Методическая статья

Иммуногистохимический Визуализация гиппокампа активности нейронов После пространственного обучения в мышиной модели нарушениями развития нервной

DOI:

10.3791/52919

⸱

12 мая 2015 г.

 ,  ,  ,  , 
1Centre for Integrative Biology (CIBIO), University of Trento, 2CNR Neuroscience Institute, Pisa, Italy

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы опишем протокол иммуногистохимии для изучения профиля активации гиппокампа нейронов после воздействия пространственной учебной задачи в модели мыши характеризуется когнитивных дефицитов развития нервной системы координат. Этот протокол может быть применен к обеих генетических или фармакологических моделей мышей, характеризующихся когнитивных нарушений.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Индукционная фосфорилированного внеклеточной регулируемой киназы-(Перк) является надежным молекулярным считывания обучения зависит от нейронов активации. Здесь мы опишем протокол Перк иммуногистохимии для изучения профиля активации гиппокампа нейронов после воздействия пространственной учебной задачи в модели мыши характеризуется когнитивных дефицитов развития нервной системы координат. В частности, мы использовали Перк иммуноокрашивания изучать нейронов активации следующее Моррис водном лабиринте (MWM, классическая гиппокампа-зависимой задача обучения) в Engrailed-2 нокаутом (EN2 - / -) мышей, модель расстройств аутистического спектра (ASD). По сравнению с дикого типа (WT) управления, en2 - / - мышей показали значительные дефициты пространственное обучение в MWM. После MWM, значительных различий в количестве одной особенностью-позитивных нейронов были обнаружены в конкретных гиппокампа подполей EN2 - / - мышей, по сравнению с WT животных. Таким образом, наш протокол может решительно обнаружить различия вПерк-позитивных нейронов гиппокампа, связанные с зависит от обучения обесценения в мышиной модели ASD. В целом, наш протокол может быть применен для исследования профиля активации нейронов гиппокампа в обоих генетических или фармакологических моделей мышей, характеризующихся когнитивных нарушений.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Неврологические расстройства включают широкий и гетерогенную группу расстройств, таких как синдром Дауна, синдром ломкой Х (FXS), синдром Ретта, нейрофиброматоз, клубневые склероз и ASD, в которых развитие и созревание центральной нервной системы (ЦНС) нарушается во время раннего внутриутробный период 1. Эти развития дисфункций мозга может вызвать глубокие, всю жизнь воздействуют на моторные функции, языка, обучения и процесса памяти. Множество генетических и экологических факторов были вовлечены в патогенез расстройств нервной системы в течение последних нескольких лет 2,3. Даже если молекулярные механизмы, лежащие в основе клинического фенотипа неизвестны, упомянутые выше результаты позволили развитие нескольких мышиных моделях этих нарушений. Обучения и памяти дефицита были определены в ряде этих мышиных моделей, таких как TSC1 +/- +/-, TSC2,НФ1 +/- и en2 - / - мышей 2,4-7. Важной задачей в области развития нервной расстройств идентификации клеточных и молекулярных процессов, лежащих в основе памяти и обучения дисфункции. Отдельные сигнальные пути активированные при обучении или памяти можно индуцировать транскрипцию специфических генов и в конечном счете приведет к нового синтеза белка. Непосредственные-ранних генов (IEGs) активации и белка зависит от синаптических изменений быстро индуцируется в нейронах головного мозга в ответ на активность нейронов и поведенческих обучения 8,9.

Дефицит пути с участием Нейрофибромин сигнализации были связаны с нарушениями нервной системы обучения в расстройств. Нейрофибромин является продуктом гена NF1, чьи мутации вызывает нейрофиброматоз типа 1, комплекс генетический синдром, характеризующийся опухолей нервной системы, поведенческих и моторных задержек и познавательной DISAностей 10. Мыши, гетерозиготные по Nf1 удаления ограничения, чтобы тормозных нейронов показать дефицит в ранней фазе долгосрочного потенцирования (LTP), а также угрозу пространственного обучения в MWM 5,11,12. Интересно, что дефицит НФ1 в этой модели мыши приводит к более-активации сигнализации Рас в тормозных интернейронов в процессе обучения, что приводит к увеличению ЭРК фосфорилирования и, наконец, в ненормальном повышения высвобождение ГАМК из этих нейронов 5.

Основываясь на этих выводах, визуализация нейронной активности после поведенческих задач представляет собой способ реконструкции конкретных схем, участвующих в нервной заболеваний. Протокол иммуногистохимии, описанный здесь направлен на оценку и количественно гиппокампа уровни ЭРК фосфорилирования следующие MWM в модели ASD мыши с когнитивными нарушениями. МВМ широко используется для изучения гиппокампа в зависимости пространственное обучение и память у грызунов 13,14 . Мы решили использовать ERK фосфорилирования как молекулярная считывания задач зависит от гиппокампа обучения, так как ЭРК было показано, играют важную роль в процессах обучения и памяти формирования 15. Кроме того, ЭРК путь необходим для опыта зависит от пластичности в развивающихся зрительной коры 16. Наконец, мыши, лишенные одного из двух изоформ (ERK) ERK2 в шоу ЦНС отмечены аномалии в познавательных, эмоциональных и социальное поведение 17, указывая, что ERK сигнализации может играть решающую роль в патогенезе нервной расстройств, таких как ASD.

Мы использовали Engrailed 2 нокаутом (EN2 - / -) мышей в качестве модели развития нервной расстройств. En2 - / - мыши обнаруживают анатомические и поведенческие "АСД-как" функции, в том числе потери переднего мозга интернейронов 18, снижение экспрессии АСД-родственных генов 19, снижение общительности, и нарушение когнитивной гибкости 6,7,20. Пространственное learniнг и дефекты памяти, такие как те, обнаружены в MWM, особенно надежный в en2 - / - мышей 6,7 и может иметь отношение к когнитивных нарушений, наблюдаемых у пациентов 21 ASD. Кроме того, мы показали, что нарушение пространственного обучения в MWM связана со снижением экспрессии Нейрофибромин и увеличение Перк уровней в воротах в en2 - / - мышей взрослых 7. Здесь мы представляем подробный протокол для иммуногистохимического характеристики Перк следующей MWM в этой модели ASD мыши.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты были проведены в соответствии с директивы Европейского сообщества 2010/63 / ЕС и были утверждены Министерством здравоохранения Италии.

1. Уход за животными, дома и лечение

  1. Выполните все экспериментальные протоколы, используя мышей в соответствии с руководящими принципами соответствующей институциональной уходу за животными.
  2. Поддержание животных в 12 ч циклом свет / темнота с пищей и водой, доступными по желанию.
  3. Дом мышей в группах 2-4, в стандартного размера клеток поликарбонат мыши с опилками и подстилки меняется еженедельно.
  4. Используйте возраста и пола соответствием мышей, поскольку восприимчивость к болезни может варьироваться в зависимости от возраста и пола в различных мышиных моделях нервной расстройств.
  5. Выберите соответствующее количество животных достигло статистической значимости (минимум 10 мышей на генотип для поведенческого исследования и 4 мышей на генотип для эксперимента иммуногистохимии).

2. Водный лабиринт Морриса (MWM)

  1. Используйте Circular танк (диаметр 100 см, высота 50 см).
    1. Поместите некоторые визуальные подсказки на разделителей пространства вокруг бака.
    2. Поставьте диаметром 10 см платформу в бак в фиксированном месте в центре одного из четырех воображаемых квадранта. Держите скрытой платформы в том же квадранте для всех испытаний во всех учебных занятий.
    3. Заполните бассейн с водопроводной водой до платформа 1 см над поверхностью воды. Температура воды Равновесие должно быть близко к 22 ° C; этот шаг может занять несколько часов. Добавьте горячую воду, чтобы сократить время, необходимое, чтобы уравновесить температуру воды.
    4. Добавьте примерно 1,5-2 л белого, нетоксичного краски, чтобы сделать воду непрозрачной.
  2. Трек Порядок приобретения
    1. Настройка системы отслеживания MWM с стандартными ПЗС-камер и видео плат. Выберите систему видео-слежения, чтобы отслеживать и анализировать несколько переменных, таких как длина пути, ЭСХАЗадержка ре, и время, проведенное в каждом квадранте.
    2. Разделите арену в четырех квадрантах и ​​настроить параметры обнаружения для обеспечения оптимального контраста между животными и фона для живого слежения.
    3. Укажите регион платформы.
    4. Установите максимальное время судебного разбирательства, 60 сек.
  3. МВМ Тестирование
    1. Перед тестированием поведения, позволяют мышам адаптационный период 20-25 мин в районе, где они не могут увидеть на бассейн или пространственными аллюзиями.
    2. Поезд каждой мыши в течение 9 дней (два последовательных испытаний день, с 20-30 минутного интервала между ними).
    3. Включите компьютер и фотоаппарат и начать системное программное обеспечение видео-слежения.
    4. Возьмите мышь за хвост и поместите его в воду, с его головы указал в сторону бассейна, начиная от одного из четырех стартовых позиций (север, юг, восток, запад). Для каждой мыши, стартовая позиция должна отличаться и по pseudorandomized испытаний.
    5. Пусть поплавать мыши и искать Макс.высотаОРМ в течение максимум 60 секунд. После того, как животное достигает платформы, позволяют ему оставаться на платформе в течение 20 сек.
    6. Если мышь не удалось найти платформу в течение этого времени, мягко наведите мышью на платформу, держа его за хвост, и пусть он остаться там в течение 20 сек. После того, как животное завершила все испытания два, высушить его с полотенцем и поставить его обратно в клетку.
    7. Каждый день учебного периода, повторите ту же процедуру (шаги 2.3.4-2.3.6).
    8. Выполните проверку датчика на 9-й день после последнего учебного след.
    9. Снимите платформу от бассейна.
    10. Пусть поплавать мыши и искать платформы для максимум 60 сек.
    11. Периодически проверяйте температуру воды, так что это должно быть то же самое (22 ° С) и очистить бассейн.

3. Подготовка секций из перфузируемые Животные

  1. Пожертвовать мышей в конце MWM. Четыре мышей в генотипе должны быть под наркозом до euthanizвания в соответствии с местными и международными стандартами.
  2. Заливать животное транскардиальную (сократить права auriclewith ножницами, чтобы позволить ввести кровотечение и бабочки канюлю в левый желудочек, чтобы заливать) фосфатным буферным раствором (PBS) в течение 4-5 мин, а затем 4% параформальдегидом в PBS в течение 10-15 мин 22.
  3. Проанализируйте и пост-исправить мозги в 4% параформальдегида при 4 ° С в течение не менее 12 часов.
  4. Поместите мозги в 50 мл конические пробирки полистирола, содержащих 15 мл 0,02% азида натрия в 0,1 М PBS и хранить при температуре 4 ° С до тех пор, пока требуется для нарезки.
  5. Отрежьте мозжечка, прежде чем vibratome резки.
  6. Клей мозг вертикально с режущим сайте, используя суперклей, на держателя пластины vibratome.
  7. Разрежьте мозг в 20-40 мкм толщиной корональных секций, в последовательном порядке в течение дорсального гиппокампа, на соответствующем vibratome.
  8. Соберите vibratome ломтики с кистью и передать 24 мульти-луночный планшет, содержащий 1 мл 0,1 М PBS для каждой лунки.
  9. Храните секции для краткосрочной перспективе в PBS или долгосрочной перспективе в 0,02% азида натрия в PBS при 4 ° С (ткань может быть использована в течение одного года).

4. Иммуногистохимия

  1. Передача 3-5 спинных гиппокампа разделы для каждой мыши, в 24 мульти-луночного планшета, содержащую 500 мкл 0,1 М PBS для каждой скважины.
  2. Промыть секции, содержащиеся в каждую лунку по 500 мкл 0,1 М PBS (5 мин 3 раза при осторожном встряхивании).
  3. Гасят активности эндогенной пероксидазы, путем инкубации секции в 1% H 2 O 2 в PBS в течение 20 мин при осторожном перемешивании.
  4. Промыть секции в 0,1 М PBS при осторожном перемешивании (3 х 5 мин).
  5. Проницаемости ткани: инкубировать секций в течение 5 мин в 0,2% Triton X-100 в PBS.
  6. Во время этих действий (4,4; 4,5), сделать достаточно блокирующий буфер (10% козьего сыворотки и 0,1% Тритон-Х100 в PBS) в течение всего эксперимента (количесг секций х 100 мкл х 3 ступени).
  7. Примечание: Используйте сыворотку от тех же видов, у которых был сделан вторичный AB (конъюгированный с биотином).
  8. Предотвращение неспецифическое связывание антитела, путем инкубации секции в блокирующем буфере (100 мкл / раздел) в течение 1 ч при комнатной температуре (RT) при легком помешивании.
  9. Инкубируйте разделы в первичных Ab (Perk) разводили в блокирующем буфере, в течение ночи при 4 ° С, при осторожном перемешивании.
  10. Промыть секции в 0,1 М PBS при осторожном перемешивании (3 х 5 мин).
  11. Инкубируйте с вторичным Ab конъюгированного с биотином (1: 250), разведенного в блокирующем буфере (то же, используемый на стадии 4.6) в течение 1 ч при комнатной температуре и осторожном встряхивании.
  12. Подготовьте ABC реагента в то же время, из-за авидин и биотин требуют по крайней мере 30 мин при комнатной температуре к комплексу.
  13. Подготовьте необходимый объем реагента ABC в соответствии с протоколом производителей.
  14. Промыть секции в 0,1 М PBS при осторожном перемешивании (3 х 5 мин).
  15. Incubatе участки в течение 45 мин при комнатной температуре с ABC реагента.
  16. Промыть секции в 0,1 М PBS при осторожном перемешивании (3 х 5 мин).
  17. Подготовка DAB рабочего раствора, каждый шаг с участием DAB должно быть сделано в вытяжном шкафу, как DAB является канцерогеном и тератогенным.
  18. Передача раствора DAB к новой плите с помощью пластиковой пипетки.
  19. Место участки в пластине, содержащей DAB рабочего раствора и медленно вихрем пластину вручную, чтобы максимальный размер разделов.
  20. Монитор DAB реакцию на микроскопом, пока не развивается адекватный сигнал (2-5 мин).
  21. Остановка реакции при требуемой интенсивности цвета путем промывки ткани в 0,1 М PBS (3 х 5 мин).
  22. Используйте отбеливатель для отключения оставшуюся DAB раствора субстрата в вытяжном шкафу в течение ночи и распоряжаться им в соответствии с лабораторными рекомендациями.
  23. Mount разделы по желатин покрытием слайды, плавающие в PBS. Затем высушите их при комнатной температуре, по крайней мере 3-4 часов.
  24. Обезвоживают последовательно разделы в 50%, 70%, 95%и 100% этаноле в течение 2 мин каждого, и ясно, в 100% ксилола в течение 5 мин.
  25. Покровное использованием монтажной среды и оставить в вытяжном шкафу для просушки на ночь.

5. Сотовый граф

  1. Кол Перк-позитивные клетки от трех до пяти разделов на уровне дорсального гиппокампа должны быть проанализированы на животное.
  2. Приобретать несколько изображений светлого поля от каждой секции на 200X увеличении, используя подходящий микроскоп, а затем собрать их с помощью программного обеспечения для обработки изображений.
  3. Выполните количество клеток на TIFF преобразуются мозаичных изображений с использованием свободного программного обеспечения ImageJ.
  4. Граф Перк-окрашенных клеток в воротах и ​​гранул слоя клеток на 2:58 считая коробки 100 × 100 мкм каждый.
  5. Плотность клеток будут выражены как число меченых клеток в счетной окне (100 × 100 мкм).
  6. Выполнить статистический анализ, чтобы оценить существенное различие между генотипами. Это может быть достигнуто с СтьюдентаТест ANOVA или последующим соответствующего испытания постфактум, используя коммерческие программного обеспечения. Установите статистический уровень значимости при р <0,05.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол, описанный здесь, был разработан, чтобы визуализировать, с помощью иммуногистохимии, экспрессия специфического маркера активности нейронов гиппокампа после MWM в мышиной модели нервной расстройств. Все экспериментальные данные, приведенные здесь, были взяты из нашей недавней работе 7. Были использованы полученные от гетерозиготных вязки; соответствующего возраста взрослых помета (вес = 25-35 г 3-5 месяцев) - мужская и женская WT и en2 - /. Двадцать два мышей (11 на генотип) были...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы предоставляем Перк протокол иммуногистохимии для выявления нейронов активации следующей MWM в en2 - / - мышей, модель мыши нервной расстройств. Пониженные уровни одной особенностью были обнаружены в СА3 подполе EN2 - / - мутанты сравнению с WT. В отличие от того, что наблюдается в СА3 подполе, общим ростом Перк-положительных нейронов, а не обнаружен в обоих воротах и ВКТ из en2 - / - мышей по сравнению с WT. Возможное объяснение этого противоположной тенденции в уровнях фосфорил...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего раскрывать

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы хотим поблагодарить административный состав CIBIO (университет Тренто) и CNR Neuroscience института помощи. Джованни Провенцано поддерживается пост-докторской стипендии от Fondazione Veronesi (Милан, Италия). Эта работа финансировалась итальянским Министерством университетов и исследований (PRIN 2008 грант № 200894SYW2_002 и прин 2010-2011 грант # 2010N8PBAA_002 для YB), Университет Тренто (CIBIO запуска грантовой YB) и Телемарафон фонда (грант # GGP13034 к Ю.Б.).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
EthoVision XT 8Noldus Information TechnologyЭта программная платформа не является обязательным требованием – на рынке есть много других поведенческих программ.
Темперная краскаGiotto - Fila Group CompanyБелая и жидкая, нетоксичная. Используется для приготовления непрозрачной воды в водном лабиринте Морриса.
Можно использовать вибратомныеLeicaVT1200от других компаний.
24-луночная пластинаSigmaCLS3524
100% этанолFisher ScientificA406-20Используется для создания градиента этанола для обезвоживания перед установкой на предметник.
XyleneVWR66004-950Toxic - для использования под капотом. Меняйте ксилол каждый месяц в зависимости от использования.
Азид натрияSigma  S2002
PBSSigmaP3813-10PAK
ddH2O Triton
X-100Sigma T-8787
Перекись водородаSigmaH1009-100ML
Сыворотка для нормальной козыAbcamG9023-10ML
ABC kit Vectastain Vector LaboratoriesPK-6100Добавить в объем 5 мл PBS 2 капли реагента А, перемешать, а затем добавить 2 капли реагента Б и перемешать.
DAB-пероксидазный субстратVector LaboratoriesSK-4100Добавить в объеме 5 мл ddH2O: 2 капли буферного стокового раствора и перемешать; 4 капли DAB и смешать; 2 капли H2O2 и перемешать.
[header]
pERK антителаCell Signaling Technologies 4370Разведение 1:500
Биотинилированное антитело IgG к кроликукозы Vector LaboratoriesBA-1000 Разведение 1:250
Горки SuperFrost Carl Roth1879
CoverslipsFisher12-548-B
DPXSigma317616Монтажный носитель для слайдов. Можно использовать эквивалентную монтажную среду.
Микроскоп  Zeiss Можно использовать эквивалентный микроскопAxio Imager.M2
Adobe PhotoshopAdobe Systems, Сан-Хосе, КалифорнияДля сборки изображений.
Программное обеспечение ImageJНациональный институт здравоохраненияБесплатное программное обеспечение можно загрузить по адресу http://rsb.info.nih.gov/ij/
SigmaPlot 11.0Systat Software Inc. (США)Можно использовать эквивалентные программы для статистического анализа.
Prism 6GraphPad Software, Inc. (Ла-Хойя, Калифорния, США)Можно использовать эквивалентные программы для статистического анализа.
модели .

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Castren, E., Elgersma, Y., Maffei, L., Hagerman, R. Treatment of neurodevelopmental disorders in adulthood. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 32, 14074-14079 (2012).
  2. Ehninger, D., et al. Reversal of learning deficits in a Tsc2+/- mouse model of tuberous sclerosis. Nature medicine. 14, 843-848 (2008).
  3. West, A. E., Greenberg, M. E. Neuronal activity-regulated gene transcription in synapse development and cognitive function. Cold Spring Harbor perspectives in biology. 3, (2011).
  4. Goorden, S. M., van Woerden, G. M., van der Weerd, L., Cheadle, J. P., Elgersma, Y. Cognitive deficits in Tsc1+/- mice in the absence of cerebral lesions and seizures. Annals of neurology. 62, 648-655 (2007).
  5. Cui, Y., et al. Neurofibromin regulation of ERK signaling modulates GABA release and learning. Cell. 135, 549-560 (2008).
  6. Brielmaier, J., et al. Autism-relevant social abnormalities and cognitive deficits in engrailed-2 knockout mice. PloS one. 7, e40914(2012).
  7. Provenzano, G., et al. Hippocampal dysregulation of neurofibromin-dependent pathways is associated with impaired spatial learning in engrailed 2 knock-out mice. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34, 13281-13288 (2014).
  8. Morgan, J. I., Curran, T. Stimulus-transcription coupling in neurons: role of cellular immediate-early genes. Trends in neurosciences. 12, 459-462 (1989).
  9. Steward, O., Schuman, E. M. Protein synthesis at synaptic sites on dendrites. Annual review of neuroscience. 24, 299-325 (2001).
  10. Gutmann, D. H., Parada, L. F., Silva, A. J., Ratner, N. Neurofibromatosis type 1: modeling CNS dysfunction. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 32, 14087-14093 (2012).
  11. Costa, R. M., et al. Mechanism for the learning deficits in a mouse model of neurofibromatosis type 1. Nature. 415, 526-530 (2002).
  12. Silva, A. J., et al. A mouse model for the learning and memory deficits associated with neurofibromatosis type. I. Nature. 15, 281-284 (1997).
  13. Morris, R. G., Garrud, P., Rawlins, J. N., O'Keefe, J. Place navigation impaired in rats with hippocampal lesions. Nature. 297, 681-683 (1982).
  14. Praag, H., Kempermann, G., Gage, F. H. Running increases cell proliferation and neurogenesis in the adult mouse dentate gyrus. Nature. 2, 266-270 (1999).
  15. Adams, J. P., Sweatt, J. D. Molecular psychology: roles for the ERK MAP kinase cascade in memory. Annual review of pharmacology and toxicology. 42, 135-163 (2002).
  16. Di Cristo, G., et al. Requirement of ERK activation for visual cortical plasticity. Science. 292, 2337-2340 (2001).
  17. Satoh, Y., et al. ERK2 contributes to the control of social behaviors in mice. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31, 11953-11967 (2011).
  18. Sgado, P., et al. Loss of GABAergic neurons in the hippocampus and cerebral cortex of Engrailed-2 null mutant mice: implications for autism spectrum disorders. Experimental neurology. 247, 496-505 (2013).
  19. Sgado, P., et al. Transcriptome profiling in engrailed-2 mutant mice reveals common molecular pathways associated with autism spectrum disorders. Molecular autism. 4, 51(2013).
  20. Cheh, M. A., et al. En2 knockout mice display neurobehavioral and neurochemical alterations relevant to autism spectrum disorder. Brain research. 1116, 166-176 (2006).
  21. Dawson, G., et al. Defining the broader phenotype of autism: genetic, brain, and behavioral perspectives. Development and psychopathology. 14, 581-611 (2002).
  22. Gage, G. J., et al. Whole animal perfusion fixation for rodents. J Vis Exp. (65), (2012).
  23. Maei, H. R., Zaslavsky, K., Teixeira, C. M., Frankland, P. W. What is the Most Sensitive Measure of Water Maze Probe Test Performance. Frontiers in integrative neuroscience. 3, 4(2009).
  24. Guzowski, J. F., Setlow, B., Wagner, E. K., McGaugh, J. L. Experience-dependent gene expression in the rat hippocampus after spatial learning: a comparison of the immediate-early genes Arc, c-fos and zif268. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 21, 5089-5098 (2001).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

pERKEngrailed 2

Похожие статьи