Method Article

Анализ Разработка зуб Микроб иннервации Использование Микрожидкостных Сотрудничество культуры устройств

DOI:

10.3791/53114

August 14th, 2015

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Кокультуры представляют собой ценный метод изучения взаимодействий между нервами и тканями и органами-мишенями. Микрофлюидные системы позволяют совместно культивировать ганглии и целые развивающиеся органы или ткани в различных питательных средах, тем самым представляя собой ценный инструмент для изучения in vitro перекрестных помех между нейронами и их мишенями.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Иннервация играет ключевую роль в разработке, гомеостаза и регенерации органов и тканей. Тем не менее, механизмы, лежащие в основе этих явлений не хорошо, но понял. В частности, роль в развитии иннервации зубов и регенерации пренебречь.

Несколько в естественных исследований получены важные сведения о закономерностях иннервации тканей зубов во время развития и ремонтных процессов различных животных моделях. Тем не менее, большинство из этих подходов не являются оптимальными для выделения молекулярную основу взаимодействий между нервными волокнами и контрольных органов и тканей.

Co-культуры представляют собой ценный метод для исследования и манипулирования взаимодействия между нервными волокнами и зубов в контролируемой и изолированной среде. В последние десятилетия, обычные совместных культурах, используя тот же культуральную среду были проведены в течение очень коротких периодов (например, два дня)исследовать привлекательные или отталкивающие эффекты развивающихся устные и зубные ткани на сенсорных нервных волокон. Тем не менее, продление срока культуры, необходимых для расследования последствий иннервации на зуб морфогенеза и дифференцировки клеток.

Microfluidics системы позволяют совместное культивирование нейронов и различных типов клеток в их соответствующей культуральной среде. Недавно мы показали, что тройничного ганглиев (ТГ) и зубы способны выживать в течение длительного периода времени при совместном культивировании в микрожидкостных устройств, и что они поддерживают в этих условиях тот же шаблон иннервации, что они показывают в естественных условиях.

На этой основе, мы опишем, как изолировать и совместное культивирование развития тройничного ганглиев и зубные бактерии в протоколе микрофлюидных сокультуры system.This описывает простой и гибкий способ совместного культивирования ганглиев / нервы и ткани-мишени и изучать роли специфических молекул на таких взаимодействий в Controlled и изолированная среда.

Introduction

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Иннервация играет ключевую роль в разработке, гомеостаза и регенерации органов и тканей 1,2. Кроме того, иннервации участвует в регуляции пролиферации стволовых клеток, мобилизации и дифференциации 3 - 5. Действительно, недавние исследования, реализованные в тканях орофациального комплекса показали, что парасимпатических нервов являются необходимыми для функции эпителия клеток-предшественников во время развития и регенерации слюнных желез 6,7. Точно так же было показано, что иннервация необходимо для развития и поддержания вкусовых рецепторов 8 - 11. Таким образом, важно, чтобы проанализировать еще пренебрегают роли иннерва....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все мыши были сохранены и обработаны в соответствии с Законом швейцарской защиты животных и в соответствии с правилами офисе Кантональная ветеринарной, Цюрих.

1. Подготовка вскрытия Материал, медиакультуры, микрофлюидных устройств

  1. Автоклав микро-рассечение пинцет и ножницы (121 ° С, время стерилизации: 20 мин) и хранят их в стерильный контейнер.
  2. Стерилизовать покровные стекла (24 мм х 24 мм), при инкубировании их в 1 М HCl в течение 24 ч на орбитальном шейкере при 37 ° С. Вымойте их три раза стерильной дистиллированной H 2 O и три раза с этанолом 99%. Сухой затем покровные при 37 ° С или в стерильных капото....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эти результаты показывают, что изолированные тройничного ганглиев может расти в одном отсеке микрожидкостных устройств и, кроме того, что развитие изолированных зубных зачатков выдержан в течение длительного периода времени в другой отсек микрожидкостных устройств. Различные питательные среды используются в двух отсеках, а микродорожек между двумя отсеками позволяют расширение аксона от ганглий тройничного нерва к проявляющему зубных зачатков. Фиг.3 представляет собой визуализацию с помощью иммунофлюоре.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Предыдущая в пробирке исследования зубной иннервации были основаны на обычных сокультурах тройничного ганглиев и зубных тканей или клеток 26,28,29. Эти исследования были проведены, чтобы исследовать в основном привлекательные эффекты этих клеток или тканей на сенсорных аксонов 38. Хотя чего значительные достижения в этой области, несколько технических вопросов, были подняты. Зубные зачатки начинают вырождаться после нескольких дней культуры 37. На основании этих наблюдений, раст.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Работа финансировалась Цюрихским университетом. Авторы выражают благодарность Эштреле Нето и доктору Мерьему Ламгари за помощь в создании условий для совместной культуры.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Изолирующие устройства AXISAxon MilliporeAX15010-TCДоступны микроканалы разной длины
LamininSigma AldrichL2020
NeurobasalGibco21103-049
B27Gibco17504
Рекомбинантная мышь beta-NGFR& D Systems1156-NG-100Человеко-крысиный бета-NGF (R& D Systems) являются аналогом
DMEM-F12Gibco11320-033

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pagella, P., Jiménez-Rojo, L., Mitsiadis, T. A. Roles of innervation in developing and regenerating orofacial tissues. Cellular and molecular life sciences : CMLS. 71, 2241-2251 (2014).
  2. Kumar, A., Brockes, J. P. Nerve dependence in tissue,....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Tooth Germ InnervationMicrofluidic Co cultureTrigeminal GangliaTooth Germ IsolationNeurite OutgrowthImmunofluorescence StainingLight MicroscopyCulture Medium ChangeAxonal ChambersMicro Grooves

Related Articles