Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Микробиологически Индуцированные кальцит Осадки опосредованная по

22.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53253

⸱

16 апреля 2016 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Mechanical Engineering, University of Alberta, 2Department of Mechanical Engineering, York University, 3Department of Civil and Environmental Engineering, University of Alberta

В этой статье

Краткое содержание

Здесь представлены протоколы микробиологически индуцированного осаждения кальцита (MICP) с использованием бактерии Sporosarcina pasteurii. Осажденный карбонат кальция был охарактеризован с помощью оптической микроскопии и сканирующей электронной микроскопии (СЭМ). Также показано, что воздействие MICP повышает прочность губки на сжатие.

Аннотация

Частности бактерия под следствием здесь (S. pasteurii) является уникальным по своей способности, при правильных условиях, чтобы вызвать гидролиз мочевины (ureolysis) в природных средах за счет секреции фермента уреазы. Этот процесс ureolysis, через цепь химических реакций, приводит к образованию карбоната кальция преципитатов. Это известно как микробиологически Индуцированные кальцита Осадки (MICP). Соответствующие протоколы культуры для MICP подробно описаны здесь. И, наконец, эксперименты визуализации при различных режимах микроскопии были выполнены, чтобы понять различные аспекты процесса осаждения. Такие методы, как оптической микроскопии, сканирующей электронной микроскопии (SEM) и X-Ray фото-электронной спектроскопии (XPS) были использованы для химически характеристики конечного продукта. Кроме того, способность этих выделений в закупоривает поры внутри естественной пористой среды была продемонстрирована с помощью качественного эксперимента, в котором губкабары были использованы для имитации порового сеть с диапазоном масштабов длины. Губка бар, смоченной в культуральной среде, содержащей бактериальные клетки затвердевает из-за засорения его пор в результате непрерывного процесса химического осаждения. Это закаленные губки бар обладает превосходной прочностью по сравнению с губкой панели управления, которая сжимается и выдавливается под действием приложенного внешней нагрузки, в то время как закаленные бар способен поддерживать одинаковый вес с небольшим количеством деформации.

Введение

Sporosarcina pasteurii является грамположительной бактерии способны выживать в сильно щелочной среде (рН ~ 10) 1 и является одним из видов бактерий , которые могут стать возбудителем явления , называемого Микробиологически Индуцированные кальцит осадков (MICP) 2-4. MICP представляет собой процесс , в котором осаждение карбоната кальция индуцируется некоторых микробов в подходящих условиях окружающей среды. С. pasteurii приобрела значение в последние годы из - за его идентификации в качестве возможного средства для стимулирования значительных объемов MICP при определенных условиях. Эта возможность связана с тем , что С. pasteurii обладает уникальной способностью секретировать обильное количество фермента уреазы. Этот фермент действует как катализатор, способствуя ускоренному лизис мочевины (естественные биохимические соединения с широко распространенным и избытке) в присутствии молекул воды. Через каскад реакций, этот процесс окончательнойLY приводит к образованию отрицательно заряженных ионов углерода. Эти ионы, в свою очередь, вступает в реакцию с положительными ионами металлов, таких как кальций, чтобы в конце концов образовались осадки карбоната кальция (кальцит); следовательно , ярлык MICP 5-9.

Процесс MICP был известен и изучен в течение нескольких десятилетий 10,11. За последние несколько лет, MICP была исследована для широкого круга инженерных и экологических применений , включая снизу вверх зеленого строительства 12, усиление крупномасштабных структур 13,14 и улавливания углерода и хранения 15,16.

Например, оттяжки Каннингхэма 17 и др. аль разработан реактор умеренной температуры потока высокого давления, содержащего сердцевину из песчаника Berea. Реактор инокулированное бактериями S. fridgidimarina и в условиях высокого давления инжекции диоксида углерода в сверхкритическом состоянии , массивного накопления биомассы внутри пор тмов наблюдалось, что привело к снижению проницаемости более чем на 95%. Jonkers и Schlangen 18 изучали влияние некоторых специальных штаммов бактерий на самовосстановления процесса в бетоне. Внешняя вода транспортируется в сети пор, поступающей через поверхностные поры, как ожидается, чтобы активировать бездействующие бактерии, которые в свою очередь помогают структурную прочность через MICP. Tobler 19 и др. сравнили ureolytic активность S. pasteurii с коренным подземными водами ureolytic микрокосма в условиях , благоприятствующих крупномасштабную MCIP и обнаружили , что С. pasteurii имеет последовательную способность улучшить осаждение кальцита , даже когда коренные общины не имели предварительного активность уреазы. Мортенсен 20 et.al изучали влияние внешних факторов , таких как тип почвы, концентрация хлорида аммония, солености, концентрации кислорода и лизиса клеток на MICP. Их демонстрация того, что процесс биологической очистки очень надежен с соотвЭСТ к широкому разбросу в пространстве параметров обосновывает пригодность этого процесса для различных восстановительных приложений крупномасштабных обеспечили надлежащий процесс обогащения для усиления бактерии предприняты. Phillips 21 и др. аль разработаны опыты по изучению изменения проницаемости и прочности колонны песка и сердечника из песчаника после инъекции с S. pasteurii культуры. Они обнаружили, что в то время как проницаемость снизился в 2 - 4 раза, а предел прочности увеличился в три раза.

С. pasteurii и его роль в MICP являются темами активных исследований и ряд вопросов , связанных с механизмом химического осаждения все еще ​​до конца не изучен. В свете этого, очень важно иметь набор согласованных стандартных протоколов точно культуры соответствующим образом обогащена запас S. pasteurii для достижения MICP. Здесь мы опишем строгий протокол, который будет обеспечивать повторяемости и воспроизводимости. Это маnuscript описывает подробные протоколы для культивирования S. pasteurii и соответствующим образом обогащении культуральной среды , чтобы вызвать осаждение. Процесс исследован с помощью различных микроскопических методов, таких как оптические и сканирующей электронной микроскопии (SEM) и X-Ray фото-электронной спектроскопии (XPS). В центре внимания рукописи на процессе MICP. Процедуры как SEM и SIMS, будучи хорошо зарекомендовавшие себя стандартные протоколы, не описаны отдельно.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Примечание: Выполнить экспериментальные протоколы в порядке, описанном ниже. Бактериальная культура Протокол обсуждается в разделе 1 (Также см рисунок 1). Раздел 2 описывает протокол для обогащения культуральной среды с использованием внешних добавок. Раздел 3 описывает протоколы для многомодового микроскопии. Веса всех отдельных компонентов могут быть измерены с помощью аналитических весов. Объем каждого раствора можно измерить с использованием объемного цилиндра.

Примечание: Правильные протоколы биобезопасности должны соблюдаться для разделов 1 - 2. Обратитесь к институциональной служба безопасности для деталей.

1. Бактериальные культуры

  1. Культура Бактерии - Агар пластины Средний Приготовление
    1. Соберите оборудование и ингредиенты, такие как чашки Петри, колбы, Трис-основание, HCl, агар, Millipore вода, рН-метр etc.Sterilize все контейнеры автоклавированием при 121 ° C перед использованием.
    2. Готовят 1 л 0,13 М водный раствор трис-буфера, путем смешивания 15,75 г Трис-основание 1 л воды Millipore. Для снижения уровня рН исходного раствора (рН 10,4) добавляют 2,800 мкл HCl (концентрация 50%). Проверить непрерывно с помощью рН-метра, чтобы установить рН = 9.
    3. Разделить 1 л буферного раствора на две части следующим образом:
      1. Взять 800 мл этого раствора. Разделить его поровну на две части по 400 мл каждого. Растворить 8 г (NH 4) 2 SO 4 до одного раствора и 16 г дрожжевого экстракта к другому решению.
      2. Возьмите оставшиеся (200 мл) раствора и разделить его снова на две части по 100 мл каждого. Смешайте 2 г (NH 4) 2 SO 4 к одному. Добавляют 4 г дрожжевого экстракта и 4 г агар к другому.
    4. Автоклав 4 решения отдельно после обертывания соответствующих колб в алюминиевую фольгу и приклеить автоклава ленты.
      Примечание: Если блок Benchtop автоклав используется, объем должен быть установлен на 500 мл (температура и давление автоматчески указано в зависимости от объема).
    5. После того, как выводя их из автоклава, установить два 400 мл растворов в сторону на шаге 1.3.1 (ниже). Смешайте две 100 мл растворов, чтобы иметь 200 мл раствора. Вылейте смесь в 10 - 12 чашек Петри.
  2. Культура Бактерии - Агар плиты Подготовка образцов
    1. Удалите бактериальный запас из морозильной камеры (-80 ° C) и дайте ему растаять. После размораживания должным образом, поместите бактериальный бульон и агар пластины внутри капюшоном биологической безопасности.
    2. Выберите микропипетки наименьший доступный размерности (0,5 - 10 мкл хороший выбор) , чтобы заражать наконечник с pasteurii складе Sporosarcina. Streak агар пластины с наконечником микропипетки. Поместите прожилками агаризованной внутри не-качалке инкубаторе при температуре 31 ° С в течение 48 ч.
    3. После 48 часов, удалить пластину из инкубатора и визуально изучить для существования отдельных колоний. Если нет отдельных колоний, а затем поместить его в тон инкубаторе в течение еще 24 часов.
    4. Повторите процесс, пока отдельные колонии не обнаружены. Не превышать 7 дней судебного разбирательства.
      Примечание: Если отдельные колонии не появляются даже через неделю, то можно сделать вывод о том, что шаги не были выполнены должным образом, и весь процесс необходимо повторить с шага 1.
  3. Культура Бактерии - Заключительный Подготовка образцов
    1. Смешайте две 400 мл (растворы Трис - буфер + (NH 4) 2 SO 4 и Трис - буфер + дрожжевой экстракт (1.5.1) вместе , чтобы получить 800 мл раствора. Перенести 125 мл этого раствора в колбу.
    2. Провести визуальный осмотр поверхности чашки с агаром, чтобы идентифицировать области с высокой концентрацией отдельных колоний. Аккуратно подталкивать и сломать одну из колоний с наконечником микропипетки.
    3. Dip тот же самый кончик микропипетки в мл колбу 125 и перемешать тщательно, чтобы обеспечить достаточное количество ячеек для надежного умножения перенесешься, Поместить колбу в качалке инкубаторе при 150 оборотах в минуту, 30 & deg; С в течение 2 - 3 дней. Через 2 - 3 дней, снимите колбу из инкубатора.
  4. Культура Бактерии - Заключительный Cell Count
    1. Выполнение последовательного разбавления неразбавленной культурального раствора с помощью PBS , чтобы достичь разбавления по меньшей мере , десять миллионов (10 -7) , чтобы гарантировать , появляются счетные единичные колонии. Нарисуйте семь параллельных равноудаленных линий на одном из агар-пластин.
      1. Сделайте это рисунок смелые линии на нижней поверхности чашки Петри, достаточно видным, чтобы быть видимыми сверху. Отбросьте 3 маленьких капель неразбавленной раствора в одном сегменте. Добавить 1 мл неразбавленной раствора до 9 мл фосфатного буферного солевого раствора (PBS), чтобы получить разведение 1:10.
    2. Возьмем небольшую аликвоту (~ 0,1 мл) этого вновь разбавленного раствора с помощью пипетки и падение более 3 маленьких капель на следующем сегменте. Перенести вновь разбавленный раствор в новую колбу и дополнительно разбавленные в десять раз (10x) подобавляя PBS. Это приносит вниз разбавления до 10 -2 или 1: 100.
      1. Используйте этот 1: раствор 100 в следующем сегменте. Повторите эту операцию он обработает с небольшими объемами свеже разбавленных растворов путем последовательного переноса их в новые колбы и непрерывно разбавляя в десять раз (10x) в тандеме с PBS , чтобы получить больше и больше разбавленные образцы от 10 -3 или 1: 1000 на всем пути вплоть до 10 -7 или 1:10 млн в последнем сегменте.
    3. Выполнение колониеобразующих подсчет единиц (КОЕ) обкладки для подсчета количества клеток, присутствующих в агаром после инкубации планшет в течение 1 - 2 дней при 31 ° C. Это дает количественную меру количества бактерий в неразведенном образце.
      Примечание: измеряется значение КОЕ на основе способности системы, чтобы дать начало колоний в конкретных условиях питательной среды, температуры и времени, предполагая, что каждая колония является отдельным и основана одной жизнеспособной микробной клетки.
    4. Печатьчашки Петри с самоуплотняющееся пленку и хранить оставшиеся элементы в холодильнике для будущего использования.

2. Протокол для обогащения питательного для ускорения осадков

  1. Передача 9 мл приготовленной культуральной жидкости (клетки + среда) в нескольких стерилизованных центрифужные пробирки, каждая из 10 мл объема.
  2. Приготовьте 100 мл исходного раствора с внешнего обогащения, состоящей из четырех компонентов в следующих концентрациях в свежей среде: мочевина: 2 г / л, хлорид аммония: 1 г / л, бикарбонат натрия: 212 мг / л, хлорид кальция: 280 мг / л. Тщательно измерить все ингредиенты с помощью аналитических весов и смешайте все, кроме мочевины со свежей средой, в химическом стакане и место в автоклаве (121 ° С, 15 фунтов на квадратный дюйм, 15 мин).
    1. После автоклава, смешайте необходимое количество мочевины (2 мг) с 1 мл свежей среды, и пропускают через шприц, снабженный с шприцевой фильтр 0,22 мкм, чтобы завершить процесс обогащения.
    2. Добавьте 1мл этого обогащения среды с добавками к стерилизованных центрифужные пробирки, содержащие 9 мл приготовленной культуральной жидкости (клетки + среда) (этап 2.1).
      Примечание: Из всех этих компонентов, мочевина разлагаться при повышенных температурах, не могут быть стерилизованы в автоклаве. Следовательно, после того, как другие компоненты автоклавируют (121 ° С, 15 фунтов на квадратный дюйм, 15 мин), мочевина добавляется последний через шприцевой фильтр 0,22 мкм.
  3. Vortex каждая трубка тщательно с использованием механического Вортекс. Поместите обогащенных жидкостей (клетки + + добавки среда) в не-качалке инкубаторе при температуре 30 ° C. Контроль всех единиц регулярно для инициации осадков. С помощью светового микроскопа, начинают микроскопические наблюдения сразу начала осаждения обнаруживается невооруженным глазом. Это, как правило, в диапазоне от 30 - 36 ч после начала экспериментов.

3. Протокол многорежимный микроскопией

  1. Передача небольшого объема (~ 1 мл) жидкости высокого Магнификатаионная микроскопия-камерные системы покровного стекла для выполнения начальных наблюдений с режимом яркого поля. Начнем с того, начать все наблюдения с наименьшим увеличением (4X). которая обеспечивает широкую зону покрытия и, следовательно, глобальной информации о распределении преципитатов.
  2. Выберите отдельные области со значительными объемами осадков и увеличения (20X, 40X, 60X) путем постепенного увеличения увеличения.
    Примечание: Поскольку это невозможно правильно разрешить клетки из внеклеточной полимерного вещества (EPS) при ярком поле (из-за очень близких показателей преломления), включите режим фазового контраста по мере необходимости. В этом режиме только контуры клеточных мембран (будучи другой фазой, чем насыпной клетки) открыты, что позволяет визуально дифференцирование.
  3. Наконец, окрасить некоторые камеры с Live / Dead пятна, которые селективно окрашивает живые компоненты, как зеленый цвет во время окрашивания мертвых компонентов в красном цвете. Обратитесь к стандартным протоколам 28 </ SUP>.
  4. Включите флуоресцентной режиме, чтобы правильно различать между красной и зеленой областях. Красный (Красный куб фильтр с возбуждением длиной волны 540 - 580 нм, дихроичное зеркало 595 нм и Барьерный фильтр 600 - 660 нм) и зеленый (GFP Long однопроходной Зеленый фильтр куб с возбуждением длиной волны 440 - 480 нм, дихроичным зеркалом 505 нм и барьерный фильтр 510 нм) фильтров кубов используются для облегчения флуоресцентные микрофотографии.
  5. После того, как все данные многорежимный были собраны, выбрать лучшие изображения и вручную наложения (индивидуальная, светлого фазового контраста и флуоресцентные изображения) для получения наилучшего контраста и четкости.
  6. Выполните SEM на высушенные твердых образцов, чтобы понять, кристаллические структуры. Это хорошо установлена ​​и стандартная процедура. 22 Выполните XPS , чтобы идентифицировать химические подписи функциональных групп (карбонаты). Это устоявшиеся и стандартная процедура , а также. 23

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

С. pasteurii будучи алкалифилы 24 может выжить относительно суровых условиях. Когда упомянутый выше протокол культуры следует, и С. pasteurii выращивается внутри камеры, бактерии , приводит к осаждению карбоната кальция с течением времени (Фигура 2А). Рисунок 2 (б) показывает фазово-контрастным оптической микроскопией изображение популяции бактериальных клеток в культуральной среде. Отдельные клетки могут быть четко различать...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Критические шаги: Эта рукопись подробно описывает протоколы для культивирования жизнеспособного образца S. pasteurii. После того, как культура была приготовился, он должен быть соответствующим образом обогащена. Это является ключевым шагом жизненно важное значение для успеха эксперимента , так как неспособность обеспечить надлежащую химическую среду приводит либо очень длинные временные шкалы осадков или полное отсутствие таковых. С. pasteurii весьма чувствителен к нескольким внешним а...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы выражаем признательность партнерам по инициативе Гельмгольца-Альберты, Ассоциации Гельмгольца и Университету Альберты за поддержку, полученную в результате участия в этом сотрудничестве. Финансирование исследований обеспечивается Фондом инициатив и сетевого взаимодействия Ассоциации Гельмгольца, участвующими в нем Центрами Гельмгольца и правительством Альберты в рамках программы ecoTrust Министерства окружающей среды Альберты.

Доктор Танушри Гош с благодарностью признательна за ее критический вклад на ряде решающих этапов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
PetridishFisher ScientificFB0875712Petridish используется в качестве пластины для агара
Pyrex FlasksFisher ScientificS63268Corning Erlenmeyer
Tris-BasePromegaH5133используется для производства трис-буфера
соляной кислотыSigma-AldrichH98921.0 N, биореагент, подходит для клеточной культуры
Порошок агараSigma-AldrichA1296микробиологические испытания, культура растительных клеток, клеточная культура протестирована, порошок
сульфата аммонияSigma-AldrichA4418для молекулярной биологии
Порошок экстракта дрожжейSigma-Aldrich51475
Мерный цилиндрCole-ParmerCP08559GCCole-Parmer Класс А Градуированный цилиндр с калом Cert,TC; 1,000 мл,1/шт
Аналитические весыOHAUSAX124Eиспользуются для измерения массы реагентов
АвтоклавBrinkmann58619000
Автоклавная лентаVWR52428864
Алюминиевая фольгаSigma-AldrichZ185140используются для герметизации колбы перед помещением ее в автоклав
Бактериальный запасCedarlane11859-80 °°°; C поголовье S. pasteurii, ATCC No. упоминается против Кэт. Нет.
Одноканальные механические дозаторы Mline, переменного объемаBiohit725010Продается VWR под каталожным номером 14005976
Наконечник для микропипеткиFisher Scientific212772BИспользуется для царапания агаровых пластин
ИнкубаторСвязующее80079098микробиологический инкубатор,
Встряхивающий инкубаторVWR14004300VWR Signature Настольный встряхивание Инкубаторы
Фосфатный буферный раствор (PBS) Sigma-AldrichP7059
BD Falcon Express Pipet-Aid Пипетирование Устройство для пипетированияBD Biosciences357590Продается VWR под каталожным номером 53106220
ПарапленкаSigma-AldrichP7793Используется для герметизации агаровых пластин
МочевинаSigma-AldrichU1250Обогащение питательной среды
Бикарбонат натрияSigma-AldrichS8875Обогащение питательной среды
Хлорид кальцияSigma-AldrichC1016Обогащение
серии BF питательной среды

Ссылки

  1. Gibson, T. An investigation of the Bacillus pasteurii group. Journal of Bacteriology. 28, 491-502 (1934).
  2. Greenfield, L. J. Metabolism and concentration of calcium and magnesium and precipitation of calcium carbonate by a marine bacterium. Annals of the New York Academy of Sciences. 109, 23-45 (1963).
  3. Phillips, A. J. Engineered applications of ureolytic biomineralization: a review. Biofouling. 29, 715-733 (2013).
  4. Dhami, N. K., et al. Biomineralization of calcium carbonates and their engineered applications: a review. Frontiers in microbiology. 4, 314(2013).
  5. Cuthbert, M. O., et al. Controls on the rate of ureolysis and the morphology of carbonate precipitated by S. Pasteurii biofilms and limits due to bacterial encapsulation. Ecological Engineering. 41, 32-40 (2012).
  6. Okwadha, G. D., et al. Optimum conditions for microbial carbonate precipitation. Chemosphere. 81, 1143-1148 (2010).
  7. Stocks-Fischer, S., et al. Microbiological precipitation of CaCO3. Soil Biology and Biochemistry. 31, 1563-1571 (1999).
  8. Lauchnor, E. G., et al. Bacterially induced calcium carbonate precipitation and strontium coprecipitation in a porous media flow system. Environmental science & technology. 47, 1557-1564 (2013).
  9. Al Qabany, A., et al. Factors Affecting Efficiency of Microbially Induced Calcite Precipitation. Journal of Geotechnical and Geoenvironmental Engineering. 138, 992-1001 (2012).
  10. Morita, R. Y. Calcite precipitation by marine bacteria. Geomicrobiology Journal. 2, 63-82 (2009).
  11. Chafetz, H. S. Marine peloids: A product of bacterially induced carbonate precipitation. Journal of Sedimentary Petrology. 56, 812-817 (1986).
  12. Biomason.com. , Available from: http://www.biomason.com (2015).
  13. Whiffin, V. S. Microbial CaCO3 precipitation for the production of biocement. , Murdoch University. PhD thesis (2004).
  14. Paassen, L. A., et al. Scale up of BioGrout: a biological ground reinforcement method. Proceedings of the 17th International Conference on Soil Mechanics and Geotechnical Engineering. , 2328-2333 (2009).
  15. Cunningham, A. B., et al. Microbially enhanced geologic containment of sequestered supercritical CO2. Energy Procedia. 1, 3245-3252 (2009).
  16. Mitchell, A. C., et al. Biofilm enhanced geologic sequestration of supercritical CO2. International Journal of Greenhouse Gas Control. 3, 90-99 (2009).
  17. Cunningham, A. B., et al. Reducing the risk of well bore leakage of CO2 using engineered biomineralization barriers. Energy Procedia. 4, 5178-5185 (2011).
  18. Jonkers, H. M., et al. Application of bacteria as self-healing agent for the development of sustainable concrete. Ecological Engineering. 36, 230-235 (2010).
  19. Tobler, D. J., et al. Transport of Sporosarcina pasteurii in sandstone and its significance for subsurface engineering technologies. Applied Geochemistry. 42, 38-44 (2014).
  20. Mortensen, B. M., et al. Effects of environmental factors on microbial induced calcium carbonate precipitation. Journal of applied microbiology. 111, 338-349 (2011).
  21. Phillips, A. J., et al. Potential CO2 leakage reduction through biofilm-induced calcium carbonate precipitation. Environmental science & technology. 47, 142-149 (2013).
  22. Robbins, R. Scanning Electron Microscope Operation. , Available from: http://www.utdallas.edu/~rar011300/SEM/Scanning%20Electron%20Microscope%20Operation.pdf (2010).
  23. vander Heide, P. X-ray Photoelectron Spectroscopy: An introduction to Principles and Practices. , John Wiley & Sons. (2011).
  24. Wiley, W. R., et al. Requirement of an alkaline pH and ammonia for substrate oxidation by Bacillus pasteurii. Journal of Bacteriology. 84, (1962).
  25. Tagliaferri, F., et al. Observing strain localisation processes in bio-cemented sand using x-ray imaging. Granular Matter. 13, 247-250 (2011).
  26. Kumar, A., et al. Microscale confinement features can affect biofilm formation. Microfluidics and Nanofluidics. 14, 895-902 (2012).
  27. Valiei, A., et al. A web of streamers: biofilm formation in a porous microfluidic device. Lab on a chip. 12, 5133-5137 (2012).
  28. LIVE/DEAD Bacterial Viability kit, Two-color bacterial viability assay. , https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/mp07007.pdf, https://www.lifetechnologies.com/ca/en/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/protocols/live-dead-baclight-bacterial-viability-protocol.html (2004).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Микробиологически Индуцированные кальцит Осадки опосредованная по
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.