Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Фотодинамическая терапия с Смешанное проводящий полимер / фуллерен наночастиц фотосенсибилизаторов

8.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53038

⸱

28 октября 2015 г.

 , 
1NanoScience Technology Center, University of Central Florida, 2Department of Chemistry, University of Central Florida, 3Department of Materials Science and Engineering, University of Central Florida, 4CREOL, The College of Optics and Photonics, University of Central Florida

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает метод изготовления проводящих полимерных наночастиц, смешанных с фуллереном. Эти наночастицы были исследованы на предмет их потенциального использования в качестве фотосенсибилизаторов следующего поколения для фотодинамической терапии (ФДТ).

Аннотация

В этой статье представлен метод изготовления и воспроизводимой оценки in vitro проводящих полимерных наночастиц, смешанных с фуллереном, в качестве фотосенсибилизаторов следующего поколения для фотодинамической терапии (ФДТ). Наночастицы образуются в результате гидрофобного взаимодействия полупроводникового полимера MEH-PPV (поли[2-метокси-5-(2-этилгексилокси)-1,4-фениленвинилена]) с фуллереновым PCBM (метиловый эфир фенил-C61-масляной кислоты) в присутствии несовместимого растворителя. MEH-PPV имеет высокий коэффициент экстинкции, что приводит к высоким темпам образования триплетов и эффективной передаче заряда и энергии на фуллереновую ПКБ. Последние процессы повышают эффективность системы PDT за счет образования триплетов и радикалов с помощью фуллерена, а также сверхбыстрой дезактивации возбужденного MEH-PPV. Представленные здесь результаты показывают, что эта сенсибилизирующая система наночастиц PDT очень эффективна и проявляет неожиданную специфичность к линиям раковых клеток.

Введение

В фотодинамической терапии (PDT) фотосенсибилизаторов вводят целевой ткани, и при воздействии на свет фотосенсибилизатора генерирует активные формы кислорода (АФК). Виды ROS, такие как синглетный кислород и супероксид может вызвать окислительный стресс и последующее повреждение конструкции клеток и тканей 1-4. Благодаря простоте применения этот метод активно исследуются и клинические испытания были проведены 5,6. Тем не менее, существенные вопросы, такие как темно-токсичности сенсибилизаторов, чувствительность пациента к свету (в связи с неизбирательным распределением сенсибилизатора), и гидрофобность сенсибилизаторов (что приводит к снижению биодоступности и потенциальной токсичности) острой остается.

Здесь мы приводим метод для изготовления и экстракорпоральное оценки проведения полимерные наночастицы, смешанные с фуллерена в качестве следующего поколения фотосенсибилизаторов для ФДТ. Наночастицы образованы себе агрегацииполупроводниковый полимер MEH-PPV (поли [2-метокси-5- (2-этилгексилокси) -1,4-фениленвинилен]) с фуллерена PCBM (фенил-С 61 кислоты метиловый эфир масляной), когда эти материалы, растворенное в совместимом растворитель быстро вводят в не-совместимым растворителем (рис 1А). Выбор MEH-PPV в полимере мотивируется его высоким коэффициентом экстинкции, что приводит к высоким темпам формирования триплетного и эффективной и сверхбыстрой зарядки и передачи энергии в фуллерена PCBM 7. Эти свойства идеально подходят для сенсибилизации синглетного кислорода и супероксида в формировании PDT.

Фуллерены, по сути, был применен в PDT и в молекулярной и наночастиц форме 8-13. Тем не менее, тяжелые цитотоксичность препятствует дальнейшему развитию 12. Здесь мы показываем, что инкапсуляции фуллерен в принимающей матрицы MEH-PPV с получением композитных наночастиц MEH-PPV / PCBM результаты в сенсибилизирующего материала PDT, что яS сути не цитотоксические, показывает специфику по отношению к раковым клеткам в связи с размера наночастиц и поверхностного заряда, а урожайность высоко эффективное лечение PDT при низких дозах из-за света с вышеупомянутыми фотофизических свойств.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Культивирование клеточных линий

  1. Оттепель TE 71 (Mouse тимуса эпителиальные клетки), MDA-MB-231 (клетки рака молочной железы клетки), А549 (клетки рака легкого человека) и OVCAR3 (Human яичников опухолевые клетки) путем проведения криогенной флаконов в теплой воде в течение менее 2 мин , Добавьте 10 мл DMEM, дополненной 10% FBS в каждую клеточную линию и центрифуги в течение 6 мин при 106 х г в.
  2. Аспирируйте подвеску и добавить 3 мл средства массовой информации к осадку. Смешайте клетки должным образом с помощью пипетки несколько раз. Добавить эту ячейку решение подогретого 7 мл DMEM, дополненной 10% FBS в колбы Т75 и держать колбы в увлажненной атмосфере 95% воздуха / 5% CO 2 при 37 ° С. Добавьте описание этого колбу проходом 0.
  3. Когда конфлюентности клеток достигает 80%, сбора клеток путем инкубации их с 0,05% трипсина в течение 10 мин. Нейтрализовать трипсина путем добавления равного количества средств массовой информации. Центрифуга это решение в течение 6 мин при 106 х г в. Снимите подвеску и добавить 3 мл свежей среды к нему. Смешайте WELл и передавать небольшое количество (100 мкл) в культуральную колбу, содержащую 7 мл среды. Выдержите колбу культуры в инкубатор. Этикетка колбу проходом 1.
  4. Культура клеточные линии до прохода 11 или 12.

2. Изготовление наночастиц

  1. Подготовка ~ 10 -6 М (скорректированного) неразбавленного MEH-PPV раствора
    1. В пробирку добавляют 1 мг поли [2-метокси-5- (2-этилгексилокси) -1,4-фениленвинилен] (MEH-PPV) с молекулярной массой (средняя Mn) 150,000-250,000 г / моль и 3 мл тетрагидрофуран (ТГФ) , Смесь перемешивают в течение 2 ч при нагревании при 80 ° С на горячей плите.
    2. Фильтр вышеуказанного раствора в новый флакон с помощью шприца 0,2 мкм фильтр. Добавьте это решение как «неразбавленном MEH-PPV раствора». Это решение будет принимать участие в подготовке наночастиц после тонкой настройки концентрации, как описано в шагах 2.1.3 и 2.1.4.
    3. Добавить 50 мкл неразбавленного MEH-PPV маточного раствора в 3 мл ТГФ, Добавьте это решение как «разбавляют MEH-PPV раствора». Трансфер в 1 см кварцевой кювете и измеряют поглощение при 495 нм с помощью УФ-спектроскопии по отношению.
    4. Если поглощение разбавленного MEH-PPV раствора выше, чем 0,17, разбавить в неразбавленном MEH-PPV маточного раствора, добавляя больше 1 мл ТГФ, в то время, и повторите шаг 2.1.3 до тех пор, измеряется оптическая плотность при 495 нм не в в диапазоне 0.13-0.17.
    5. Рассчитать молярность разбавленной MEH-PPV маточного раствора с помощью закона Ламберта-Бера, как показано ниже. Вот 0,15 поглощение используется в качестве примера для остальной части протокола (т.е.., Отрегулируйте все следующие расчеты основаны на наблюдаемой оптической плотности), то MEH-PPV коэффициент поглощения используется 10 7 М -1 см -1, а длина пути используется 1 см.
      А = ε xbxc (уравнение 1)
      (ε - молярный коэффициент экстинкции, А - оптическая плотность, б - длина пути, с - концентрация раствора)
      0.15 = 10 7 М -1 см -1 х 1 см хс (уравнение 2)
      с = 1,5 х 10 -8 М (уравнение 3)
      Использование этой концентрации, чтобы найти концентрацию неразбавленного MEH-PPV маточного раствора следующим образом:
      М 1 V 1 = М 2 V 2 (уравнение 4)
      0,15 х 10 -7 М х 3050 мкл = М 2 х 50 мкл (уравнение 5)
      М 2 = 9,15 х 10 -7 М (уравнение 6)
      Это концентрация 'скорректированной неразбавленной MEH-PPV маточного раствора ".
  2. Расчет массы MEH-PPV в скорректированной неразбавленного MEH-PPV раствора
    1. Рассчитывают массу MEH-PPV в 1 мл скорректированного неразбавленного раствора, как показано ниже с помощью молярность полученной в разделе 2.1.4, а молекулярная масса (M w) от MEH-PPV, который 10 6 г / моль.
      М = N / V (п -. Не родинок, В - объем в л) (уравнение 7)
      Таким образом, масса MEH-PPV в 1 мл регулировать ундiluted раствор является 9,15 х 10 -4 г.
  3. Смешивание PCBM в MEH-PPV
    1. Рассчитайте массу фенил-C 61 масляной кислоты метилового эфира (PCBM), которые будут добавлены в фондовый MEH-PPV решения, чтобы сделать 50 мас% PCBM легированного решение MEH-PPV, где 50 мас% PCBM определяется по отношению к массе из MEH-PPV (т.е. половина масса MEH-PPV). При использовании вес MEH-PPV, полученного в разделе 2.2.
      Масса PCBM / 9.15 х 10 -4 г MEH-PPV х 100% = 50% мас PCBM (уравнение 8)
      Масса PCBM = 4,57 х 10 -4 г (уравнение 9)
    2. Взвесьте 1 мг PCBM в пробирке и добавить 500 мкл ТГФ. Рассчитать концентрацию PCBM в этом растворе с использованием молекулярного веса, как PCBM 910,88 г / моль
      Молярность раствора PCBM = 0,001 г / (910,88 г / моль * 500 мкл) (уравнение 10)
      Молярность раствора PCBM = 2.19 х 10 -9 моль / мкл (уравнение 11)
    3. Рассчитайте объем раствора PCBM нужно добавить к скорректированы в неразбавленном виде MEН-PPV раствор, чтобы получить 50 мас% PCBM легированного MEH-PPV раствор в ТГФ с помощью молярность рассчитывается в шаге 2.3.2
      4.57 х 10 -4 г PCBM х 1 моль / 910,88 GX 1 мкл / 2,19 х 10 -9 моль = 229 мкл (уравнение 12)
      Добавить 229 мкл раствора в PCBM 1 мл неразбавленной скорректированной MEH-PPV раствора и хорошо перемешать.
  4. Приготовление наночастиц методом переосаждение
    1. Передача 1 мл смешанного MEH-PPV / PCBM раствора в 1 мл шприц с иглой, прикрепленной к нему.
    2. Быстро придать 1 мл смешанного раствора MEH-PPV / PCBM в 4 мл дистиллированной воды при перемешивании 1200 оборотов в минуту. Остановка перемешивании сразу же после инъекции. С помощью этих наночастиц без дальнейшей обработки.

3. Инкубация клеточных линий с наночастицами для визуализации

ПРИМЕЧАНИЕ: Все эксперименты изображений были завершены в 35 мм чашках Петри

  1. Поглощение nanopartiциклы в клеточных линиях
    1. Культура клеток линии до 12-го прохода. На 12-й проезд культуры клеток в 35 мм чашки Петри. Регулировка концентрации клеток, добавленных к 35 мм чашки Петри таким, что после 24 ч клетки 40% сплошности.
    2. На этом этапе удалить носитель DMEM с добавлением 10% FBS из чашек Петри, промыть клетки с 1x ДЗФР дважды, и добавьте 100 мкл суспензии наночастиц в 2 мл DMEM с чашки Петри.
    3. После 24 часов удалить DMEM / наночастиц суспензии из чашек Петри и мыть клетки с 1x DPBS 3 раза. Затем зафиксировать клетки путем инкубации 4% параформальдегидом в течение 10 мин. Вымойте дважды DPBS. Пятно клеток с 300 нм DAPI путем инкубации с красителем в течение 2 мин. Вымойте дважды DPBS. Тогда держите клеток в DPBS для визуализации.
  2. Обнаружение АФК
    1. Культура А549 и OVCAR3 клеточные линии в чашках Петри, 6 в клеточной линии, как объяснено в разделе 3.1.1. ЭтикеткеЧашки Петри, как показано в таблице 1.
    2. Добавить 100 мкл суспензии наночастиц в 2 мл DMEM до трех чашек Петри, как показано в таблице 1, и инкубируют в течение 24 ч. Для чашек Петри, которые будут получать доз света, омывающих клетки после 24 часов и приостановить клеток в HBSS (Хэнка сбалансированный солевой раствор) окрашивают свободных средств массовой информации.
    3. Разминка лампы солнечного симулятора в течение 15 мин. Поместите УФ-фильтр перед лампой, чтобы отфильтровать УФ-светом. Калибровка лампы с опорной солнечной батареи, регулируя мощность лампы, чтобы получить 0,5 солнце (50 мВт / см 2) интенсивности на поверхности чашки Петри. В данном конкретном установки, что состояние было достигнуто при 218 Вт мощности, подводимой к лампе.
    4. Поместите чашки Петри под лампой (открытой крышкой) в течение 60 мин, в результате чего светло дозе 180 Дж / ​​см 2, как показано в приведенных ниже расчетов:
      50 мВт / см 2 х 3600 сек / 1000 = 180 Дж / ​​см 2
    5. Удалить HBSS и без стирки дополнительно добавляют 2 мл DMEM, дополненной 10% FBS в чашках Петри. Инкубируйте клетки в течение еще 2 ч.
    6. Для положительного контроля инкубировать клетки с 100 мкМ перекиси водорода (H 2 O 2) в течение 30 мин.
    7. Пятно клетки во всех чашках Петри с конечной концентрации 5 мкМ обнаружения реагента ROS инкубацией клеток с красителем в течение 30 мин при 37 ° С.
    8. Зафиксировать клетки путем инкубации 4% параформальдегидом в течение 10 мин. Вымойте дважды DPBS. Пятно клеток с 300 нм DAPI путем инкубации с красителем в течение 2 мин. Вымойте дважды DPBS. Тогда держите клеток в DPBS для визуализации.
  3. Апоптоз и некроз П. И. и аннексином V FITC
    1. Культура каждого клеточной линии в 5 чашках Петри. Три из этих чашках Петри будет для эксперимента, а оставшиеся 2 чашки Петри будет контрольные образцы. Инкубируйте 3 чашки Петри для эксперимента с наночастицами, как еxplained в разделе 3.1.2. Контрольные образцы не инкубировали с наночастицами.
    2. После 24 ч инкубации следовать шаг 3.2.3.
    3. Поместите 3 экспериментальные чашки Петри под лампой (открытой крышкой) и снимите один на 20 мин, один на 40 мин и один в 60 мин. Это дает три образца, которые были под воздействием света доз 60, 120 и 180 Дж / ​​см 2, соответственно (расчета в разделе 3.2.4). Далее, управлять 180 Дж / ​​см 2 света дозировку на одну из управления чашках Петри. Это управление с легкой дозы, применяемой в отсутствие наночастиц. Не применять легкую дозу оставшихся контрольного образца (нет наночастиц и свет дозу прилагается).
    4. Заменить HBSS с DMEM среде с 10% FBS и держать чашки Петри в инкубаторе в течение 4 час.
    5. Пятно клетки в экспериментальных и контрольных чашках Петри с 20 мкл аннексина V FITC путем инкубации клеток с красителем в течение 15 мин. Вымойте дважды DPBS. Пятно Cлоктей с 300 нм DAPI, а также 300 нМ PI (пропидийиодидом) путем инкубации с красителями в течение 2 мин. Вымойте дважды DPBS. Тогда держите клеток в DPBS для визуализации.

4. Внутренняя цитотоксичность наночастиц

  1. Подсчет клеток и культивирование в 96-луночных планшетах
    1. Сбора клеток из колбы с культурой, удаляя материал и промывки клеток дважды DPBS последующей инкубацией клеток с 0,05% трипсина в течение 10 мин. Добавить 2 мл DMEM, дополненной 10% FBS к полученному раствору клеток. Смешайте раствор правильно разделить ячейки кластеров в синглеты.
    2. Возьмем 100 мкл клеточной суспензии и добавить к 900 мкл DMEM среде с 10% FBS. Хорошо перемешать. Поместите 10 мкл этой суспензии на гемоцитометре. Граф клеток с использованием гемоцитометра и регулировать концентрацию суспензии клеток в 4.1.1 до 5 х 10 4 клеток / мл.
    3. Возьмите 5 96-луночных планшетах помечены как 0 ч, 24 чг, 48 ч, 72 ч и 96 ч. Добавьте 50 мкл 5 х 10 4 клеток / мл растворов клеточных (TE 71 и А549) в лунки, как показано в таблице 2, при этом посев 2500 клеток / лунку. Сделайте ту же процедуру для OVCAR3 и MDA-MB-231 клеточных линий.
    4. Через 24 часа мыть скважин с 1x DPBS и добавить 50 мкл возрастающих концентраций наночастиц в скважинах, как показано в таблице 2. Подготовьте различные концентрации наночастиц путем добавления 20, 100 и 180 мкл суспензии наночастиц из 2.4.2 DMEM к получения конечного объема 2 мл, что дает концентрации наночастиц 0,4 х 10 -4 мг / мл, 2,0 х 10 -4 мг / мл и 3,6 х 10 -4 мг / мл, соответственно. Каждая ячейка имеет трех повторах линия для каждой концентрации наночастиц.
  2. Измерение жизнеспособности клеток в темно-
    1. Добавить 10 мкл МТТ в 0 ч пластины сразу после добавления наночастиц. Инкубируйте планшет в течение 4 часов для формазанового CrystALS, чтобы сформировать. Добавить 50 мкл раствора солюбилизации в лунки. Инкубируйте планшет в течение 6 ч, чтобы растворить кристаллы формазана.
    2. Измерить клеток жизнеспособности 0 ч пластине путем записи оптической плотности при 570 нм микропланшет-ридере с.
    3. В течение 24 часов пластины, мыть клетки с 1x DPBS и добавить 50 мкл средств массовой информации в каждую лунку после 24 ч инкубации с наночастицами. Добавить МТТ и прочитать табличку, как это описывается в 4.2.1 и 4.2.2.
    4. В течение 48 ч, 72 ч и 96 ч пластин, промыть клетки 1х DPBS и добавить 50 мкл среды в лунки после 24 ч инкубации с наночастицами. Инкубируйте клетки для остальных периодов времени.
    5. 4.2.5) Измерьте жизнеспособность клеток в определенных точках времени, как описано в 4.2.1 и 4.2.2.
    6. Повторите эксперимент полный 3 раза (п = 3)

5. Измерение Жизнеспособность После PDT

  1. Подсчет клеток и культивирование в 96-луночных планшетах.
    1. Этикетка набор 96-луночные планшеты, как показано в таблице 3, как для ТЕ 71 + A549 пластин и OVCAR3 + MDA-MB-231 пластинах. Компоновка пластин будет таким же, как показано на 4.1.3.
    2. Семенной 96-луночных планшетах с, как описано в разделе 4.1 с же виде, как показано в таблице 2, в разделе 4.1.2.
    3. После 24 ч добавить наночастиц на пластины, как описано в разделе 4.1.4.
    4. 24 ч после добавления наночастиц промыть клетки 1х DPBS и добавить 50 мкл HBSS в каждую лунку.
    5. Облучают пластины с соответствующими световых дозах, как описано в пункте 3.2.3.
    6. Заменить HBSS с 50 мкл DMEM среде с 10% FBS и инкубировать пластины для соответствующих периодов времени после ФДТ.
    7. После каждого периода времени определения жизнеспособности клеток, как описано в 4.2.1 и 4.2.2.

6. флуоресцентной микроскопии

  1. Поглощение наночастиц
    1. Включите фонарей микроскопомй лазер 30 мин до визуализации. Поставьте чашку Петри, содержащую фиксированные клетки (как описано в разделе 3.1) на столик микроскопа.
    2. Сбор флуоресценции от наночастиц и DAPI, используя фильтры, как показано в таблице 4. Перекрытие фазового контраста, наночастицы и DAPI изображения в программном обеспечении ImageJ.
  2. Обнаружение АФК
    1. Включите ламп микроскопа 30 мин до визуализации. Поставьте чашку Петри, содержащую клетки (как описано в разделе 3.2) на столик микроскопа.
    2. Сбор флуоресценции от наночастиц, DAPI, и АФК обнаружения реагента с помощью фильтров, как показано в таблице 4. Наложение фазового контраста, наночастицы, DAPI и ROS обнаруживая реагентов изображения в программном обеспечении ImageJ.
  3. Апоптоз и некроз П. И. и аннексином V FITC
    1. Включите ламп микроскопа 30 мин до визуализации. Поместите чашку Петри, содержащую клетки (как описано враздел 3.3) на столик микроскопа.
    2. Сбор флуоресценции от наночастиц, DAPI, PI, и Аннексином V FITC, используя фильтры, как показано в таблице 4. Наложение фазового контраста, наночастицы, DAPI, PI и Аннексин V FITC изображения в программном обеспечении ImageJ.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Поглощение и внутренняя цитотоксичность наночастиц

В 50 мас% смешанные наночастицы MEH-PPV / PCBM инкубировали с 71 ТЕ, MDA-MB-231, 549 и клеточные линии OVCAR3. Уровень PCBM смешивания была выбрана в качестве 50% по весу PCBM, который, как было показано, чтобы обеспечить идеальную переноса заряда и энергии между свойствами сопряженных полимеров и фуллеренов 14. Флуоресцентные изображения взаимодействие наночастиц показаны на рисунке 1В. Клетки ин...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Для достижения поглощение наночастиц было необходимо для поддержания некоторые критические меры, а изготовления наночастиц. 10 -6 М MEH-PPV раствор (смешивается с 50% мас PCBM) в ТГФ был готов впрыснуть в деионизированной воде, как это было отмечено, что концентрация этого раствора играет важную роль в определении размера наночастиц формируется. Концентрация была проверена UV-VIS-спектроскопии. Обратите внимание, что в шаге протокола 2.1.3 нужно было разбавлять первоначально приготовленный раствор MEH-PPV (в ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы выражают благодарность Национальному научному фонду (NSF) за финансовую поддержку этой работы в виде награды CAREER (CBET-0746210) и награды CBET-1159500. Мы хотели бы поблагодарить доктора Турксона (Университет Гавайского онкологического центра) и доктора Альтомаре (Университет Центрального медицинского колледжа Флориды) за помощь в выращивании клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Поли[2-метокси-5-(2-этилгексилокси)-1,4-фениленвинилен] (MEH-PPV)Sigma Aidrich536512-1Gсредний M<суб>н  150 000-250 000
[6,6]-фенил C61  метиловый эфир масляной кислоты (PCBM)Sigma Aidrich684449-500MG99,5%
Тетрагидрофуран (ТГФ)EMDTX0284-6Drisolv
1 мл шприцНациональная научная компания37510-1Для фильтрации раствора MEH-PPV
Шприцевой фильтрVWR28145-49525 мм, 0,2 &; m, шприц из ПТФЭ
1 млHamilton Company81320Для впрыскивания раствора MEH-PPV в воду с целью получения наночастиц
Модификация Dulbecco's Modification of Eagle's Medium/Ham's F-12 50/50 Mix (DMEM)Corning (VWR)45000-350
Сбалансированный раствор соли Хэнка без фенолового красного (HBSS)Quality Biological (VWR)10128-740
Фосфатно-солевой буфер Дульбекко, 1x без кальция и магния (DPBS)Corning (VWR)45000-436
Фетальная сыворотка крупного рогатого скота, обычная (инактивированная при нагревании) (FBS)Corning (VWR)45000-736
Трипсин ЭДТА 1x 0.25%Corning (VWR)45000-664Трипсин/2.21 мМ ЭДТА в HBSS без бикарбоната натрия, кальция и магния Протестировано на парвовирус свиньи 16
% параформальдегидЭлектронная микроскопия Наук 1571016% параформальдегида разбавляют до 4% путем добавления PBS
DAPI  Biotium VWR89139-054Ядерный краситель
5 мл пипеткиVWR82050-478
75 см2 колба для культурVWR82050-856для культивирования клеток
96-луночные планшетыVWR82050-771для анализов MTT
Чашки для культивирования тканей с вентиляционными отверстиямиGreiner Bio-One (VWR)82050-538
Йодид пропидиумаМолекулярные зондыP3566
Аннексин VFITC InvitrogenA13199краситель для апоптоза
Celltiter 96 non-R 1000 анализыPromega (VWR)PAG4000MTT
CellROX Green Reagent, для обнаружения окислительного стрессаInvitrogenC10444для АФК обнаружение
УФ-видимый спектрометрAgilent 8453
Флуоресцентный спектрометрNanoLog HoribaJobin Yvon
Динамическое рассеяние светаPD2000DLS, Прецизионный детектор
ИнкубаторNuAir DH Autoflow
Конфокальный микроскопZeiss Axioskop263X масляный погружной объектив
Эпилюминесцентный микроскопOlympus IX7160X водный иммерсионный объектив, объектив Andor Zyla sCMOS камера,
Solar SimulatorNewport 67005 Oriel Instruments
Reference solar cellOriel Стандарты СБИС: Инкорпорированный
считыватель микропланшетовBioTek Ex808
ГемоцитометрHausser Scientific Partnership3200Для подсчета клеток
>

Ссылки

  1. Dolmans, D., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
  2. Dougherty, T. J., et al. Photodynamic therapy. J Natl Cancer Inst. 90 (12), 889-905 (1998).
  3. Ferrari, M. Cancer nanotechnology: Opportunities and challenges. Nat Rev Cancer. 5 (3), 161-171 (2005).
  4. Oleinick, N. L., Morris, R. L., Belichenko, T. The role of apoptosis in response to photodynamic therapy: what, where, why, and how. Photochem Photobiol Sci. 1 (1), 1-21 (2002).
  5. Ormond, A., Freeman, H. Dye Sensitizers for Photodynamic Therapy. Materials. 6 (3), 817-840 (2013).
  6. Pass, H. I. Photodynamic Therapy in Oncology - Mechanisms and Clinical Use. J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).
  7. Sariciftci, N. S., Smilowitz, L., Heeger, A. J., Wudl, F. Photoinduced electron transfer from a conducting polymer to buckminsterfullerene. Science. 258 (5087), 1474-1476 (1992).
  8. Sperandio, F. F., et al. Photoinduced electron-transfer mechanisms for radical-enhanced photodynamic therapy mediated by water-soluble decacationic C-70 and C84O2 Fullerene Derivatives. Nanomed-Nanotechnol. 9 (4), 570-579 (2013).
  9. Fan, J. Q., Fang, G., Zeng, F., Wang, X. D., Wu, S. Z. Water-Dispersible Fullerene Aggregates as a Targeted Anticancer Prodrug with both Chemo- and Photodynamic Therapeutic Actions. Small. 9 (4), 613-621 (2013).
  10. Grynyuk, I., et al. Photoexcited fullerene C-60 disturbs prooxidant-antioxidant balance in leukemic L1210 cells. Materialwiss Werkstofftech. 44 (2-3), 139-143 (2013).
  11. Liu, X. M., et al. Separately doped upconversion-C-60 nanoplatform for NIR imaging-guided photodynamic therapy of cancer cells. Chem Commun. 49 (31), 3224-3226 (2013).
  12. Trpkovic, A., Todorovic-Markovic, B., Trajkovic, V. Toxicity of pristine versus functionalized fullerenes: mechanisms of cell damage and the role of oxidative stress. Arch Toxicol. 86 (12), 1809-1827 (2012).
  13. Chen, Z. Y., MA, L. J., Liu, Y., Chen, C. Y. Applications of Functionalized Fullerenes in Tumor Theranostics. Theranostics. 2 (3), 238-250 (2012).
  14. Park, S. H., et al. Bulk heterojunction solar cells with internal quantum efficiency approaching 100%. Nat Photonics. 3 (5), 297-302 (2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Проводящие полимерные наночастицыфуллерен PCBMсинтез наночастицметод осажденияанализ клеточного захватадетектирование АФКМТТ-тестфлуоресцентная визуализациясолнечный симулятор
Фотодинамическая терапия с Смешанное проводящий полимер / фуллерен наночастиц фотосенсибилизаторов
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.