Цель данной работы является описание простых методов, которые значительно помочь в настройке и анализа легких мышей с раком легких или других патологий. Мы представляем 3 протоколы просто и надежно выполнять инстилляций легких, фиксация и измерения объема легких.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Закапывания и фиксация методы полезны в мышь легких исследования рака
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Возможность привить живые агенты, клетки, или химических веществ непосредственно в легких без ранили и убивали мышей является важным инструментом в исследовании рака легких. Хотя существует несколько методов, которые были опубликованы, показывающий, как интубации мыши для измерения функции легких, ни одна из них не потенциальных проблем для быстрого трахеи инстилляции в больших когортах мышей. В настоящей работе, простой и быстрый способ описан, что позволяет следователю для проведения таких инстилляций в эффективной манере. Метод не требует каких-либо специальных инструментов или освещение и могут быть извлечены с очень небольшой практики. Она включает в себя обезболивающее мышь, делая небольшой разрез на шее, чтобы визуализировать трахею, а затем вставить внутривенный катетер непосредственно. Небольшой разрез быстро закрыл с клеем ткани, и мыши могут восстановить. Квалифицированный студент или специалист может сделать инстилляций в среднем 2 мин / мышь. После того, как тОн рак установлено, существует потребность часто для количественного анализа гистологического легких. Традиционно патологи обычно не беспокоить, чтобы стандартизировать инфляции легких во время фиксации, и анализы часто основывается на балльной системе, что может быть весьма субъективным. Хотя это может иногда быть достаточно адекватными для грубых оценок размера опухоли легких, любой собственный стереологического количественное структуры легких или клеток требует воспроизводимый процедуру фиксации и последующего измерения объема легких. Здесь мы опишем простые надежные процедуры и фиксации легкие под давлением, а затем точного измерения фиксированного объема легких. Единственное требование состоит в лабораторных весах с точностью, что это в диапазоне от 1 мг-300 г. Процедуры, представленные здесь, таким образом, может значительно улучшить способность создавать, рассматривать и анализировать рак легких у мышей.
Введение
Для ряда причин, рак легких не был широко изучен в мыши. Одной из причин этого является то, что доступ к легких очень трудно в естественных условиях, и количественный анализ основных легких обычно не делается. Методы, описанные в этой статье, предназначены для исправления этой ситуации. В данном Цели описать простые методы, которые значительно помочь в настройке и анализа легких мышей с раком легких или других патологий. В то время как ни один из этих подходов не совершенно новые, они не были представлены вместе в виде отдельных методов в упрощенном виде как описано здесь.
Там было несколько рукописей, которые, описанных методов ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Следующий протокол описывает систему, которая хорошо работает в 20-35 г мышей. Метод может быть легко адаптирована к большим или меньшим мышей, просто изменив размер катетера. Все протоколы животных были утверждены университета Комитета по уходу и использованию животных Джона Хопкинса по.
1. Внушение легких
- Выберите коммерческого один дюйм длиной 20 г внутривенно канюли, чтобы использовать для интубации.
- Измените катетера вручную сгибая ее, чтобы создать небольшое искривление на кончике, как показано на рисунке 1.
- Обезболить мышь смесью кетамина (100 мг / кг) и ксилазина (15 мг / кг) вводили....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Процедура описания в протоколе первого само по себе не приведет к каким-либо обобщенных результатов. Это описывает только очень надежные средства, чтобы привить вещества непосредственно в трахею. Рисунок 7 показывает пример легкого, в котором трипанового синего вливали со способом, описанным здесь. Существует широкое распределение красителя, подобно тому, что было показано с другими красителями или индикаторов, приведенных непосредственно в трахею или мышей 11,12. Мы также использовали этот м.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Процедуры, описанные здесь, имеют несколько преимуществ. Во-первых необходимое оборудование является простым и недорогим. Во-вторых, интубации может быть быстро сделано с небольшим количеством ошибок. В-третьих, возможность устранить легкие при постоянном давлении, а затем измерить фиксированный объем легких позволяет правильно количественное структур или клеток в легких 10.
Одним из возможных недостатком интубации является малая хирургия. Это может ограничить способность повторит.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Лабораторные весы | Ohaus | Adventurer Pro Модель AV 313 | Другие весы можно использовать, если они имеют диапазон от 1 до 300 г |
| 20 г Люэровский катетер для внутривенного | Insylte | Несколько других возможных поставщиков, например, лабораторный флакон Jelco Optiva | |
| 500 мл | Различные Несколько | других возможных поставщиков |
Ссылки
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. J Appl Physiol. 87, 2362-2365 (1999).
- Walters, D. M., Wills-Karp, M., Mitzner, W.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
