Методическая статья

Оптический Картирование Intra-саркоплазматического ретикулума Са 2+ И трансмембранный потенциал в Лангендорфа-перфузии сердца кролика

DOI:

10.3791/53166

⸱

10 сентября 2015 г.

 ,  , 
1Department of Pharmacology, University of California Davis, 2Departments of Pharmacology and Biomedical Engineering, University of California Davis

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта статья описывает подробный протокол и оборудование, необходимое для двойной оптической отображения трансмембранного потенциала (V м) и бесплатным внутри саркоплазматического ретикулума (SR) Ca 2+ в Лангендорфа-перфузии сердца кролика. Этот метод позволяет для прямого наблюдения и количественной оценки V м и SR Са 2+ динамики в неповрежденной сердце.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Обработка саркоплазматического ретикулума (SR) Ca2+ играет ключевую роль в нормальном взаимодействии возбуждения-сокращения, а аберрантная обработка SR Ca2+, как известно, играет значительную роль в определенных типах аритмии. Поскольку аритмии являются пространственно различными, эмерджентными явлениями, их необходимо исследовать на тканевом уровне. Тем не менее, методы прямого зондирования SR Ca2+ в интактном сердце остаются ограниченными. В данной статье описан протокол двойного оптического картирования трансмембранного потенциала (Vm) и свободного внутри-SR [Ca2+] ([Ca2+]SR) в сердце кролика, перфузируемого по Лангендорфу. В этом подходе используется низкоаффинный индикаторCa2+ Fluo-5N, который имеет минимальную флуоресценцию в цитозоле, где внутриклеточный [Ca2+] ([Ca2+]i) относительно низок, но проявляет значительную флуоресценцию в просвете SR, где [Ca2+]SR находится в миллимолярном диапазоне. В дополнение к выявлению характеристик SR Ca2+ в пространстве по всей эпикардиальной поверхности сердца, этот подход имеет явное преимущество одновременного мониторингаVm, что позволяет исследовать двунаправленную связь междуVm и SR Ca2+ и роль SR Ca2+ в аритмогенных явлениях.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Двойное оптическое картирование внутриклеточногоCa2+ и трансмембранного потенциала (Vm) в интактном сердце с перфузией Лангендорфа стало основой исследований в области электрофизиологии сердца, включая механизмы аритмии и связи возбуждения-сокращения1-4. Этот подход позволил получить беспрецедентные знания о нормальной и аномальной электрофизиологии и, что важно, о двунаправленной связи междуVm и внутриклеточным Ca2+. Тем не менее, оптическое картирование внутриклеточногоCa2+ с высокоаффинными флуоресцентными индикаторами (такими как Rhod-2 и Fluo-4) сообщает только о объемных изменениях внутриклеточногоCa2+ и не позволяет определить, обусловлены ли эти изменения трансмембранным потокомCa2+, высвобождением и возвращением во внутриклеточные хранилища или, в большинстве случаев, некоторой комбинацией того и другого. Кроме того, высокоаффинные индикаторы Ca2+ имеют медленную кинетику включения-выключения и могут неточно сообщать о быстрых изменениях концентрации Ca2+ 5.

Каждый потенциал действия вызывает повышение внутриклеточногоCa2+, известного как внутриклеточный транзиторныйCa2+ (CaT). В сердце млекопитающих примерно 70–90% от общего количества CaT происходит за счет высвобожденияCa2+ из саркоплазматического ретикулума (SR) через открытие рианодиновых рецепторов (RyR)6. В пределах SR примерно половина общего Ca2+ связывается с кальсеквестрином (CSQ) и другими внутри-SR буферами7, которые играют важную роль в гомеостазе SRCa2+ 8,9. Количество свободного SR Ca2+ определяет движущую силу для высвобождения SR Ca2+, а также для гейтирования RyR, и, следовательно, оказывает значительное влияние на внутриклеточный CaT. Кроме того, изменения в высвобождении или обратном захвате SR Ca2+ могут, в свою очередь, влиять наVm через электрогенный обмен Na+-Ca2+, что может иметь аритмогенные последствия. Таким образом, в дополнение к CaT, мониторинг свободного SR Ca2+ может дать важную информацию о сократительной и электрофизиологической дисфункции.

За последние несколько лет исследователи добились значительных успехов в мониторинге SR Ca2+ в изолированных сердечных миоцитах и из одного места на интактном сердце. Один из таких методов требует быстрых импульсов кофеина для открытия RyR, а содержание SR Ca2+ затем выводится или рассчитывается на основе немедленного повышения внутриклеточного Ca2 + 10. Другой интригующий подход использует низкоаффинные индикаторы Ca2+, такие как Fluo-5N11 или Mag-Fluo412, которые связываются со свободным SR Ca2+. Эти показатели имеют константы диссоциации (Kd) в диапазоне от 10 до 400 мкМ и, следовательно, демонстрируют минимальную флуоресценцию в цитозоле по сравнению с просветом SR, где концентрация Ca2+ ([Ca2+]SR) находится в миллимолярном диапазоне. С использованием низкоаффинных показателей Ca2+ были исследованы некоторые аспекты цикличности SR Ca2+ на уровне изолированного миоцита, включая фракционное высвобождение SR Ca2+ и механизмы альтернанов Ca2+ 13,14. Однако для того, чтобы полностью понять гетерогенную природу цикличности SR Ca2+ в интактном сердце и роль SR Ca2+ в пространственно различных аритмических явлениях, необходимы методы визуализации SR Ca2+ на эпикардиальной поверхности интактного сердца.

В этой статье описывается методология двойного оптического картирования свободных SR Ca+ 2+ и Vm в интактном сердце кролика, перфузированном по методу Лангендорфа, с низкоаффинным индикаторомCa2+ Fluo-5N. В дополнение к выявлению характеристик SR Ca2+ в пространстве на эпикардиальной поверхности сердца, этот подход имеет преимущество одновременного мониторингаVm, что позволяет исследовать двунаправленную связь междуVm и SR Ca2+.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные с животными были одобрены уходу и использованию комитета животных из Университета Калифорнии в Дэвисе путем, и придерживался в руководстве по уходу и использованию лабораторных животных, опубликованной Национальным институтом здравоохранения.

1. Подготовка

  1. Приготовьте два концентрированных (25x) запасы модифицированного раствора Тирода заранее и хранить при 4 ° C: (1) со Я (в мм: NaCl 3,205, CaCl 2 32,5, KCl 117,5, NaH 2 PO 4 29.75, MgCl 2 26.25) и (2) со II (в мм: NaHCO 3 500).
    1. Свежий приготовить раствор 2 л Тирода следующего состава (в мМ): NaCl 128,2, CaCl 2 1,3, KCl 4.7, MgCl 2 1,05, NaH 2 PO 4 1,19, NaHCO 3 20 и глюкозу 11.1 путем объединения 1840 мл деионизированной (DI) вода, 80 мл со I, 80 мл исходного II и 4 г глюкозы. Не смешивать непосредственно со I и II со; добавитьм 1840 мл DI, чтобы избежать осадков.
  2. Подготовка исходного раствора возбуждения-сокращения разобщитель blebbistatin в дозе 10 мг / мл в безводном ди-метилсульфоксида (ДМСО) заранее и хранить маточного раствора при 4 ° С.
  3. Подготовка исходных растворов флуоресцентных красителей: (1) Напряжение-чувствительный краситель RH237 (1 мг / мл в ДМСО) и (2) индикатор низкого сродства кальция Fluo-5N утра (2 мг / мл в ДМСО) в соответствии с рекомендациями завода-изготовителя. Немедленно используют препараты, чтобы избежать разложения с последующей потерей грузоподъемности.
  4. Премьер-рециркуляционный Лангендорфа перфузии система с кислородом (95% O 2, 5% СО 2) решение Тирода. Отрегулируйте поток O 2 / CO 2, чтобы рН раствора в Тирода на 7,4 ± 0,05. Использование в линию нейлона тканая сетка фильтра (размер пор: 11 мкм) непрерывно фильтровать перфузата.
    1. Премьер-система перфузии при КТ, а последующее loadiнг Fluo-5N AM выполняется при комнатной температуре. Для Fluo-5N А.М. нагрузки, использовать небольшой объем рециркуляции перфузат (~ 150 мл). После загрузки красителя, использовать больший объём перфузат (1 - 2 л, рис 1С).
  5. Включите систему сбора данных и подготовить для непрерывного мониторинга ЭКГ и перфузии давления. Подготовьте систему мониторинга давления: Подключите датчик давления в линии перфузии и контролировать давление перфузии с усилителем transbridge. Отрегулируйте базовый перфузионное давление в мм рт.ст. 0, когда сердце не подключена к системе перфузии.
  6. Совместите камеры оптические отображения, чтобы обеспечить пространственное выравнивание между V м и SR Са 2+ сигналов.
    1. Во-первых, сосредоточиться камеры путем размещения линейку или предмет с текстом в перфузии блюдо. Включите отображение камер в режиме просмотра и настроить фокус, пока текст не является четким и ясным. Приобретите один кадр изображения от каждой камеры.
    2. Наложениеэти образы и настроить прозрачность верхнего изображения так, чтобы оба изображения видны. Текст в изображениях должны перекрываться точно. Если не идеально ровные, регулировки угла зеркала дихроичным или позиции каждой камеры пока два изображения не выровнены.

2. Сбор, перфузии, и красителя загрузка сердце кролика

  1. Безопасный кролика в утвержденной кролика фиксатор. Глубоко анестезию с помощью внутривенной инъекции (маргинальной вены уха) пентобарбитала натрия (50 мг / кг) и гепарина (1000 МЕ).
    1. Когда кролик дисплеи имеют ноцицептивных рефлексов, сделать разрез по средней линии кожи, чтобы разоблачить грудину и ребра. Разрезать грудины с тупыми ножницами кончик хирургических из xyphoid к рукояткой. Позаботьтесь, чтобы не повредить сердце, открывая грудины. Распространение ребра, чтобы разоблачить сердце.
    2. Быстро вырезать весь блок сердце-легкие, быстро резать все сосуды и соединительную ткань. ImmediaДЕТАЛЬ разместить блок сердца легких в раствор ледяной Тирода.
  2. Найдите аорту для ретроградной перфузии. Вырезать восходящей аорты просто ближний к трех ветвей дуги аорты. Иглу аорты в 8 G канюли, соединенной с системой перфузии. Используйте кусок USP 0 шелковой нити, чтобы обеспечить аорты на канюли.
  3. Осторожно рассекают трахею, легкие, и эпикарда жир от сердца. При резком щипцы и ножницы рассечение, найдите митрального клапана и осторожно повредить или удалить один листок, чтобы предотвратить решение заторов в левом желудочке.
  4. Погрузитесь сердце в стеклянной оболочке перфузии камеры по горизонтали с передней поверхности сердца вверх для работы с изображениями. Безопасный канюлю к части Sylgard с П-образных штифтов на кремниевой дно тарелки, чтобы предотвратить движение сердца во время распределения (рис 1D). При желании вставить небольшой насекомых штифт на верхушке сердца для STAпроцеду ра.
  5. Позиция электрокардиограммы (ЭКГ) электроды в ванну на правой и левой стороне сердца. Полностью погрузить электроды в ванну и гарантировать, что они не находятся в контакте с поверхностью сердца, чтобы обеспечить объем-проведены ЭКГ аналогично ведущего конфигурации ввода. Проверьте нормальную Lead я ЭКГ морфологию. Отрегулируйте поток (25 - 35 мл / мин), чтобы убедиться, что давление в аорте поддерживается на 60 - 70 мм рт.
  6. Выключите свет в комнате и добавить 0,3 - 0,6 мл раствора blebbistatin (шаг 1.2) к перфузат (конечная концентрация 10 - 20 мкм).
    1. Выключите свет номер, чтобы избежать фотоинактивации blebbistatin. При необходимости, небольшой прожектор или фару можно использовать для освещения задачи.
      Примечание: Blebbistatin является миозин ингибитор АТФазы и возбуждения сокращение разобщающий. Потому Fluo-5N загрузка требует расширения (60 мин) RT (гипотермия) условия (см шаги 2,8 - 2,10), производство сердечной энергии может быть нарушена. Чтerefore, добавление blebbistatin в перфузат до покрасить нагрузку может снизить спрос на энергию 16 и устранить артефакты движения во время последующих оптических записей 17.
  7. Когда сокращение сердца перестала (10 - 15 мин, проверен на записи давления в аорте), переключитесь на малообъемным системы рециркуляции перфузии (см шаг 1.4.1).
  8. Подготовка и загрузить Fluo-5N AM загрузки решение: Добавить 0,25 мл Fluo-5N А.М. раствора (шаг 1.3) 0.25 мл теплой 20% плюроник F127. Добавить 0,5 мл раствора теплый Тирода к смеси, хорошо перемешать и добавить к малой громкости системы рециркуляции перфузии.
  9. Постоянно контролировать давление перфузии и ЭКГ и отрегулировать поток, если необходимо. Краска загрузка занимает около 1 часа при комнатной температуре. 45 мин после начала загрузки, включить ванне с циркулирующим воды, чтобы начать нагревание системы перфузии и перфузата до 37 ° С.
  10. Через 60 мин Fluo-5N А.М. нагрузки, SWITCH перфузии в большем объеме системы рециркуляции перфузии (см шаг 1,4).
  11. Развести 50 мкл напряжения чувствительного красителя RH237 маточного раствора (шаг 1,3) в 1 мл раствора Тирода теплый и добавить медленно (в течение ~ 5 мин) в порт впрыска проксимальнее канюли.

3. Оптический Картирование

  1. В последние моменты нагрузки красителя, расположите сердце и сосредоточиться камеры оптические отображения, чтобы обеспечить соответствующее поле зрения для эксперимента.
  2. При желании, поставить биполярный электрод стимуляции на эпикардиальной поверхности сердца для стимуляции.
  3. Поместите пластиковую крышку или скольжение стеклянной на поверхности перфузии камеры, чтобы уменьшить артефакт движения на поверхности жидкости, которое может присутствовать в связи с рециркуляцией перфузату.
    Примечание: В качестве альтернативы покровным, используйте чистую пластиковую 50 мм чашки Петри крышку.
  4. Сфокусировать свет направляющие равномерно освещать поверхность сердца с еxcitation свет. Используйте синий светоизлучающий диод (LED) источники света и далее фильтрации света, с 475 - 495 нм полосового фильтра (рис 1А).
  5. Соберите излучаемого флуоресценции с Макроскоп и двух дополнительных металл-оксид-полупроводник (КМОП) камер оптических отображения. Сплит излучаемого света с дихроичным зеркалом в 545 нм.
    1. Длинный фильтр верхних частот более длинный фрагмент длиной волны, содержащий сигнал V м, при 700 нм. Полосовой фильтр короткий фрагмент с длиной волны, содержащий SR Ca 2+ сигнал, от 502 - 534 нм (фиг.1А). Установите частоту оптического сбора данных до 0,5 - 1 кГц.
  6. Для каждого оптической записи, сначала инициировать нужный протокол стимуляции, включить свет возбуждения, и собрать 1 - 4 сек данных. При желании, синхронизировать протоколов стимуляции и сбор данных.
    Примечание: Это не возможно, чтобы повторно загрузить Fluo-5N утра, поэтому отношение сигнал-шум (SNR) будет decreaSE в течение всего эксперимента за счет красителя утечки из SR. Ограничьте экспериментальный протокол 1 - 2 ч, чтобы обеспечить высокие значения SNR.
  7. После эксперимента, мыть систему перфузии в последовательности деионизированной воды, 70% спирта реагента, и снова деионизированной водой.
  8. Фильтр каждый набор данных с пространственным фильтром Гаусса (радиус 3 пикселя) с использованием коммерчески доступных программных пакетов в соответствии с протоколом производителя.
  9. При необходимости, пространственно выровнять V м и SR Са 2+ наборов данных. Как и в шаге 1.6, наложение изображений с каждой камеры и убедитесь, что анатомические структуры сердца (то есть., Коронарных сосудов, края предсердий или желудочков) или другие предметы в поле зрения (т.е., канюли, шагая электрода) точно перекрытие. Если нет, то пространственное выравнивание наборов данных необходимо.
  10. Сдвинуть верхнюю прозрачное изображение в х- и у-направлении, пока точной перекрытия достигается, делая сведению количество пикселейизображение должно быть смещено в каждом направлении. Весь набор данных, соответствующий верхней изображения (либо V м или SR Ca 2+) должны быть сдвинуты на определенном количестве пикселей в каждом направлении, чтобы обеспечить точное выравнивание между V и м SR Са2 + наборов данных.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1А показана схема оптического конфигурации для двойной V м и SR Ca 2+ отображения. С этой установкой, есть полная спектральная разделение V м и SR Са 2+ сигналов (рис 1B). Схема системы перфузионного двойного контура, используемого для загрузки красителя Fluo-5N показано на рисунке 1С. Рисунок 1D показывает горизонтальную ориентацию сердца в перфузионной блюдо. Представитель V м и SR Са 2...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ключи к успешной загрузке красителя Fluo-5N являются малые объемы установки рециркуляции перфузии, что позволяет с высокой концентрацией Fluo-5N без необходимости больших количеств красителя, длины времени загрузки (1 час), а также выполнение загрузки при комнатной температуре. Если загрузка выполняется при физиологических температурах, сотовой ферментативной активности быстро расщепляет -am тегов, когда краситель проходит через клеточную мембрану, улавливания молекул красителя в цитозоле, а не позволяя им пересечь SR м...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была частично поддержана Национальными институтами здравоохранения США (R01 HL 111600) и Американской кардиологической ассоциацией (12SDG9010015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
NaClFisher ScientificS271-1Компонент раствора Тайроде
CaCl2 (2H2O)Fisher ScientificC79-500Компонент раствора Tyrode
KClFisher ScientificS217-500Компонент раствора Tyrode
MgCl2 (6H2O)Fisher ScientificM33-500Компонент раствора Тайроде
2PO4 (H2O)Fisher ScientificS369-500Компонент раствора Tyrode
NaHCO3Fisher ScientificS233-3Компонент раствора Tyrode
D-глюкозаFisher ScientificD16-1Компонент раствора Tyrode
95% O2 5% CO2AirГазкарбогенДля насыщения кислородом и pH раствора Tyrode
BlebbistatinTocris Bioscience1760Развязка возбуждения-сокращения
RH237Biotium61018Потенциал-чувствительный краситель
Fluo-5N AMInvitrogenF-26915Низкоаффинный индикатор Ca2+; Альтернатива: Инвитроген F-14204; Загрузка должна производиться при комнатной температуре
Pluronic F127Biotium59004Для загрузки индикатора Ca2+; Подогрейте до прозрачности раствора перед применением
Диметилсульфоксид (ДМСО)Sigma-AldrichD2650Для растворения блеббистатина и красителей
ФильтрEMD MilliporeNY110470011 μ m встроенный фильтр
Преобразователь давленияWPIBLPR2Для измерения давления перфузии
Трансмостовой преобразователь УсилительWPISYS-TBM4MДля преобразования/усиления сигнала давления; PowerLab также может использоваться с соответствующими устройствами BioAmp
PowerLab 26Tдлянепрерывной записи давления и сигналов ЭКГ
THT MacroscopeSciMediaMacroscopic оптической установкой. Детали: объектив 0,63X (NA = 0,31), 2-кратный конденсационный объектив, результирующее поле зрения = 3,1 см x 3,1 см, глубина резкости = ~ 1,5 мм
MiCam Ultima-L CMOSSciMediaОптические картографические камеры
Прецизионный светодиодный прожекторMightexPLS-0470-030-15-SСветодиодный источник света

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Herron, T. J., Lee, P., Jalife, J. Optical imaging of voltage and calcium in cardiac cells. tissues. Circulation research. 110, 609-623 (2012).
  2. Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. Optical imaging of the heart. Circulation research. 95, 21-33 (2004).
  3. Lou, Q., Li, W., Efimov, I. R. Multiparametric optical mapping of the Langendorff-perfused rabbit heart. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).
  4. Choi, B. R., Salama, G. Simultaneous maps of optical action potentials and calcium transients in guinea-pig hearts: mechanisms underlying concordant alternans. The Journal of physiology. 529 (Pt 1), 171-188 (2000).
  5. Kong, W., Fast, V. G. The role of dye affinity in optical measurements of Cai(2+) transients in cardiac muscle. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 307, H73-H79 (2014).
  6. Bers, D. M. Excitation-Contraction Coupling and Cardiac Contractile Force. , 2nd edn, Kluwer Academic. (2001).
  7. Bers, D. M., Shannon, T. R. Calcium movements inside the sarcoplasmic reticulum of cardiac myocytes. Journal of molecular and cellular cardiology. , (2013).
  8. Knollmann, B. C. New roles of calsequestrin and triadin in cardiac muscle. The Journal of physiology. 587, 3081-3087 (2009).
  9. Chen, H., et al. Mechanism of calsequestrin regulation of single cardiac ryanodine receptor in normal and pathological conditions. The Journal of general physiology. 142, 127-136 (2013).
  10. Diaz, M. E., O'Neill, S. C., Eisner, D. A. Sarcoplasmic reticulum calcium content fluctuation is the key to cardiac alternans. Circulation research. 94, 650-656 (2004).
  11. Shannon, T. R., Guo, T., Bers, D. M. Ca2+ scraps: local depletions of free [Ca2+] in cardiac sarcoplasmic reticulum during contractions leave substantial Ca2+ reserve. Circulation research. 93, 40-45 (2003).
  12. Kornyeyev, D., Reyes, M., Escobar, A. L. Luminal Ca(2+) content regulates intracellular Ca(2+) release in subepicardial myocytes of intact beating mouse hearts: effect of exogenous buffers. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 298, H2138-H2153 (2010).
  13. Picht, E., DeSantiago, J., Blatter, L. A., Bers, D. M. Cardiac alternans do not rely on diastolic sarcoplasmic reticulum calcium content fluctuations. Circulation research. 99, 740-748 (2006).
  14. Shkryl, V. M., Maxwell, J. T., Domeier, T. L., Blatter, L. A. Refractoriness of sarcoplasmic reticulum Ca2+ release determines Ca2+ alternans in atrial myocytes. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 302, H2310-H2320 (2012).
  15. Wang, L., et al. Optical mapping of sarcoplasmic reticulum Ca2+ in the intact heart: ryanodine receptor refractoriness during alternans and fibrillation. Circulation research. 114, 1410-1421 (2014).
  16. Wengrowski, A. M., Kuzmiak-Glancy, S., Jaimes, R. 3rd, Kay, M. W. NADH Changes During Hypoxia, Ischemia, and Increased Work Differ Between Isolated Heart Preparations. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. , (2013).
  17. Fedorov, V. V., et al. Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts. Heart rhythm : the official journal of the Heart Rhythm Society. 4, 619-626 (2007).
  18. Myles, R. C., Wang, L., Kang, C., Bers, D. M., Ripplinger, C. M. Local beta-adrenergic stimulation overcomes source-sink mismatch to generate focal arrhythmia. Circulation research. 110, 1454-1464 (2012).
  19. Marks, A. R. Calcium cycling proteins and heart failure: mechanisms and therapeutics. The Journal of clinical investigation. 123, 46-52 (2013).
  20. Cutler, M. J., et al. Targeted sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase 2a gene delivery to restore electrical stability in the failing heart. Circulation. 126, 2095-2104 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Fluo 5N AM

Похожие статьи