Жизнеспособность Bioprinted Сотовые конструктов Использование Три диспенсер декартово принтера

Summary

Декартов биопринтер был спроектирован и изготовлен для нанесения нескольких материалов в точной, воспроизводимой геометрии, а также для контроля факторов окружающей среды. С помощью трехмерного биопринтера можно печатать и легко воспроизводить сложные и жизнеспособные конструкции.

Abstract

Тканевая инженерия сосредоточила свое внимание на создании заменителей для нефункциональных или поврежденных тканей. Использование трехмерной биопечати в тканевой инженерии привело к появлению новых методов печати клеток и матрикса для изготовления биомиметических тканевых конструкций. Метод изготовления твердых тел произвольной формы (SFF), разработанный для трехмерной биопечати, использует подход аддитивного производства путем нанесения капель клеток и гидрогелей слой за слоем. Биопечатное производство зависит от конкретного размещения биологических материалов в трехмерных архитектурах, а напечатанные конструкции должны точно имитировать сложную организацию клеток и внеклеточных матриц в нативной ткани. В данной статье рассказывается об использовании принтера Palmetto, декартова биопринтера, а также о процессе создания пространственно организованных, жизнеспособных конструкций с одновременным контролем факторов окружающей среды. Эта методология использует системы автоматизированного проектирования и автоматизированного производства для создания этих специфических и сложных геометрических форм. Наконец, такой подход позволяет воспроизводить производство готовых конструкций, оптимизированных по контролируемым параметрам печати.

Introduction

Тканевая инженерия использует принципы биологии и инженерии в развитии функциональных заменителей для поддержания, восстановления или повышения родной ткани и. Возможность генерации трехмерных биомиметических конструкции по требованию будет способствовать научные и технологические достижения в тканевой инженерии, а также датчики на основе клеток, препарат / скрининга токсичности, ткани или опухоли моделей, и прочее. Трехмерная организация тканевой инженерии конструкций является основным компонентом метода изготовления, потому что она должна точно имитировать высоко организованной взаимодействие клеток и внеклеточного матрикса в нативной ткани.

Биологически и форма формирования трехмерных леса являются важнейшими факторами в создании новых конструкций ткани, потому что клетки мигрируют, чтобы сформировать двумерный слой клеток, но не имеют возможности расти в благоприятствования трехмерным. Леса служит основой для временного клеткипривязанность и оружия, поэтому он должен быть изготовлен из материалов с контролируемой пористостью и биологическому разложению, и достаточной механической IntegrIT. Эшафоте материалы не должны быть цитотоксическое или зарегистрироваться побочной реакции от хоста. Гидрогели были широко используется в тканевой инженерии методов, и из-за их гидрофильности гидрогели позволяют жидкости и газа обмен на протяжении Структур. Комбинируя различные гидрогели, свойства синтезированных гидрогеля являются изменению встретиться отличный требование приложений.

Обычный тканевой инженерии подход предполагает создание бесклеточных пористых жертвенных лесов, которые засевали клетки после fabricatio. Были использованы многие методы, такие как волокна, литье соединения растворителя, и формование расплава, но оказалось успешным для минимально тканевой инженерии. Методы волоконной контактной позволяют волокна должны быть выровнены в конкретные формы, но они способны только проducing очень тонкий каркас. Растворитель методы литья производится очень пористые конструкции, однако по величине производства мембраны только 3 мм thic. Таким образом, создания трехмерных конструкций не представляется возможным с помощью этих методов. Формование расплава оказались успешными в производстве трехмерных каркасов, но такие высокие температуры, что необходимо биологические материалы не могут быть включены в процессе производства предпосе. Строительные леса высевают пост-изготовление ограничены в своей способности удовлетворять требованиям тканевой инженерии для получения трехмерных каркасов с заранее определенными или контролируемых микроструктур и. Еще одним важным вопросом с твердыми технологий эшафот посев дефицит васкуляризации и плохой механической.

Bioprinting была расширена, чтобы трех измерениях путем использования нетоксичных биологически, термообратимый гелей для преодоления недостатков обычных. Некоторые из твердой свободной формы изготовления тechniques настоящее время используемые в лазерной помощь bioprinting и струйной печати. Лазерные методы помощь bioprinting использовать импульсный лазерный источник, а мишень, и приемное субстрат для создания трехмерной. Однако этот метод ограничен из-за низкой пропускной способности, низкой жизнеспособности клеток, и может производить только ограниченные меры по созданных структур, так как только photocrosslinkable форполимеры могут быть использованы для образования сшитого гидрогеля. Струйная печать была разработана в качестве методологии бесконтактного который воспроизводит цифровые данные изображения на подложке путем нанесения пиколитр чернила. Тем не менее, струйная печать не производит с высокой разрешающей способностью конструкции, создает опыт быстрого денатурации белка, и многие из клетки лизируют при осаждении.

В настоящее время новые методы производства добавки bioprinting были разработаны. В этих системах клеток, белки, факторы роста и биомиметические гидрогели, как правило, интегрированы в матрицу оболочкиМОГВ в процессе изготовления и одновременно на хранение использовании приводов с компьютерным управлением для создания трехмерных эшафот основе клеточных нагруженные конструкции, которые тесно имитирующие микроархитектуру родной. Гидрогели клеток нагруженные составляют bioink, который может быть гетерогенным, состоящая из нескольких типов клеток, или однородным. Добавка производственные системы хранения bioink капельный или слой за слоем через одноразовые шприцы и советы на стадии компьютерным управлением, способный двигаться в направлениях X, Y, и Z. Через программное обеспечение, архитектура печатных лесов можно легко манипулировать в зависимости от требований приложения. В отличие от обычных методов, трехмерные медицинские технологии (магнитно-резонансной томографии, компьютерной томографии) могут быть включены в конструкции, создавая конкретного пациента конструкцию. Эти методы позволяют также возможность получения васкуляризированных замены, потому что конструкции изготавливаются с высокой лOCAL плотность клеток, что позволяет межклеточных взаимодействий и повышения вероятности после имплантации SURVIVA.

Принтер Palmetto обычай построен трехмерная система мульти-распределитель, который использует программируемые роботов производственные методы для генерации трехмерных конструкций разнородных тканей (рисунок 1). Это позволяет использовать множество материалов в уникальных комбинаций для получения гетерогенных структур. Инициализация bioprinter является одним из самых важных шагов в bioprinting, потому что это позволяет вам установить различные параметры для оптимизации печатные из bioprinted конструкций.

Bioprinter включает процесс периодического типа с запуска, эксплуатации и остановки последовательностей, управляемых программируемым логическим контроллером (PLC), который пользователь работает через интерактивной панели управления с сенсорным экраном (рис 1, а). Для предотвращения загрязнения биологические материалы bioprinter заключена в положительно давление поли (метилметакрилата) (ПММА) камера с частицами задерживаемость высокоэффективной (НЕРА) -filtered систему циркуляции воздуха (фиг.1, В, С). Интерьер принтера можно стерилизовать с помощью встроенных в источники ультрафиолетового излучения (рис 1, D). Центральный компонент bioprinter является полностью программируемым позиционирования робота, который может воспроизводимо разместить наконечник дозатора с точностью до 10 мкм (рис 1, е). Есть три диспенсеры, которые способны внести, объем до 230 NL с использованием винтовых (рис 1, F). Они программируются независимо с помощью отдельных компьютеров, которые управляют параметры печати для каждого дозатора (рисунок 1, G). Роторно-винтовые дозирования использует вращение винта с приводом от двигателя, чтобы переместить вниз bioink шприца и из наконечника шприца. Эти дозаторы смонтированы на пневматическиеLY контролируется Гнездо инструмент (2А, Б), что позволяет роботу переключаться дозатор, установленный на оси Z. манипулятора под программным управлением (рис 1, H).

Ской робот получает инструкции по печати с компьютера под управлением разработки программного обеспечения (Рисунок 1, я). Каждая программа содержит дозирующих местоположения калибровки процедуры, и дозатор с изменением протоколов. Конструкция генерируемых конструкций, прежде всего, состоит из XYZ координат, где каждый распылитель будет вносить материал. Bioprinter включает два оптических датчиков света (рис 2С), которые определяют XYZ координаты конца наконечника шприца. Эти датчики отправить информацию о координатах для робота, который использует их для расчета позиции концах распределитель наконечник. Существует дополнительный лазер смещение (рис 2D), что проецирует 633 нм диодный красный лазерный луч размера пятна 30 х 100 мкм для измерения расстояния с AccuraCY 0,1 микрометров. Когда луч очень сосредоточена робот определяет Z расстояние поверхности печати. Это измерение, и оптический датчики света измерение верхнего конца в Z, позволяет рассчитывать точную Z координат используется для размещения кончика дозатора по отношению к поверхности печати. Советы диспенсер двигаться в сторону и вертикально через ось Х ориентированных оптического датчика света, чтобы найти Y и Z центры, и в поперечном направлении с помощью датчика по оси Y. найти центр X-оси. Поверхность печати отображается с использованием формулы для плоской поверхности в пространстве хуг: Ax + от + сг = D чтобы определить, где поверхность по отношению к положению верхнего конца дозирования. Этап принтер (Рисунок 1, J) имеет образец чашки Петри до 80 мм в диаметре и использует рециркуляции воды ванны для поддержания заданной температуры (рисунок 1, K). Температура Стадия может быть установлен в диапазоне от -20 и остается стабильным в течение. Существует камера USB установленна робота-руку Z, чтобы обеспечить увеличенный вид наконечника раздаточного в процессе печати (фиг.1, L). Существует второй камерой, установленной в направлении верхней части внутренней камеры, что обеспечивает полное представление о bioprinter в процессе печати (фиг.1, L).

Компьютерный дизайн рисунок программное обеспечение определяет характер осаждения и позволяет пользователю создавать постепенно расположенных капель и сложные структуры (рисунок 3). Трехмерные пути могут быть вручную запрограммированы в принтере-совместимый дизайн программного обеспечения или импортировать из отдельного компьютера автоматизированного проектирования программного обеспечения рисования (рисунок 4, таблица 1). Программное обеспечение принтера, совместимый позволяет вариации параметров печати, таких как метод осаждения (один осаждения капель или непрерывного осаждения путь), трехмерной геометрии путей, скорости осаждения, расстояния между концом наконечника шприца и ПодстСкорость печати поверхность, то количество времени для осаждения отдельной капли, и высоты и скорости шприц поднимается между осаждением капель. Каждая программа содержит XYZ дозирующих местоположения калибровки наконечник процедуры, и дозатор с изменением протоколов, чтобы обеспечить стерильную среду, без вмешательства оператора, во время печати. Программируемый логический контроллер (ПЛК) робота получает инструкции от компьютера под управлением проектирования программного обеспечения и контролирует сроки событий от внешних контроллеров (например, диспенсеры). Чтобы сделать это, ПЛК использует циклическую механизм контроля дозаторы роботизированная устройство позиционирования, и экологические факторы.

Трехмерная bioprinting прямой записи с использованием роторно-винтовой, жидкости системы дозирования позволяет процесс осаждения клеток, чтобы быть более эффективным, точным и легче, чем предыдущие методы. Это исследование показывает, обычай построен bioprinter способен генерировать сеLL-Ладена гидрогелевые конструкции с высокой жизнеспособности клеток.

Protocol

1. Подготовка желатина субстратом для трехмерной Bioprinting альгината гидрогелей

1. Подготовка кальция / желатиновый субстрат, следуя кальция / желатина методом подложки, описанной Патаки и др ^11, чтобы избежать пониженной жизнеспособности, связанной с высоким содержанием. Способ субстрат кальций / желатин перечислены ниже.
   1. Смешайте хлорида кальция обезвоживают (1,5 мас%), хлорид натрия (0,9 мас%), и свиной желатин (2 мас%) в дистиллированной воде и кипятят в течение 2 мин, чтобы создать решение желатин 100 мм.
2. Налейте 5 мл раствора желатина / кальция в 100 мм стандартные чашки Петри, вихревой решение вокруг, чтобы равномерного покрытия на поверхности, и место на плоской поверхности в холодильнике, чтобы гель O / N (позволяют гель по меньшей мере, 8 ч перед использованием).
3. Чтобы увеличить непрозрачность поверхности подложки, добавить диоксид титана (0,3 мас%) в желатиновой / CaCl ₂ раствора. Перемешивают в течение 10 мин. Autoclave желатиновых / _TiO 2 решение о цикле жидкостей в течение 30 мин, чтобы стерилизовать его.
   1. Добавьте 3 мл желатина / _TiO 2 растворе на поверхность полученного ранее желатиновых пластин. Вихревой смесь, чтобы обеспечить его равномерно по всей поверхности. Разрешить гель в 4 ° C холодильник O / N (разрешить гель, по крайней мере 8 ч перед использованием). Основание должно быть использовано в течение 3 дней.

2. Окисление альгинат

1. Окислить альгинат натрия bioink следующую способе частично окисленного альгината по Bouhadir др ^30, описанном ниже.
   1. Чтобы сделать 5% раствор окисленного альгинат, растворить 1 г альгината натрия в 100 мл дистиллированной воды. Добавить водный раствор периодата натрия (0,25 М, 0,25 ммоль), окислитель, чтобы произвести 5% раствора окисления. Перемешивают в течение 19 ч при комнатной температуре. Добавить 40 мл этиленгликоль в растворе после 24 часов, чтобы закончить Reaие.
   2. Растворить 2,5 г хлорида натрия в растворе. Добавить избыточного количества этиловом спирте (2: 1 отношение), чтобы осадить окисленные альгинаты. Центрифуга решение при 1000 х г для сбора выделений, и повторно растворить их в дистиллированной воде. Повторите этанола мыть.
   3. Мораторий не сушить окисленных окатышей и альгината хранить при температуре -20 ° С до готовности к использованию.
2. Определить степень окисления путем измерения процентного содержания периодат натрия потребляется до того, прекращено этиленгликоля.
   1. Готовят раствор йодида калия (20% вес / объем, рН 7,0 фосфатного буфера натрия) и раствор thyodene (10% вес / объем, рН 7,0 фосфатного буфера натрия). Смешайте два решения с окисленной альгината при комнатной температуре.
   2. Постепенно падение реагирует альгината натрия и перйодата решение в смеси йодида калия и theodyne решений. Измеряют поглощение смеси при 426 спектрофотометрически нм. Когда он достигмаксимум, записывать использованный объем альгината натрия и раствора периодата как V _1.
   3. Реакция , Количество непрореагировавшего периодата натрия
   4. Вычесть количество непрореагировавшего периодата натрия с его первоначальной концентрацией, чтобы определить количество потребляемой периодат натрия. Используя предыдущий формулу, определить окончательный степень окисления альгината.

3. Альгинат пептида Сопряжение

1. Сопряженные лиганды с открытой последовательности аргинин-глицин-аспартат (пептид) в предварительно подготовленную окисленного альгината, следуя РГД-альгинат метод сопряжения Роули и др ^31, описанный ниже, чтобы способствовать прикрепление клеток и распространение.
2. Используйте водный carbodiimide химия с G ₄ RGDSPto конъюгата ^31.
3. Растворить 1 г 5% окисленного альгината в 0,1 М 2- (N-морфолино) этансульфоновой кислоты (MES) буфере, рН = 4. Добавьте 1-этил- (диметиламинопропил) карбодиимид (EDC, 0,54 ммоль) и N-гидроксисукцинимид ( NHS, 0,27 ммоль) при соотношении 2: 1 с образованием амида промежуточного продукта.
4. Добавить 0,28 ммоль пептида, сцепление с основной цепью полимера альгината через концевым амином. Перемешиваться при комнатной температуре O / N.
5. Остановка реакции сочетания путем добавления 2,5 г хлорида натрия в растворе. Добавить избыточного количества этиловом спирте (2: 1 отношение), чтобы осадить окисленные альгинаты. Центрифуга смеси при 4000 х г в течение 5 мин, чтобы собрать осадок. Аспирируйте СМИ в капот культуре клеток и повторно растворяют осадок в дистиллированной воде. Повторите этанола мыть.
6. Мораторий высушить осадок до тех пор, пока становится полностью сушат (появится в виде белого порошка вещества) и хранения в -20 ° C холодильник на потомиспользовать.

4. жировой ткани человека Стромальные Клетки клеточной культуры (hADSC в)

1. Культура жировой ткани человека стромальные клетки (hADSC в) в 75 см, обработанных клеток культуральных колбах (Т75 колбы), покрытых 15 мл низкой DMEM глюкозы с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки и 1% пенициллина-стрептомицина, 1% глутамина и 1% антимицина. Изменение средств массовой информации, в капот культуре клеток, каждые два дня, пока они не достигли слияния (80-90%).
2. После того, как сливной, передать T75 колбы с капот культуре клеток и приостановить hADSC, используя метод трипсина ферментом.
   1. В капот, аспирация все клеточной культуральной среде от клеток. Промыть 5 мл Дульбекко забуференным фосфатом физиологическим раствором с кальцием и магнием (DPBS ++). Аспирируйте DPBS ++ от клеток.
   2. В то время как в капот, чтобы раствор трипсина и ДЗФР ++ путем смешивания 1 мл трипсина и 4 мл DPBS ++. Каждую колбу требует 5 мл Solutион, поэтому убедитесь, соответствующий объем для числа сливающихся колбах. Добавьте 5 мл трипсина / DPBS ++ в каждую колбу и поместить их в инкубатор на 2 мин.
   3. Через 2 мин, удалить колбы и слегка нажмите сторонах их ослабить клетки от днища. Посмотрите на каждую колбу под микроскопом, чтобы гарантировать, что клетки суспендируют. Поместите фляги обратно в капот культуре клеток и добавить 3 мл соответствующей среды для культивирования клеток в каждую колбу. На этом заканчивается реакцию трипсина.
   4. Трансфер СМИ клеток-Ладена из каждой колбы и поставить в 50 мл конической. Центрифуга их при 1000 х г в течение 5 мин. Клетки должны выглядеть как маленький белый осадок в нижней части конической. Трансфер в капот культуре клеток и аспирации средства массовой информации. Ресуспендируют клеток в 2 мл среды для культивирования клеток.
   5. Граф клеток использованием гемоцитометра под микроскопом. Как только клетки были подсчитаны, в капот культуры, аликвоту количество средах, содержащих ~ 1.3 millioп клетки и трансфер в 15 мл коническую. Центрифуга коническая 15 мл, содержащую клетки снова в течение 5 мин при 1000 х г в.
   6. В капот культуры, повторное заполнение оставшихся клеток в нескольких Т-75 колбы, добавляя концентрацию ~ 350000 клеток в каждую колбу. Добавьте 15 мл DMEM СМИ и не вернуться в инкубатор, пока сливной снова.
   7. Когда цикл центрифуги завершена, возвращают 15 мл коническую к клеточной культуре. Аспирируйте носитель из клеточного осадка, а клетки вновь суспендируют в водном растворе альгината при концентрации 1,3 млн клеток на миллилитр bioink, terteriating решение часто так что однородное распределение клеток по всему bioink. Загрузите клеток-Ладена раствора в стерильной принтера, совместимый 3 мл шприц и винт на стерильной 22 G пластиковым наконечником.

5. Настройка Bioprinter

1. Включите bioprinter, каждый из дозатора компьютеров, и recirculatING водяную баню.
   1. Вручную установить рециркуляции температуры водяной бани, чтобы для механизма гелеобразования.
   2. Вручную настроить параметры печати для каждого дозатора на корреляцию ценовым компьютером. Установите громкость дозирования до 230 нл, количество backsteps 0, и скорость дозирования до 10 мкл втор.
2. Откройте разработки программного обеспечения и программы для просмотра дисплей камеры USB на компьютере.
   1. Использование программного обеспечения, вручную ввести координаты для точек массива 5 х 5 мм с 2,4 расстояния между каплями.
   2. Установите параметры печати, чтобы быть: расстояние между концом зонда и поверхности подложки = 0,1 мм; высота шприц поднимается между отложениями = 20 мм; количество времени на осаждении = 1 сек.
   3. Сохраните программу и отправить его в робота.
3. Поместите желатин / _TiO 2 -содержащих Петри блюдо на 4 ° С этапе принтера. Закрыть и запереть дверь камеры.
4. Используйте ПЛК INItialize источники ультрафиолетового света, и стерилизовать камеру в течение 90 сек.
5. После стерилизации будет завершена, откройте камеру и загрузить шприц, содержащий hADSC приостановила в альгината в Gun 1. Закройте и заблокируйте дверь камеры.
6. Используйте PLC для включения вентилятора системы, подождите 30 сек для равновесия внутреннего давления.
7. На компьютере, запустите программу, содержащую геометрические пути и печать параметров.
8. На протяжении всего процесса печати, смотреть дисплей камеры USB на компьютере, чтобы подтвердить точное и равномерное печать.
9. После завершения печати, позволяют конструкции гель в течение 40 мин.

Оценка жизнеспособности клеток 6.

1. Обложка конструкции, которые не собираются быть отображены немедленно послепечатной в DMEM и магазин в инкубаторе до времени визуализации.
2. Для количественной оценки жизнеспособности конструкций, окрашивают их с помощью флуоресцентной основе жизнеспособности / цитотоксичности, Ай образ с помощью конфокальной микроскопии.
   1. Следуя инструкциям комплект, подготовить окраски раствора, содержащего кальцеина AM и этидия гомодимер-1. Для того, чтобы 10 мл окрашивающего раствора, добавить 20 мкл этидий гомодимера-1 и 5 мкл кальцеина утра до 10 мл стерильной культуры тканей-Grade Дульбекко забуференным фосфатом физиологическим раствором (+ магния + кальция; DPBS ++).
   2. Погружают bioprinted конструкции в пятне раствора в течение 15 мин в темноте.
   3. Изображение окрашенные конструкции с использованием конфокального микроскопа систему в дни 0 и 8. Возьмем несколько изображений каждого bioprinted конструкции, используя параметры Z-Стек 30 оптических срезов на глубину 300 мкм, и вручную рассчитывать клетки. Если клетки появляются желтые или зеленые считать их живыми, и если красный, рассчитывать им, как мертвый.
3. Рассчитывают процент жизнеспособности клеток, как количество живых клеток, деленное на общее число клеток в конструкции; Жизнеспособность клеток = количествоЖивые клетки (зеленый + желтый) / общее количество клеток (зеленый + желтый + красный) х 100%.
4. Рассчитать количество клеточной пролиферации для каждого образца, как число клеток день 8, разделенной на число клеток в день 0; Клеточной пролиферации = живой подсчет клеток на день 8 / живой клетке рассчитывать на день 0 х 100%.

7. РГД пептида Сопряжение Анализ

1. Для анализа успеха RGD пептида сопряжения на альгината, сравнить РГД-сопряженную альгинат и несопряженный альгинат. Чтобы сделать это, изображение печатные конструкции, используя (4 ', 6-диамидино-2-фенилиндол, дигидрохлорид) (DAPI) и фаллоидином пятна.
   1. Сделайте phalloidins рабочего раствора путем разбавления 5 мкл метанольного раствора с 200 мкл DPBS ++. Хранить при -20 ° С до использования.
   2. Выполнить 300 мкм маточного раствора красителя DAPI следующую уравнением: (0,10509 г / л) / (350,3 г / моль) = 3 × 10 ^-4 М = 0,0003 М = 0,300 мм = 300 мкм. Сделайте йе DAPI рабочего раствора путем разбавления исходного раствора 1: 100 в DPBS ++, чтобы получить раствор 3 мкм. Хранить при -20 ° С до использования.
2. Полностью погрузите образец в 4% параформальдегида. Инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре. Вымойте три раза DPBS ++, позволяя решение сидеть в течение 5 мин каждого мытья. Передача образца геля из скважины на предметное стекло, щелкая геля на в процессе. Опустить гель в 0,1% Triton X-100 (0,1 г / 100 мл) в DPBS ++ в течение 10 мин. Вымойте три раза DPBS ++, что позволяет за 5 минут для каждого мытья.
3. Пятно печатные конструкции с фаллоидином погружением их в рабочем растворе. Накрыть фольгой и инкубировать в течение 4 часов. Снимите фаллоидином пятно и промыть три раза DPBS ++. Первое мытье должно быть быстрым, последний моет должен сидеть в течение 5 минут каждый.
4. Пятно печатные конструкции с DAPI погружением их в раствор DAPI рабочего. Накрыть фольгой и инкубировать при комнатной температуре в течение 30 мин. Мытьтри раза DPBS ++, позволяющие каждому мытье сидеть в течение 5 мин. Наблюдайте и изображения образцов на конфокальной системы микроскопа.

Results

Результаты демонстрируют bioprinter способен хранение клеток-Ладена гидрогелей в конкретных трехмерных местоположений точно и последовательно, используя компьютерное программное обеспечение. Эти программные определить размещение каждой капли и контролировать многие параметры для дозирования (рис 3,4). Повторяемость в bioprinter надлежащим депозит биоматериалов является основополагающим для успеха в тканевой инженерии.

Жизнеспособность клеток, одна из требований успешного тех...

Discussion

Основное внимание в тканевой инженерии является преодоление разрыва между нехваткой органов и потребностей трансплантации, развивая биологические заменители, способные восстановления, поддержания или улучшения родной ткани ФУНКЦИИ. Это привело к прямому изготовления каркасов с комплексом, анатомически правильную внешнюю геометрии, и точный контроль над внутренней геометр. Трехмерная bioprinting методология используется для генерации трехмерных конструкций различных размеров и форм с помощью цифровой модели с использован...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Позиционирующий робот (JR2000 XYZ)	Janome
Диспенсеры: SDAV Linear Drive SmartDispensers	Fishman Corporation
Оптические датчики света:	Keyensce
: OD Mini	SICK
Рециркуляционная водяная баня: Polystat	Cole-Parmer	EW-12122-02
USB-камеры: Dino-Lite Premier 5MP	AnMo Electrionics/YSC Technologies	AD7013MT
совместимое с принтером программное обеспечение для компьютерного проектирования: JR-C Points	Janome		поставляется при покупке робота Janome
Программное обеспечение для автоматизированного проектирования: Visual PathBuilder	RatioServ		можно скачать по адресу:
www.ratioserv.com/index.php/downloads Printer 3 cc Шприцы:	Fishman Corporation	122051
22 г	Fishman Corporation	Z520122
Дигидрат хлорида кальция	Sigma-Aldrich	10035-04-8
Хлорид натрия	Sigma-Aldrich	7647-14-5
Свиной желатин	Sigma-Aldrich	9000-70-8
Диоксид титана	Sigma-Aldrich	13462-67-7
Протанал LF 20/40 Альгинат (Альгинат натрия)	FMC BioPolymer	9005-38-3
Соляная кислота	Sigma-Aldrich	7647-01-0
Этиленгликоль	Mallinckrodt Baker, Inc	9300-01
Периодат натрия	Sigma-Aldrich	7790-28-5
hADSC	Lonza	PT-5006	Хранить во флаконах в жидком азоте до использования.
Модифицированный Eagle's Medium	Gibco Life Technologies	11965-092	Теплый в 37 градусов; C водой перед использованием.
Trypsin/EDTA	Lonza	CC-5012	Warm in 37 ° C водой перед использованием.
Кальцеин AM	Gibco Life Technologies	C3100MP	хранить в темное время суток при температуре -80 градусов; C до использования.
Набор для анализа жизнеспособности живых/мертвых млекопитающих	Invitrogen Life Technologies	L-3224	Хранить в темноте при температуре -80 °°; C до использования.
MES Hydrate	Sigma-Aldrich	M2933
N-гидроксисукцинимид	Sigma-Aldrich	130672
1-этил-(диметиламинопропил) карбодиимид (EDC)	Sigma-Aldrich	E1769	10 г
Фосфатно-буферный солевой раствор, +кальций, +магний от Dulbecco	Life Technologies	14040133	тепла при температуре 37 °С; C водой перед использованием.
Фосфатно-буферный солевой раствор, кальций, -магний Dulbecco	Life Technologies	14190144	тепло при температуре 37 °°; C водой перед использованием.
RGD Peptides	International Peptides
Alexa Fluor 546 Phalloidin Stain	Invitrogen Life Technologies	A22283	Store at -20 ° C до использования
(4', 6-Диамидино-2-Фенилиндол, Дигидрохлорид) (DAPI) Stain	Life Technologies	R37606	Хранить при -20 °°; C до начала использования