку на верхней части блока 17 стимулятора, чтобы обеспечить значительный гравитационный поток, который затем доводят с помощью регуляторов скорости потока без влияния на снижение уровня перфузии раствора в бутылке в процессе эксперимента.
      2. В системе Ocuscience, поместите рerfusion бутылки в клетке Фарадея, чтобы минимизировать шум и задолго перфузии выходных линий от держателя образца (см шаг 2,8) ниже уровня держатель образца (и перфузии бутылки) для увеличения гравитационного диск решения. Щит эти выходные линии и подключите экран к земле усилителя, чтобы предотвратить сцепление электромагнитного шума в сигнале ERG.
  6. Отрегулируйте перфузии до 3 - 5 мл / мин с помощью регуляторов расхода. Подключите 5% CO 2/95% O 2 газа из баллона с регулятором надлежащего и регулировать расход, чтобы обеспечить устойчивый пузырьков СМИ в бутылке через воздушный камень.

2. Подготовка образцов

  1. Соберите чистые и острые инструменты, включая рассечение прямой холодного microscissors, один или два 45 Ø пинцетом, и лезвие бритвы прямоугольного куска фильтровальной бумаги.
  2. Налейте около 200 мл холодной perfuSion раствор в большую чашку Петри таким образом, чтобы вся нижняя часть держателя образца (в том числе купола) можно погрузить в раствор. Этот шаг становится важным при монтаже сетчатки на куполах (см шаг 2,6). Хотя некоторые решения предназначены для быть насыщена карбогена (5% CO 2/95% O 2), это не является необходимым для целей рассечение и не было сделано в экспериментах, описанных здесь.
  3. Для типичного эксперимента, держать животных в 12/12 часов темный / цикл свет и тьма-адаптировать их в течение 6 - 12 часов до запланированного записей. Эвтаназии животное СО 2 ингаляции с последующим смещением шейных позвонков при тусклом красном свете, и делать все следующие процедуры при тусклом красном или ИК света (например, использовать, красный фильтр перед источником света микроскоп).
    1. Потяните глаза с помощью пинцета и положите их в средствах массовой информации. Поместите один глаз, в то время на небольшом листе бумаги (например, некоторые регулярные фильтровальной бумаги) и сделать какгорит примерно на уровне зубчатый край, удерживая глаз с помощью пинцета (это делается за пределами решения здесь).
  4. Вырезать по зубчатый край (или ближе к экватору глаза) с microscissors и удалить роговицы и хрусталика. Поместите чашку глаз в холодной СМИ в большой чашке Петри и повторите ту же процедуру с другим глазом.
  5. Вырезать небольшой разрез от верхней части чаши глаза к зрительному нерву, сохраняя ножницы между сетчаткой и склеры, чтобы сохранить сетчатки, как нетронутыми, насколько это возможно. Ручка склеры с обеих сторон разреза с помощью двух пинцетов и тянуть пинцетом друг от друга, чтобы отделить сетчатку.
    1. Вырезать зрительного нерва и попытаться изолировать сетчатку с минимальным количеством физического контакта с дистальной поверхности. НПП будет в основном отделить автоматически от сетчатки в процессе вскрытия. Это более важно, чтобы избежать механического повреждения сетчатки, чем на выполнениерассечение быстро, как правило, сетчатки можно инкубировать в течение 30 мин в растворе без существенных эффектов на свойства реагирования.
  6. Установите сетчатки на куполах держателя образца (рис 1в). Погружают нижнюю часть держателя образца в чашке Петри с рассеченных сетчатки. Slide сетчатки фоторецепторов сторону (выпуклой поверхности изолированной сетчатки) вверх, выше купола и поднимите держатель образца таким образом, что сетчатка придает на фильтровальной бумаге. Повторите процедуру для другой сетчатке.
  7. Высушите держателе тщательно, чтобы предотвратить электрический перекрестных помех между сетчаткой, а также шума и сигнала шунтирование. Держатель образца имеет уплотнительные кольца вокруг нижней части купола, чтобы предотвратить разлив раствора между верхней и нижней частей держателя, а также, чтобы помочь электрическую изоляцию фоторецепторов и ганглиозных клеток сторон отдельных сетчатки. Прикрепите верхнюю часть держателя с четырьмя винтами (рис 1b) и заполнить каналы с перфузии перфузии раствором с помощью шприца и иглы.
  8. Передача Держатель образца рядом с блоком теплообменника тепла и подключить входные и выходные линии перфузии в держателе образца (рис 1D). Подключите электроды к усилителю ERG (топ электроды подключаются к земле / минус штифта в усилителе) и прикрепить блок стимулятор / управления на держатель образца с помощью адаптера или сдвиньте грелку в стимулятор устройства в зависимости от которого в естественных условиях Система ERG используется.

3. Записи

  1. Настройка усилителя и стимулирования параметров с помощью программного обеспечения системы в естественных условиях. Установите частоту приобретения до значения между 1 и 10 кГц и низкочастотной фильтрации до 300 Гц. Не использовать фильтрацию высоких частот. Используйте 60 Гц (или 50 Гц в Европе), если необходимо Notch Filter.
  2. Запись исходных без световой стимуляции и остроумиеч тусклый стимуляции (например., зеленый свет -35 дБ или 0,3 мкд см -2), чтобы проверить на хорошей электрической связи между электродами и сетчатки образца. Подождите 10 - 20 мин до начала сбора данных, так что температура и сетчатки функция достижения стабильного состояния.
    1. Выберите параметры по стимулированию в соответствии с какой-либо конкретной эксперимента и начать сбор данных. Например, использовать зеленый свет от -40 до 0 дБ или от 0,1 до 1000 мкд см -2 для скотопического семьи отклика. Используйте около 2 до 3 журнала-единицы ярче мигает фотопических записей, где стержни должны быть подавлены фонового освещения (3 - 30 CDM -2) или вспышки зонда (около 1,3 см -2 Cd = 1 дБ, рисунок 3).
    2. Однако помните, что точные значения интенсивности света может быть несколько в зависимости от вашего калибровки системы и условий эксперимента. Как правило, масштабные интенсивности вниз на 5 - 10 раз по сравнению с в естественных условиях записи при использовании зеленый свет 17. Черное покрытие с отверстиями над сетчатки (включенных в коммерческой системе адаптера) может быть использован для уменьшения рассеяния света в держатель образца и облегчить гомогенное и равного стимуляции обоих сетчатки в Ganzfeld сфере коммерческой системы в естественных условиях.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для записи с темно-адаптированных сетчатки, интенсивности тестовых вспышек, используемых в типичном эксперименте отбеливателя только ничтожная доля пигмента, так что отсутствие НПП приводом регенерации не проблема. Кроме того, было показано ранее, что регенерация конуса пигмент может еще иметь место в изолированной сетчатки с помощью Мюллер клеток зрительного цикла 20.
  3. Как правило, эксперименты длиться от 30 мин до нескольких часов, мониторинг базовой линии, уровень шума и стабильность реакции в ходе эксперимента, как изменения в них может указывать технические проблемы.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Увеличение или уменьшение шумаамплитуды г реагирования может указывать пузырьков воздуха в перфузии или электродных каналов, слишком высокую или низкую температуру, решение утечка / разлива или смещения сетчатки.

4. Очистка

  1. Снять держатель образца от перфузии линий, откройте его и промойте сетчатку от фильтровальной бумаги. Удалите электроды и ополосните их дистиллированной водой (не используйте этанол). Очистить Держатель образца (в том числе перфузионных каналов) с этанолом и / или дистиллированной воды. Флеш трубки перфузии осторожно> 70% этанола.
  2. Промойте перфузии бутылку с дистиллированной водой (не используйте моющие средства). Этанол может быть также использован для очистки бутылку.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы записали флеш ответы темно-адаптированы дикого типа (WT), C57BL / 6 мыши сетчатки, следуя экспериментальные протоколы, описанные выше и показанные на рисунке 1, используя различные стандартные решения перфузии (Рисунок 2). Сигналы ответа и кинетика а также чувствительность фоторецепторов палочек появилось подобное в Эймса и СМИ Локка (фиг.2А и В). С другой стороны, в соответствии с HEPES-буферным раствором Рингера (бикарбонат или нет 5% CO 2/95%...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы демонстрируем здесь важные шаги для получения высококачественных экс естественных ERG записи одновременно с двумя изолированными сетчатки мыши с помощью компонентов в естественных условиях системы ЭРГ вместе с экс естественных ERG адаптера. В этом исследовании мы перфузии обе сетчатки от животного тем же раствором (либо Ames ', Локка или Рингера), но можно также заливать каждый сетчатку с другим раствором, например, для целей тестирования на наркотики. Наиболее важные шаг...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Университет Вашингтона в Сент-Луисе имеет лицензионное соглашение с Xenotec, Inc. и могут получать роялти от продажи экс естественных адаптера.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана NIH гранты EY019312 и EY021126 (VJK), EY002687 в Департамент офтальмологии и визуальных наук в Университете Вашингтона, и исследований, чтобы предотвратить слепоту.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
In vivo система ERGOcuScienceHMsERGa href="http://www.ocuscience.us/id77.html">www.ocuscience.us/id77.html
In vivo система ERGLKC TechnologiesUTAS-E 3000www.lkc.com/products/UTAS/bigshot.html
Ex адаптер vivoOcuScienceEx VIVO ERG adapterwww.ocuscience.us/id107.html
Диссекционный микроскопNorth Central InstrumentsLeica M80Может использовать излучатель любой марки
IROpto Diode Corp.OD-50Lwww.optodiode.com
Prowler Прицелы ночного виденияB.E. Meyers Electro OpticsD4300-IИзделие военного класса.
Красный фильтрRoscoLaboratories Roscolux #27 Medium RedМожно использовать вместо ИК системы
Красный фарOcuScienceERGX011www.ocuscience.us/catalog/i29.html
МикроножницыWPI, Inc.500086www.wpiinc.com/
Пинцет Dumont #5WPI, Inc.14101
Бритвенные лезвияЭлектронная микроскопия Науки72000www.emsdiasum.com
ScaleMetler ToledoAB54-S/FACTa href="http://www.sigmaaldrich.com/">Можно использовать любую марку
pH-метр и электродBeckman CoulterpHI 350Можно использовать любую марку
NaClSigma-AldrichS7653Можно использовать любую марку
KClSigma-Aldrich60129Можно использовать любую марку
MgCl2Sigma-Aldrich630201.0 M раствор
CaCl2Sigma-Aldrich211141.0 M раствор
ЭДТАSigma-Aldrich431788Можно использовать любую марку
HEPESSigma-AldrichH3375Можно использовать любую марку
Бикарбонат натрияSigma-AldrichS6297Можно использовать любую марку
Ames mediumSigma-AldrichA1420Можно использовать любую марку
BaCl2Sigma-AldrichB0750Можно использовать любая марка
DL-AP4Tocris Bioscience101Может использовать любую марку
Янтарная кислота динатриевая сольSigma-Aldrich224731Может использовать любую марку
L-глутаминовая кислотаSigma-AldrichG2834Может использовать любую марку
D-(+)-глюкозаSigma-AldrichG7528Может использовать любую марку
Питательная среда Leibovitz L-15Sigma-AldrichL4386Можно использовать витамины любой марки
MEMSigma-AldrichM6895
MEM аминокислотыSigma-AldrichM5550
CarbogenAirgasUN31565% CO2
<<

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Armington, J. C. The Electroretinogram. , Elsevier Science & Technology Books. (1974).
  2. Einthoven, W., Jolly, W. A. The form and magnitude of the electrical response of the eye to stimulation by light at various intensities. Q J Exp Physiol. 1, 43(1908).
  3. Granit, R. The components of the retinal action potential in mammals and their relation to the discharge in the optic nerve. J. Physiol. 77, 207-239 (1933).
  4. Penn, R. D., Hagins, W. A. Signal transmission along retinal rods and the origin of the electroretinographic a-wave. Nature. 223, 201-204 (1969).
  5. Stockton, R. A., Slaughter, M. M. B-wave of the electroretinogram. A reflection of ON bipolar cell activity. J. Gen. Physiol. 93, 101-122 (1989).
  6. Robson, J. G., Frishman, L. J. Response linearity and kinetics of the cat retina: the bipolar cell component of the dark-adapted electroretinogram. Vis. Neurosci. 12, 837-850 (1995).
  7. Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. A dissection of the electroretinogram from the isolated rat retina with microelectrodes and drugs. Vis. Neurosci. 16, 727-741 (1999).
  8. Steinberg, R. H., Schmidt, R., Brown, K. T. Intracellular responses to light from cat pigment epithelium: origin of the electroretinogram c-wave. Nature. 227, 728-730 (1970).
  9. Wilson, W. S., Shahidullah, M., Millar, C. The bovine arterially-perfused eye: an in vitro method for the study of drug mechanisms on IOP, aqueous humour formation and uveal vasculature. Curr. Eye Res. 12, 609-620 (1993).
  10. Frank, R. N., Dowling, J. E. Rhodopsin photoproducts: effects on electroretinogram sensitivity in isolated perfused rat retina. Science. 161, 487-489 (1968).
  11. Donner, K., Hemila, S., Koskelainen, A. Temperature-dependence of rod photoresponses from the aspartate-treated retina of the frog (Rana temporaria). Acta Physiol. Scand. 134, 535-541 (1988).
  12. Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. Electrophysiological properties of a new isolated rat retina preparation. Vision Res. 39, 2165-2177 (1999).
  13. Hamasaki, D. I. The effect of sodium ion concentration on the electroretinogram of the isolated retina of the frog. J. Physiol. 167, 156-168 (1963).
  14. Luke, M., et al. The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function. Brain Res. Brain Res. Protoc. 16, 27-36 (2005).
  15. Bastian, B. L., Fain, G. L. Light adaptation in toad rods: requirement for an internal messenger which is not calcium. J. Physiol. 297, 493-520 (1979).
  16. Arden, G. B. Voltage gradients across the receptor layer of the isolated rat retina. J. Physiol. 256, 333-360 (1976).
  17. Vinberg, F., Kolesnikov, A. V., Kefalov, V. J. Ex vivo ERG analysis of photoreceptors using an in vivo ERG system. Vision Res. 101, 108-117 (2014).
  18. Nymark, S., Heikkinen, H., Haldin, C., Donner, K., Koskelainen, A. Light responses and light adaptation in rat retinal rods at different temperatures. J. Physiol. 567, 923-938 (2005).
  19. Heikkinen, H., Nymark, S., Koskelainen, A. Mouse cone photoresponses obtained with electroretinogram from the isolated retina. Vision Res. 48, 264-272 (2008).
  20. Wang, J. S., Kefalov, V. J. An alternative pathway mediates the mouse and human cone visual cycle. Curr. Biol. 19, 1665-1669 (2009).
  21. Bolnick, D. A., Walter, A. E., Sillman, A. J. Barium suppresses slow PIII in perfused bullfrog retina. Vision Res. 19, 1117-1119 (1979).
  22. Newman, E. A. Potassium conductance block by barium in amphibian Muller cells. Brain Res. 498, 308-314 (1989).
  23. Oakley, B. 2nd, Katz, B. J., Xu, Z., Zheng, J. Spatial buffering of extracellular potassium by Muller (glial) cells in the toad retina. Exp. Eye Res. 55, 539-550 (1992).
  24. Nymark, S., Haldin, C., Tenhu, H., Koskelainen, A. A new method for measuring free drug concentration: retinal tissue as a biosensor. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 2583-2588 (2006).
  25. Walter, P., Luke, C., Sickel, W. Antibiotics and light responses in superfused bovine retina. Cell. Mol. Neurobiol. 19, 87-92 (1999).
  26. Luke, M., et al. The safety profile of alkylphosphocholines in the model of the isolated perfused vertebrate retina. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 248, 511-518 (2010).
  27. Januschowski, K., et al. Electrophysiological toxicity testing of VEGF Trap-Eye in an isolated perfused vertebrate retina organ culture model. Acta Ophthalmol. 92, e305-e311 (2014).
  28. Kolesnikov, A. V., Kefalov, V. J. Transretinal ERG recordings from mouse retina: rod and cone photoresponses. J Vis Exp. , (2012).
  29. Koskelainen, A., Hemila, S., Donner, K. Spectral sensitivities of short- and long-wavelength sensitive cone mechanisms in the frog retina. Acta Physiol. Scand. 152, 115-124 (1994).
  30. Lyubarsky, A. L., Falsini, B., Pennesi, M. E., Valentini, P., Pugh, E. N. UV- and midwave-sensitive cone-driven retinal responses of the mouse: a possible phenotype for coexpression of cone photopigments. J. Neurosci. 19, 442-455 (1999).
  31. Lyubarsky, A. L., Daniele, L. L., Pugh, E. N. From candelas to photoisomerizations in the mouse eye by rhodopsin bleaching in situ and the light-rearing dependence of the major components of the mouse ERG. Vision Res. 44, 3235-3251 (2004).
  32. Azevedo, A. W., Rieke, F. Experimental protocols alter phototransduction: the implications for retinal processing at visual threshold. J. Neurosci. 31, 3670-3682 (2011).
  33. Carter-Dawson, L. D., LaVail, M. M. Rods and cones in the mouse retina. I. Structural analysis using light and electron microscopy. J. Comp. Neurol. 188, 245-262 (1979).
  34. Fain, G. L., Matthews, H. R., Cornwall, M. C., Koutalos, Y. Adaptation in vertebrate photoreceptors. Physiol. Rev. 81, 117-151 (2001).
  35. Calvert, P. D., Strissel, K. J., Schiesser, W. E., Pugh, E. N., Arshavsky, V. Y. Light-driven translocation of signaling proteins in vertebrate photoreceptors. Trends Cell Biol. 16, 560-568 (2006).
  36. Schneeweis, D. M., Schnapf, J. L. The photovoltage of macaque cone photoreceptors: adaptation, noise, and kinetics. J. Neurosci. 19, 1203-1216 (1999).
  37. Heikkinen, H., Vinberg, F., Nymark, S., Koskelainen, A. Mesopic background lights enhance dark-adapted cone ERG flash responses in the intact mouse retina: a possible role for gap junctional decoupling. J. Neurophysiol. 105, 2309-2318 (2011).
  38. Gouras, P., MacKay, C. J. Growth in amplitude of the human cone electroretinogram with light adaptation. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 30, 625-630 (1989).
  39. Peachey, N. S., Goto, Y., al-Ubaidi, M. R., Naash, M. I. Properties of the mouse cone-mediated electroretinogram during light adaptation. Neurosci. Lett. 162, 9-11 (1993).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

ex vivoin vivo

Похожие статьи