Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Композитные Леса межфазного полиэлектролитных волокон для временного Controlled Release биомолекул

8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53079

⸱

19 августа 2015 г.

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, National University of Singapore, 2Mechanobiology Institute, Singapore, National University of Singapore, 3Department of Surgery, National University of Singapore

В этой статье

Краткое содержание

Скаффолды для тканевой инженерии должны повторять сложное биохимическое и биофизическое микроокружение клеточной ниши. В данной работе мы показываем использование волокон комплексообразования полиэлектролитов между фазами в качестве платформы для создания композитных многокомпонентных полимерных каркасов с устойчивым биохимическим высвобождением.

Аннотация

Различные скаффолды, используемые в тканевой инженерии, требуют контролируемой биохимической среды, чтобы имитировать физиологическую клеточную нишу. Волокна межфазного полиэлектролитного комплексообразования (IPC) могут использоваться для контролируемой доставки различных биологических агентов, таких как низкомолекулярные препараты, клетки, белки и факторы роста. Простота методологии изготовления волокон ИПК обеспечивает гибкость в его применении для контролируемой доставки биомолекул. В данной статье мы описываем метод включения волокон ИПК в два различных полимерных каркаса, гидрофильный полисахарид и гидрофобный поликапролактон, для создания многокомпонентного композитного каркаса. Мы показали, что волокна ИПК могут быть легко встроены в эти полимерные структуры, повышая способность к пролонгированному высвобождению и улучшая сохранность биомолекул. Мы также создали композитный полимерный каркас с топографическими сигналами и устойчивым биохимическим высвобождением, который может оказывать синергетическое воздействие на поведение клеток. Композитные полимерные каркасы с волокнами IPC представляют собой новый и простой метод воссоздания клеточной ниши.

Введение

Внеклеточный матрикс обладает врожденными биохимическими и биофизическими сигналами, которые управляют поведением клеток. Имитация этого физиологического трехмерного (3D) микроокружения является широко изученной стратегией в регенеративной медицине и приложениях тканевой инженерии. Например, как натуральные, так и синтетические субстраты были модифицированы с помощью топографических сигналов в качестве средства имитации биофизической клеточной среды. 1 Например, каркасы из поликапролактона (PCL) могут быть легко структурированы путем литья на структурированные подложки PDMS. 2 Однако большинство синтетических каркасов неадекватно воспроизводят контролируемую биохимическую среду in vivo. Объемная или поверхностная модификация синтетических материалов представляет собой только биохимические сигналы для прикрепления клеток, но все еще не имеет временной регуляции биохимической доставки. 3 Таким образом, существует потребность в оптимальных каркасах, которые могут имитировать регулируемую во времени биохимическую систему доставки внеклеточного матрикса.

Биохимические системы доставки, такие как микросферы, страдают от проблем потери биологической активности и низкой эффективности встраивания из-за тяжести и сложности многоступенчатого процесса синтеза. 4-6 Доказано, что альтернативные методы, использующие одностадийный метод изготовления и инкорпорации, обладают превосходным потенциалом для создания благоприятной биохимической микросреды без сопутствующей неэффективности инкорпорации и потери биологической активности. Одним из жизнеспособных решений является использование волокон межфазного полиэлектролитного комплексообразования (IPC) для доставки и защиты биологических агентов. Когда два противоположно заряженных водных раствора полиэлектролита соединяются, волокна IPC могут быть вытянуты из границы раздела. Практически любой тип гидрофлиевой биомолекулы в водном растворе может быть добавлен либо в отрицательно, либо в положительно заряженный раствор полиэлектролита, что облегчает включение полезных биомолекул в волокно ИПК в процессе комплексообразования. Кроме того, для этого процесса требуются только водные условия и условия окружающей среды, что снижает риск потери биологической активности. С помощью этого метода были успешно доставлены активные факторы роста2,7 даже клетки8,9. Кроме того, простой метод формования волокон IPC позволяет придавать им любую форму и ориентацию. Стабильность таких волокон была положительной при их включении как в гидрофобные2, так и в гидрофильные полимеры7 для создания композитных каркасов. Эти композитные каркасы с волокнами IPC полезны для создания физиологически значимой биохимической среды, обеспечивая при этом физическую опору для клеток.

В этом исследовании мы показываем метод включения волокон IPC в гидрофильный и гидрофобный каркас с топографией для контролируемого высвобождения активных биомолекул. В качестве доказательства концепции мы включаем волокна IPC, изготовленные из хитозана и альгината, в биосовместимый, неиммуногенный и неантигенный гидрофильный гидрогель пуллулан-декстрана или биосовместимый поликапролактон-гидрофобный каркас.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка растворов полиэлектролитов

  1. Очищают хитозан, как подробно описано в Liao др. Вкратце, создать 1% (вес / объем) раствора хитозана в 2% (об / об) уксусной кислоты и с помощью вакуум-фильтра класса 93 фильтровальную бумагу. Нейтрализовать фильтрат с помощью 5M раствора NaOH, пока рН не стабилизировалась 7. Центрифуга Осажденный хитозан при 1200 х г в течение 10 мин. Слейте супернатант и добавить деионизированную воду для мытья хитозана. Повторите центрифугирования и стиральные шаг еще два раза. Замораживание осажденного хитозана при -80 ° C и лиофилизуют O / N для получения очищенной форме. Храните очищенный хитозан в осушенной кабинета.
  2. Взвесить 1 г очищенного хитозана в стерильной ткани блюдо культуры. Поместите хитозан в культуре ткани блюдо как можно ближе к УФ-лампе в кабинете биологической безопасности и подвергать воздействию УФ света в течение 15 мин. Использование стерильного пинцета, поместить стерилизованные хитозан в стеклянной таре. Растворите хитозан использованием фильтруют 0.15M уксусной кислоты до конечной концентрации от 0,5% до 1% (вес / объем).
  3. Взвесить 0,1 г соли альгиновой кислоты натрия и растворяют в 10 мл дистиллированной деионизированной (DDI) воды, чтобы получить 1% (вес / объем) раствора. Смешайте соль альгиновой кислоты натрия в течение по крайней мере 2 ч на вихревом смесителе, чтобы обеспечить полное растворение. Фильтр альгинат решение путем шприцевой фильтр 0,2 мкм. Хранить альгината раствора при 4 ° С.
  4. Восстановить человеческий рекомбинантный факторы роста, такие как фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) или бета - фактора роста нервов (ФРН), рекомендованные производителем.

2. Нанесение IPC волокон

  1. Смешайте белки, факторы роста или другие биомолекулы в 10-20 мкл аликвоты раствора полиэлектролита, который имеет аналогичную суммарный заряд. Биологические молекулы с чистой отрицательный заряд (например бычьего сывороточного альбумина [BSA]) должны быть смешаны с альгината раствора. Биологические молекулы с положительного заряда (например, VEGF) должны быть смешаны сраствор хитозана.
  2. Поместите небольших аликвот (10-20 мкл) хитозана и альгината на устойчивую плоскую поверхность, которая покрыта парафином. Капельки хитозана и альгината должны быть размещены в непосредственной близости, но не в контакте друг с другом.
  3. Слегка опустите каждый наконечник на пару щипцов в каплях хитозана и альгината. Принесите капельки полиэлектролитов вместе, зажимая пинцетом. Когда капли приходят в контакт друг с другом, медленно тянуть щипцы вертикально вверх, чтобы сделать волокно IPC от поверхности раздела двух капель (фиг.1А).
  4. Осторожно поместите конец нарисованной МПК волокна на щипцов на коллекторе, например, плоской полимерной матрице, прикрепленной на вращающейся оправке (см раздел 3 и 4). Поверните оправку с фиксированной скоростью 10 мм / сек, чтобы позволить формирование форму и beadless IPC волокон. Увеличение скорости рисования волокна IPC будет формировать шарики, которые вызовет мгновенного высвобождения включеныбиохимические и досрочное прекращение волокна. 10
  5. Для определения эффективности регистрации, сбора все остальные жидкости остается на парафильмом путем разбавления 500 мкл 1X фосфатным буферным раствором (PBS). Измерить содержание белкового фактора роста или в остатке через BCA анализа (для BSA), ELISA (для VEGF и NGF) или соответствующий анализа для обнаружения включены биомолекулы.

3. Изготовление композитных гидрогеля строительные леса пуллулана-декстрана (PD) полисахарида и IPC волокон

  1. Изготовление жертвенный пуллулановыми рамки для МПК коллекции волокна
    1. Взвесить пуллулановыми полисахарид и смешать с дистиллированной деионизированной (DDI) воды, чтобы создать 20% (вес / объем) водного раствора. Смешайте пуллулан решение O / N, чтобы обеспечить однородность.
    2. В ролях 15 г пуллулана раствора в 10 см диаметр тканевой культуры полистирола (ТКТ) блюдо. Высушите пуллулан решение O / N на 37 ° C. Разрежьте пуллулановыми фильмов на 7мм х 7 мм квадратных кадров.
  2. Подготовка пуллулана декстран решение полисахарид
    1. Создание 30% (вес / объем) раствора полисахаридов пуллулановый и декстран (3: 1 соотношении) в воде DDI. Смешайте O / N, чтобы обеспечить однородность раствора полисахарида. Медленно добавляют в бикарбоната натрия в растворе полисахарида, чтобы достичь конечной концентрации 20% (вес / объем). Смешайте O / N, чтобы обеспечить гомогенность раствора. Хранить раствора полисахарида при 4 ° С.
  3. Сбор IPC волокна на пуллулана кадра
    1. Прикрепите жертвенный пуллулановыми кадр (раздел 3.1), используя крокодил. Придерживайтесь крокодил и пуллулановыми кадр на конце вращающейся оправке с использованием пластиковым покрытием клейкой ленты. Поверните оправку с наклеенной рамы с постоянной скоростью 10 мм / сек. Пуллулан рамка может быть прикреплена на вращающейся оправке в желаемых направлениях.
  4. Нарисуйте волокна IPC, используя пару щипцов (раздел 1) и АТТАКч обращается конец волокна IPC на вращающейся пуллулана кадра. Draw волокна IPC с постоянной скоростью. При достижении концом волокна МПК, высушить волокно на структуре конструкт O / N при комнатной температуре.
  5. Встраивание IPC волокон в ПД гидрогеля эшафот
  6. Для сшивания каждый грамм декстрана пуллулана раствору добавляли 100 мкл 11% (вес / объем) натрия Триметафосфат водного раствора и гидроксида 100 мкл 10 М натрия. 7 Смешайте раствор при 60 оборотах в минуту с использованием stirplate от 1 до 2 мин. После добавления триметафосфат натрия и гидроксида натрия, раствора полисахарида почти сразу сшивания. Вылейте вязкий раствор полисахарида на конструкции волокон на структуре полностью вставлять волокна IPC. Инкубируйте в сочетании пуллулановый-декстран-IPC волокна (PD-IPC) при 60 ° С в течение 30 мин с образованием химически сшитых композиционных каркасов (фиг.1В).
  7. ВНИМАНИЕ: Выполните шаг 3.3.2 в вытяжном шкафу и использовать соответствующее защитное следумат ветствующую защитную эк как уксусная кислота является агрессивной и воспламеняется.
  8. Чтобы вызвать образование пор в строительные леса PD-МПК, погрузить весь каркас в 20% (вес / объем) уксусной кислоты в течение 20 мин.
  9. Удалить непрореагировавших реагентов моющими ПД-МПК лесов в 1X PBS в течение 5 мин при встряхивании при 100 оборотах в минуту. Повторите этот шаг в 2 раза.
  10. Удалить излишки PBS и немедленно заморозить PD-МПК каркасов при -80 ° CO / N. Лиофилизировать Строительные леса, по крайней мере 24 ч перед использованием в любых контролируемым высвобождением или биоактивность анализов.

4. Изготовление композитных строительные леса из PCL и IPC волокон

ВНИМАНИЕ: дихлорметан опасные материалы. Используйте вытяжку и средства индивидуальной защиты при обращении дихлорметан.

  1. Создание нетронутые и узорчатые PDMS субстраты
    1. Создать первозданную полидиметилсилоксана (PDMS) эластомерный субстрат, используя кусок ПСТК желаемого размера с помощью мягкой процесс литографии. Создать Паттиrned PDMS субстратов с использованием стандартных методов мягкие литографических на поли (метилметакрилата) шаблонов с нужной топографии. 12
  2. Изготовление жертвенный PCL рамки для МПК коллекции волокна
    1. Взвесить PCL и растворить в дихлорметане, чтобы создать 0,9% (вес / объем) раствора. На каждый 1 см 2 площади подложки PDMS, падение 500 мкл 0,9% раствора PCL. Разрешить все растворителе дихлорметане полностью испариться в вытяжном шкафу. Повторите процесс литья 0,9% PCL сгущаться фильм до желаемой толщины. Удалить высушенной пленки PCL из PDMS подложки. Создать отверстие в PCL кадра с использованием подходящего размера перфоратор. 2
  3. Сбор IPC волокна на раме PCL
    1. Прикрепите жертвенный PCL кадр с отверстием (с 4.2.1) на крокодил. Придерживайтесь крокодил на вращающейся оправке с помощью пластиковым покрытием клейкой ленты. Прикрепите нарисованный конец волокна МПК на FRAM PCLе перед началом вращения с постоянной скоростью 10 мм / сек (Раздел 2). После окончания МПК волокна чертеже, высушить волокно на структуре конструкция O / N при 4 ° C.
  4. Встраивание волоконно-на-кадр конструкции в узорной PCL подложки
    1. Бросьте 500 мкл 0,9% раствора PCL на PDMS подложки для создания нетронутой или узорной PCL базу, как требуется. Литой несколько слоев 0,9% раствора PCL, чтобы получить каркас с желаемой толщины. Разрешить все растворителе дихлорметане полностью испариться в вытяжном шкафу.
    2. Поместите волокна на структуре конструкцию (раздел 4.3.1) на верхней части основания PCL. Добавить 0,9% раствор PCL на волоконно-на-кадр построить несколько раз, чтобы получить желаемую толщину и полностью встроить IPC волокон, изготовления PCL-IPC композитный каркас (рис 1в).

5. Измерение высвобождения биологических агентов из композитных МПК строительные леса

  1. Поместите композит PD-МПК илиPCL-IPC леса и автономные IPC волокна отдельно в 24-луночного планшета.
  2. Погрузитесь на эшафот и автономные IPC волокна с 500 мкл 1X PBS. Инкубируйте образцы при 37 ° С. Соберите PBS в различные моменты времени (пресс-релиз) и заменить 500 мкл 1X PBS.
  3. Измерение количества белка или фактора роста в выпуске массовой информации с использованием BCA анализ (BSA), ELISA (VEGF и NGF) или другое подходящее для анализа, чтобы определить накопленный профиль высвобождения для объединенной биомолекулы.

6. Посев клеток на композитных IPC строительные леса для тестирования биологической активности разрешением биологических агентов

  1. Стерилизовать лиофилизированное PD-IPC или PCL-IPC композитных строительных лесов, используя ультрафиолетовый свет в кабинете биологической безопасности, по крайней мере 20 мин.
  2. Используйте стандартные методы клеточной культуры для получения суспензии клеток в 2 х 10 5 клеток в 200 мкл среды роста. Семенной концентрированный суспензии клеток на композитных строительных лесов. ОтрядеR 20 мин, пополнить объем питательной среды, чтобы полностью погрузить каркасов.
  3. Измерить активность клеток через стандартные методы, такие как Alamar синего метаболической активности анализа, разрастание нейритов РС12 анализа или иммунофлюоресценции.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В этой статье, мы стремились создавать составные каркасы с IPC волокон для пролонгированного высвобождения различных биомолекул. Характеристики биомолекул, используемых в этом исследовании, приведены в таблице 1. IPC волокна были впервые встроены в гидрофильной PD гидрогеля для создания PD-IPC композитный каркас (Фигура 1В). Модель молекулы БСА был впервые опробован для определения возможности использования композитной каркас для контролируемого высвобождения биомолекул. БСА была включе...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

IPC волокна образованы взаимодействием двух противоположно заряженных полиэлектролитов. Процесс использует извлечение комплекса с интерфейсом полиэлектролитов, облегчая процесс самосборки для формирования стабильной волокна. Механизм формирования МПК волокна гарантирует, что любой биомолекулы добавлены в одинаковым уровнем заряда полиэлектролита могут быть включены во время процесса комплексообразования. 10,11 И наоборот, добавление биомолекулы в противоположно заряженного полиэлектролита приведет к мгновенно...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана Сингапур Национального исследовательского фонда под управлением одной из своих научно-исследовательских центров передового опыта, в Mechanobiology института, Сингапур. MFAC поддерживается Агентством по науке, технологиям и исследованиям (Сингапур) и Национальным агентством по исследованиям (Франция) совместной программы под номером 1122703037. проекта BKKT поддерживается в Mechanobiology института. Мы благодарим г-на Даниэля HC Вонг для корректуры рукопись и г-жу Рассвет JH Neo для оказания помощи в производстве видео.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Пуллулан Hayashibara Inc Окаяма ЯпонияМолекулярная масса (МВт) 200 кДа. Этот материал представляет собой пуллулан фармацевтического качества, используемый для изготовления рам пуллуланов и скаффолдов PD-IPC.
ДекстранСигма ОлдричD1037МВт 500 кДа. Этот материал больше не производится компанией Sigma Aldrich. В качестве альтернативы предлагается каталожный номер 31392 (Sigma Aldrich). Этот материал используется для изготовления скаффолдов PD-IPC.
Бикарбонат натрия Sigma AldrichS5761Бикарбонат натрия необходимо медленно добавлять в раствор полисахарида пуллулан-декстрана. Быстрое добавление бикарбоната натрия приведет к выпадению осадков.
Триметафосфат натрияSigma AldrichT5508Это химическое вещество гигроскопично и должно храниться в шкафу для осушения. Водный раствор триметафосфата натрия необходимо всегда делать свежим.
Гидроксид натрияSigma AldrichS5881Этот материал опасен и с ним необходимо обращаться с надлежащими защитными средствами, такими как нитриловые перчатки.
ХитозанСигма Олдрич448877МВт 190-310 кДа. Степень ацетилирования от 75% до 85%. Очистка хитозана требуется для создания стабильных волокон ИПК.
Уксусная кислотаMerckЭто может быть заменено другим типом бренда. Этот материал является коррозионным и легковоспламеняющимся. При работе с этим химическим веществом в вытяжном шкафу необходимо надевать защитные средства, такие как лицевой щиток, нитриловые перчатки, лабораторный халат и бахил.
Альгиновая кислота натриевая соль из бурых водорослей, низкой вязкостиSigma AldrichA2158Растворить в воде на ночь. Профильтровать через стерильные 0,2  &микро; m Шприц фильтруйте перед использованием. Хранить при температуре 4 °C.
Бычья сыворотка АльбуминСинофарм Химический реагентРастворите в стерильном PBS и отфильтруйте с использованием 0,2 & микро; m шприцевой фильтр перед использованием. 
Набор для анализа BCAPierce23225Этот набор использовался для измерения высвобождения BSA из каркасов PD-IPC.
Фактор роста рекомбинантного эндотелия сосудов человекаR& D системы293-VEРастворить фактор роста в 0,2% растворе гепарина до конечной концентрации 5  мг/мл
Гепарин Натриевая соль из свининыSigma AldrichH3393Это может быть заменено на другой тип бренда. Растворите соль гепарина в стерильной воде в конечной концентрации 1% и профильтруйте через 0,2°; m шприцевой фильтр перед использованием. 
Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC)LonzaC2517AЭтот тип первичных клеток был использован в анализе для определения биологической активности VEGF после высвобождения из скаффолдов PD-IPC.
Alamar blueLife TechnologiesDAL1025Используется для измерения метаболической активности клеток. Инкубируйте Аламар синий с клетками и выдерживайте в стандартных условиях клеточной культуры от 2 до 4 часов. Измерьте поглощение на длине волны 570 нм, чтобы определить процентное снижение уровня аламарского синего, которое коррелирует с активностью клеток.
ScanVac Coolsafe LyophilizerLabogene7.001.200.060Это непрограммируемая сублимационная сушилка, которая работает при температурах от -105 до -110  °C. Его можно заменить другими стандартными лабораторными лиофилизаторами.
Поликапролактон (PCL)Sigma Aldrich181609МВт 65 кДа. Он больше не производится компанией Sigma Aldrich. Это может быть заменено на Sigma Aldrich каталожный номер 704105.
ДихлорметанSigma AldrichV800151Это может быть заменено на другой вид бренда. Этот материал опасен и должен работать в вытяжном шкафу. При работе с этим химическим веществом необходимо постоянно носить защитное снаряжение.
Полидиметилсилоксан (PDMS; 184 Набор силиконовых эластомеров)Dow Corning(240)4019862В комплект эластомеров входит полимерная основа и сшиватель. Смешивание полимерной основы и сшивающего агента в разных соотношениях приведет к разной жесткости PDMS.
Человеческий рекомбинантный фактор роста бета-нервов (NGF)R& D systems256-GFВосстановлено в стерильной воде DI до конечной концентрации 100  &микро; g⁠/⁠мл. Аликвоту и хранить при -20°С; C до использования.
Мезенхимальные стволовые клетки человека (hMSC)CambrexЭтот тип клеток был использован в анализе для определения синергетического эффекта NGF и нанотопографии.
Клетки феохромоцитомы крысы PC12 ATCCЭтот тип клеток был использован в анализе роста нейритов для определения биологической активности NGF. После воздействия на высвобождающие среды с NGF измерьте количество клеток с нейритными расширениями и нормализуйте до общего количества клеток.
Фильтровальная бумага марки 93ВатманZ699675Применяется для очистки хитозана после его осаждения гидроксидом натрия при рН 7.
Центрифуга с поворотным ведромEppendorf5810RДля использования во время очистки хитозана с использованием скорости 1 200 x g.
Двигатель с оправкой, вращающейся с постоянной скоростьюRhymebusRM5EДвигатель используется для изготовления волокон IPC на пуллулане или раме PCL.
Фосфатно-солевой буферFirstBaseСтерилизовать через фильтрацию (0,2 &; m filter) и автоклав. 
Чашка из полистирола для культуры тканей диаметром 10 мм (TCPS)GreinerЧашка TCPS используется для литья рамы пуллулана.
Человеческий набор VEGF ELISAR& D системыDVE00Набор ELISA используется для обнаружения VEGF в разделительной среде.
Набор для ИФА человекаR& D systemsDY256Набор ELISA используется для обнаружения NGF в разделительной среде.
Клейкая лента с пластиковым покрытиемBel-Art9040336Клейкая лента используется для надежного приклеивания зажима типа «крокодил» к вращающейся оправке

Ссылки

  1. Annabi, N., Tamayol, A., et al. 25th Anniversary Article: Rational design and applications of hydrogels in regenerative medicine. Adv. Mater. 26 (1), 85-124 (2014).
  2. Teo, B. K. K., Tan, G. D. S., Yim, E. K. F. The synergistic effect of nanotopography and sustained dual release of hydrophobic and hydrophilic neurotrophic factors on human mesenchymal stem cell neuronal lineage commitment. Tissue Eng. Part A. 20 (15-16), 2151-2161 (2014).
  3. Lee, K., Silva, E. A., Mooney, D. J. Growth factor delivery-based tissue engineering: general approaches and a review of recent developments. J. R. Soc. Interface. 8 (55), 153-170 (2011).
  4. Sun, Q., Chen, R. R., Shen, Y., Mooney, D. J., Rajagopalan, S., Grossman, P. M. Sustained vascular endothelial growth factor delivery enhances angiogenesis and perfusion in ischemic hind limb. Pharm. Res. 22 (7), 1110-1116 (2005).
  5. Rui, J., Dadsetan, M., et al. Controlled release of vascular endothelial growth factor using poly-lactic-co-glycolic acid microspheres: in vitro characterization and application in polycaprolactone fumarate nerve conduits. Acta Biomater. 8 (2), 511-518 (2012).
  6. King, T. W., Patrick, C. W. Development and in vitro characterization of vascular endothelial growth factor (VEGF)-loaded poly(DL-lactic-co-glycolic acid)/poly(ethylene glycol) microspheres using a solid encapsulation/single emulsion/solvent extraction technique. J. Biomed. Mater. Res. 51 (3), 383-390 (2000).
  7. Cutiongco, M. F. A., Tan, M. H., Ng, M. Y. K., Le Visage, C., Yim, E. K. F. Composite pullulan-dextran polysaccharide scaffold with interfacial polyelectrolyte complexation fibers: A platform with enhanced cell interaction and spatial distribution. Acta Biomater. 10 (10), 4410-4418 (2014).
  8. Yow, S. Z., Quek, C. H., Yim, E. K. F., Lim, C. T., Leong, K. W. Collagen-based fibrous scaffold for spatial organization of encapsulated and seeded human mesenchymal stem cells. Biomaterials. 30 (6), 1133-1142 (2009).
  9. Yim, E. K. F., Wan, A. C. A., Le Visage, C., Liao, I. C., Leong, K. W. Proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cell encapsulated in polyelectrolyte complexation fibrous scaffold. Biomaterials. 27 (36), 6111-6122 (2006).
  10. Liao, I. C., Wan, A. C., Yim, E. K. F., Leong, K. W. Controlled release from fibers of polyelectrolyte complexes. J. Control. Release. 104 (2), 347-358 (2005).
  11. Wan, A. C. A., Liao, I. C., Yim, E. K. F., Leong, K. W. Mechanism of fiber formation by interfacial polyelectrolyte complexation. Macromolecules. 37 (18), 7019-7025 (2004).
  12. Yim, E. K. F., Reano, R., Pang, S., Yee, A., Chen, C., Leong, K. W. Nanopattern-induced changes in morphology and motility of smooth muscle cells. Biomaterials. 26 (26), 5405-5413 (2005).
  13. Sun, H., Xu, F., Guo, D., Yu, H. Preparation and evaluation of NGF-microsphere conduits for regeneration of defective nerves. Neurol. Res. 34 (5), 491-497 (2012).
  14. Simón-Yarza, T., Formiga, F. R., Tamayo, E., Pelacho, B., Prosper, F., Blanco-Prieto, M. J. PEGylated-PLGA microparticles containing VEGF for long term drug delivery. Int. J. Pharm. 440 (1), 13-18 (2013).
  15. Patel, Z. S., Ueda, H., Yamamoto, M., Tabata, Y., Mikos, A. G. In vitro and in vivo release of vascular endothelial growth factor from gelatin microparticles and biodegradable composite scaffolds. Pharm. Res. 25 (10), 2370-2378 (2008).
  16. Sun, H., Xu, F., Guo, D., Liu, G. In vitro evaluation of the effects of various additives and polymers on nerve growth factor microspheres. Drug Dev. Int. Pharm. 40 (4), 452-457 (2014).
  17. Lee, P. I. Kinetics of drug release from hydrogel matrices. J. Control. Release. 2, 277-288 (1985).
  18. Cutiongco, M. F. A., Choo, R. K. T., Shen, N. J. X., Chua, B. M. X., Sju, E., Choo, A. W. L., Le Visage, C., Yim, E. K. F. Composite scaffold of poly(vinyl alcohol) and interfacial polyelectrolyte complexation fibers for controlled biomolecule delivery. Front. Bioeng. Biotechnol. 3 (3), 1-12 (2015).
  19. Yow, S. Z., Lim, T. H., Yim, E. K. F., Lim, C. T., Leong, K. W. A 3D Electroactive Polypyrrole-Collagen Fibrous Scaffold for Tissue Engineering. Polymers. 3 (1), 527-544 (2011).
  20. Leong, M. F., Toh, J. K. C., et al. Patterned prevascularised tissue constructs by assembly of polyelectrolyte hydrogel fibres. Nat. Commun. 4, 2353(2013).
  21. Di Benedetto, F., Biasco, A., Pisignano, D., Cingolani, R. Patterning polyacrylamide hydrogels by soft lithography. Nanotechnology. 16 (5), S165(2005).
  22. Revzin, A., Russell, R. J., et al. Fabrication of poly(ethylene glycol) hydrogel microstructures using photolithography. Langmuir. 17 (18), 5440-5447 (2001).
  23. Yim, E. K. F., Liao, I. C. Tissue compatibility of interfacial polyelectrolyte complexation fibrous scaffold: evaluation of blood compatibility and biocompatibility. Tissue Eng. Part A. 13 (2), 423-433 (2007).
  24. Chaouat, M., Le Visage, C., Autissier, A., Chaubet, F., Letourneur, D. The evaluation of a small-diameter polysaccharide-based arterial graft in rats. Biomaterials. 27, 5546-5553 (2006).
  25. Eshraghi, S., Das, S. Mechanical and microstructural properties of polycaprolactone scaffolds with one-dimensional, two dimensional, and three-dimensional orthogonally oriented porous architectures produced by selective laser sintering. Acta Biomater. 6, 2467-2476 (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Контролируемая доставка биомолекулкомпозитные полимерные скаффолдыжертвенный каркасформирование волокон IPCполисахаридный скаффолдполикапролактоновый скаффолдпролонгированное высвобождениетопографические подсказкисохранение биомолекул
Композитные Леса межфазного полиэлектролитных волокон для временного Controlled Release биомолекул
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.