Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Подготовка и Фотоакустическая Анализ клеточных транспортных средств, содержащих Gold наностержней

6.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53328

⸱

2 мая 2016 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Applied Physics, Italian National Research Council, 2Department of Experimental and Clinical Biomedical Sciences, University of Florence, Firenze, 3Department of Physics and Astronomy, University of Florence, Sesto Fiorentino, 4Department of Pharmacy and Biotechnology, University of Bologna

В этой статье

Краткое содержание

Мы показываем подготовку и рассматриваем возможность использования клеточных транспортных средств, содержащих золотые наностержни, для фотоакустической визуализации рака.

Аннотация

Золотые наностержни являются привлекательными для ряда биомедицинских применений, таких как фототермической абляции и фотоакустическом визуализации рака, благодаря их интенсивного оптического поглощения в ближней инфракрасной области окна, низкий уровень цитотоксичности и потенциал дома в опухоли. Тем не менее, их доставки к опухоли по-прежнему остается проблемой. Инновационный подход состоит из эксплуатации тропности опухолеассоциированными макрофагов , которые могут быть загружены с золотыми наностержней в пробирке. Здесь мы опишем подготовку и Фотоакустический осмотр транспортных средств, содержащих клеточных золотых наностержней. ПЭГилированные золотые наностержни, модифицированные соединения четвертичного аммония, с целью достижения профиля катионной. При контакте с мышиными макрофагами в обычных чашках Петри, эти частицы оказываются претерпевают массовое потребление в эндоцитических везикул. Затем эти клетки встраиваются в биополимерных гидрогелей, которые используются для проверки того, что стабильность фотоакустическом преобразованиячастиц сохраняется в их включения в клеточные транспортные средства. Мы уверены в том, что эти результаты могут обеспечить новое вдохновение для разработки новых стратегий для доставки плазмонных частиц к опухолям.

Введение

За последнее десятилетие различные плазмонных частицы , такие как золото наностержней, нанооболочек и наноклеток, получили большое внимание для применения в биомедицинской оптики 1, 2, 3, 4. В противоречии со стандартными золотыми наносферы, эти новые частицы резонируют в окне ближней инфракрасной области спектра (NIR) , которая обеспечивает глубокой оптического проникновения через тело и самого высокого оптического контраста над эндогенными компонентами 1. Эта особенность вызвала интерес к инновационных приложений, таких как фотоакустическом (ПА) и в производстве фототермическому абляции рака. Тем не менее, ряд вопросов, сдерживать клиническое проникновение этих частиц. Например, их оптическая активация имеет тенденцию вызывать их перегрев и модифицировать их функциональные формы в сторону более сферических профилей, которые приводит в действие photoinstability 5, 6, 7, 8 SUP>, 9. Другой вопрос, который доминирует в научной дискуссии является их системная доставка в опухоли. В частности, золотые наностержни комбинировать размеры, которые идеально подходят для пронизывают опухолей, которые показывают повышенную проницаемость и удерживание и легкость сопряжения с специфическими зондами злокачественных маркеров. Таким образом, их подготовка к прямой инъекции в кровоток воспринимается как осуществимый схеме 10, 11, 12, 13. Тем не менее, этот маршрут остается проблематичным, причем большая часть частиц становится охваченными системой мононуклеарных фагоцитов 10, 11, 12. Кроме того, еще одна проблема заключается в оптический и биохимический стабильность частиц после циркуляции через корпус 14. Когда частицы теряют коллоидной стабильности и заполнитель, их плазмонных особенности и динамика теплопередачи может пострадать от плазмонного муфты 15, 16, 17 и поперечного перегрева 18.

Совсем недавно, понятие эксплуатировать тропизм опухолеассоциированными макрофагов возникла как альтернатива смарт - 19, 20, 21. Эти клетки держать врожденную способность обнаруживать и пронизывают опухолей с высокой специфичностью. Таким образом, одна перспектива может быть , чтобы изолировать эти клетки от пациента, загружать их с золотыми наностержней в пробирке , а затем вводят их обратно в организм пациента, с намерением использовать их в качестве клеточных транспортных средств, отвечающих за доставку. Еще одним преимуществом было бы получить больше контроля над оптической и биохимической стабильности частиц, так как их биологический интерфейс будет построен в пробирке. Тем не менее, характеристики этих клеточных транспортных средств в качестве оптических контрастных агентов необходим критический анализ.

В этой работе мы описываем подготовку и критические вопросы cellulА.Р. транспортных средств, содержащих золотые наностержни для визуализации ПА рака. ПЭГилированные золотые наностержни , модифицированные соединения четвертичного аммония 22, с тем чтобы добиться катионный профиль , который , как ожидается, способствовать их взаимодействия с плазматических мембран 23, 24. Эти частицы подвергаются эффективной и неспецифическое поглощение от большинства клеточных типов, мы надеемся, не мешая много с их биологическими функциями. Мышиные макрофаги загружены до целых 200, 000 катионных золотых наностержней на клетку, которые становятся заключены в плотных эндоцитических везикул. Эта конфигурация должна возникнуть беспокойство, из-за угрозы плазмонного сцепления и перекрестного перегрева внутри этих пузырьков. Таким образом, макрофаги встроены в биополимерных гидрогелей, которые имитируют биологических тканей, для того, чтобы убедиться, что большинство стабильности преобразования PA частиц сохраняется при переходе от ростовой среды к эндоцитических везикул. EffectivКритерии оценки электронной разработаны для того, чтобы измерить стабильность преобразования ПА в условиях непосредственный интерес для работы с изображениями PA. Перепрофилирования порог устанавливается в самом начале оптической нестабильности после череды 50 лазерных импульсов с типичной частотой повторения 10 Гц.

Мы уверены в том, что эти результаты могут обеспечить импульс для разработки новых стратегий для доставки плазмонных частиц к опухолям.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Примечание: Все концентрации золота наностержней выражаются в терминах номинальных molarities Au. Для сравнения с другими работами, обратите внимание, что 1 M Au примерно соответствует 20 мкМ золотых наностержней, в нашем случае.

1. Получение катионного золота наностержней

Примечание: Метод начинается с синтеза цетримония бромида (СТАВ) -capped золота наностержней по автокаталитическому уменьшению HAuCl 4 с аскорбиновой кислотой, в соответствии с протоколом , введенной Nikoobakht др 25 и адаптированы в соответствии с Ratto и др. 26.. Затем эти золотые наностержни модифицированы для того , чтобы получить больше биосовместимостью и сродство к плазматических мембран, с помощью комбинации полиэтиленгликоля нити 10, 11, 27, 28 и четвертичные аммониевые соединения 22.

  1. Очищают 24 мл СТАВ-блокированы золотые наностержни на concentratioN 450 мкМ Au с помощью двух циклов центрифугирования (12000 х г, 30 мин) и декантации. Убедитесь в том, что отношение мертвого объема до первоначального объема составляет около 1/200 или ниже для всех стадий центрифугирования в этом протоколе. С помощью 500 мкМ водного СТАВ в качестве моющего раствора, и, наконец, перевести частицы в 6 мл 100 мМ ацетатного буфера при рН 5, содержащем 500 мкМ ЦТАБ и 0,005% (об / об) полисорбат 20.
  2. Добавить 30 мкл 10 мМ водного альфа-метокси-омега-меркапто-поли (этиленгликоль) (MW ~ 5000) и оставить реагировать в течение 30 мин при 37 ° С.
  3. Добавить 30 мкл 100 мМ (11-Mercaptoundecyl) - N, N, N -trimethylammonium бромид в диметилсульфоксиде и оставляют в покое в течение 24 ч при 37 ° С.
  4. Затем добавляют 18 мл 0,005% (об / об) полисорбат 20 в воде и очищают эти частицы с помощью четырех циклов центрифугирования (12000 х г, 30 мин) и декантации. С помощью 0,005% (об / об) полисорбат 20 в воде в качестве моющего раствора и, наконец, передача частиц в 2,4 мл стерильного PBS при рН7.4. Окончательное номинальная концентрация золота составляет 4,5 мМ.

2. Загрузка мышиных макрофагах с Gold наностержней

  1. Используйте / макрофагального линии клеток моноцитов J774A.1 и DMEM, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки, 1 мМ глутамина, 100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина в качестве культуральной среды. Пластина 5 х 10 5 клеток в четырех чашках Петри диаметром 60 мм и позволяют им расти в течение 24 часов, с тем, чтобы быть субконфлюентные в момент отрыва (этап 2.2).
    1. На протяжении всего протокола, поддерживать клетки в стандартных условиях культивирования (37 ° С, 5% СО 2, 95% воздуха и 100% относительной влажности). Используйте шкаф ламинарного потока и соответствующие средства индивидуальной защиты для манипулирования клетками.
  2. Через 24 часа, загрузите клетки с катионными золота наностержней и подготовить их для встраивания в хитозана фильмов:
    1. Для того, чтобы позволять частицам поглощаться клетками, добавляют аликвоту 4,5мМ Au катионный золота нанострежни в PBS в каждую чашку Петри таким образом, чтобы достичь конечной концентрации 100 мкМ Au. Оставьте чашки Петри в инкубации в течение 24 ч.
    2. Затем наблюдать клетки под оптическим микроскопом, чтобы подтвердить свои хорошие условия и загрузку. Клетки должны демонстрировать свою нормальную морфологию и ряд темных внутриклеточных везикул. Открепления клеток с помощью скребка, объединить те из двух чашек Петри, для достижения подходящего количества клеток для следующих стадий ( по крайней мере , 2 × 10 6 клеток), и центрифугировать их (120 XG, 6 мин) , чтобы устранить любые избыток катионных золотых наностержней. Клеточный осадок должен выглядеть почти черный.
    3. Приостанавливать осадок в 2 мл PBS и подсчета клеток с использованием камеры Бюркера. Центрифуга суспензию , содержащую 2 х 10 6 клеток (120 XG, 6 мин) и зафиксировать их осадок в 2 мл 3,6% (вес / объем) формальдегида в PBS в течение десяти минут при комнатной температуре. И, наконец, мыть эти гранулы трижды centrifugatион (120 XG, 6 мин), для того, чтобы удалить закрепитель. Используйте PBS в качестве промывочного раствора.

3. Заливка макрофагами в хитозан фильмов

Примечание: Специфические свойства хитозана 26, 27, 28, 29 эксплуатируются для получения биомиметических фантомы , содержащие макрофаги окрашивали с катионными золота наностержней. Что касается других гидрогели , такие как агарозы, хитозан позволяет фильмы, которые намного сильнее и тоньше, что имеет решающее значение для PA микроскопии 6. Изготовление этих фантомов осуществляется в соответствии с предыдущими протоколами 29, 30, 31 с некоторыми изменениями , как это предписано в 30 следующих параметров .

  1. Готовят подкисленного (рН 4,5, полученный добавлением уксусной кислоты) и вязкую 3% (вес / объем) низкомолекулярного хитозана молекулярной (в среднем 120 МВт кДа) раствор, тщательно перемешать ипусть гомогенизируют в течение 24 ч при 40 ° С.
  2. Затем смешать мышиные макрофаги , содержащие катионный золотые наностержни (2 х 10 6 клеток) с 500 мкл раствора хитозана.
  3. Для того чтобы получить ~ 50 мкм фантомы, влить 250 мг смеси в 1,91 см 2 полистирольные формы и оставить их в токе азота в течение 24 ч. После этого обработать эти образцы с 500 мкл 1 М NaOH, для того, чтобы вызвать образование поперечных связей, и промойте их 10 мл сверхчистой воды.

4. Испытание устойчивости фотоакустическом преобразования

Примечание: Стабильность преобразования PA исследована с помощью экспериментов PA с самодельной установки, которая описана в 6.

  1. Приостановка хитозана пленку, содержащую Макрофагов в деионизированной воде, например при помощи пластикового держателя, погруженной в чашку Петри, с тем, чтобы держать на расстоянии ~ 5 мм от нижней части пластины. Поместите эту пластину на микрометрической стадии XYс целью контроля положения образца.
  2. Фокусировка лазерного луча с ~ длительностью 5 нс импульса в резонанс с продольной плазмонного полосы золотых наностержней (например, с помощью оптического параметрического генератора , накачиваемого третьей гармоники добротности Nd: YAG лазера с диапазоном длин волн от 400 - 2500 нм и длительностью импульса 5 нсек) перпендикулярно к поверхности пленки с диаметром пятна ~ 300 мкм.
    1. Поместите аттенюатор в передней части лазерного выхода для настройки плотности энергии лазерного излучения и использовать делитель луча , чтобы сфокусировать часть лазерного луча измерителя энергии (например, пироэлектрический детектор) и контролировать колебания плотности энергии. Поддерживать оптическую плотность энергии ниже ~ 1 мДж / см 2 на импульс во время выравнивания. Используйте соответствующие защитные очки для защиты от лазера, когда лазер включен.
  3. Dip ультразвуковой датчик (частотный диапазон 1 - 20 МГц) в чашки Петри ~ 2 мм от поверхности пленки и отрегулируйте ее положение с помощью микрометрических переводыи вращательные этапы, чтобы максимизировать сигнал PA, излучаемый из пленки.
  4. Определение зонда плотности энергии F LO , который не повреждает образец 6:
    1. Облучить случайную точку образца при плотности энергии около 1 мДж / см 2 на один импульс в течение не менее 500 импульсов. Для каждого импульса, получить соответствующий сигнал PA от ультразвукового преобразователя и плотности энергии лазерного излучения от счетчика энергии с помощью осциллографа. Назовите среднюю плотность энергии как F LO суда.
    2. Рассчитать интенсивность сигнала ПА как его амплитуды от пика до пика в зависимости от числа импульсов. Для того , чтобы противовеса флуктуации интенсивности лазерного, нормализовать амплитуду каждого сигнала ПА отношение собственного флюенса к F LO суда. Анализ тенденции нормированной интенсивности ПА в зависимости от числа импульсов и проверить его стабильность во времени.
    3. В случае нестабильности, повторите шаги 4.4.1 4.4.3 с более низким значением F LO до суда. В случае стабильности, повторить их со значением F LO проб выше на ~ 10%, до тех пор пока потеря устойчивости не возникает. Установите датчик плотности потока F LO , как второй по величине значения F LO испытание , которое обеспечивает стабильность.
  5. Мера изменения формы пороговой дозы:
    1. Выбрать другой случайную точку образца и зонда средней интенсивности PA (I LO а) более 500 импульсов на F LO.
    2. Установите номинальную плотность энергии больше , чем F LO и доставить 50 импульсов. Назовите их среднюю плотность энергии как F возб.
    3. Зонд средней интенсивности PA (I LO б) свыше 500 импульсов на F LO еще раз. Вычислить отношение R = I LO B / I LO а. Значение R меньше единицы свидетельствует о необратимом изменению оптических свойств образца.
    4. Используйте микрометрическое этап XY, чтобы переместить фильм и изменить POINт образца в случайном порядке. Повторите шаги 4.5.1 для 4.5.4 с различными значениями F возб, с тем, чтобы занять несколько значений R ниже, вокруг и выше единицы. 15 баллов являются разумными.
    5. Участок R как функцию F возб и определить порог изменения формы флюенса F - го , как это значение , когда R начинает отличаться от одной за статистической неопределенности. 6

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Здесь, возможности сотовых транспортных средств, содержащих золото наностержни для визуализации ПА рака показана вместе с типичными результатами протокола.

ПЭМ изображения на рисунке 1 показывают обычный внешний вид частиц после стадии 1 и их клеточных транспортных средств после шага 2. Получение частиц и клеток для визуализации ТЕМ описан в другом месте 17. Катионные золотые наностержни подвергаютс...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Понятие целевой опухолеассоциированных макрофаги развивается как мощная концепция борьбы с раком 34, 35, 36. Здесь, вместо их уничтожения, эти клетки вербуют в качестве клеточных транспортных средств, чтобы принести золотые наностержни в опухоль, за счет эксплуатации их тропизм. Эта перспектива требует продуманный дизайн частиц, их интеграции в клетки и их характеристики. Мы обнаружили, что светостойкость мышиных макрофагов, нагруженных катионных золота наностержней...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа была частично поддержана Regione Toscana и Европейским сообществом в рамках пузырьковой Eranet + Проекты СЗП и BI-TRE.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Гексадецилтриметиламмония бромидSigma-AldrichH6269Для синтеза золотых наностержней
Тригидрат хлорида золотаSigma-Aldrich520918Для синтеза золотых наностержней
Нитрат серебраSigma-AldrichS6506Для синтеза золотых наностержней
L-аскорбиновая кислотаSigma-AldrichA5960Для синтеза золотых наностержней
Боргидрид натрияSigma-AldrichДля синтеза наносемян золота
MeO-PEG-SHIris BiotechPEG1171для PEGylate золотых наностержней. Молекулярная масса около 5 000 Да.
Уксусная кислотаSigma-Aldrich320099Для ПЭГилирования золотых наностержней и солюбилизации хитозана
Ацетат натрияSigma-AldrichS8750Для ПЭГилат золотых наностержней
(11-меркаптоундецил)-N,N,N-триметиламмония бромидSigma-Aldrich733305Для модификации золотых наностержней четвертичными аммониевыми соединениями
ДиметилсульфоксидSigma-Aldrich276855Для солюбилизации (11-меркаптоундецил)-N,N,N-триметиламмония бромида
Polysorbate 20Sigma-AldrichP2287Для центрифугирования PEGилированных золотых наностержней
PBSLonzaBE17-516FДля суспензии золотых наностержней перед инкубацией с клетками и для обработки гранул клеток
J774a.1ATCCTIB-67Моноцитарная/макрофагальная мышиная клеточная линия
DMEMLonzaBE12-707FСреда для культивирования клеток
FBSLonzaDE14-801FДля добавления в среду для культивирования клеток
L-глутаминLonzaBE17-605EДля добавления в среду для культивирования клеток
Пенициллин/стрептомицинLonzaDE17-602EДля добавления в среду для культивирования клеток
чашка Петричашка Петри NEST705001Культура клеток тарелка
Скребок для клетокEuroCloneES7018Для отделения клеток
ФормальдегидFluka47630Для фиксации клеток
Хитозан, низкомолекулярныйSigma-Aldrich44886975-85% деацетилированный. Молекулярная масса около 120 000 Да.
Гидроксид натрияSigma-Aldrich306576Для нерастворения хитозана и получения гидрогеля
Полистирольные клеточные культуральные планшетыNEST702011Используются в качестве форм для изготовления гидрогелей хитозана
Оптический параметрический генератор, накачиваемый третьей гармоникой лазера Nd:YAG с модуляцией добротностиContinuum, Santa Clara, СШАSurelite OPO plusИсточник оптического возбуждения для фотоакустических испытаний
Пироэлектрический детектор Gentec, Квебек, КанадаQE8SPДля контроля оптического флюенса для фотоакустических испытаний
Предварительно усиленный игольчатый гидрофонPrecision Acoustic, Дорсет, ВеликобританияМодель с диаметром датчика 1 мм и диапазоном частот 1-20 МГцДля измерения фотоакустических сигналов

Ссылки

  1. Ratto, F., Matteini, P., Centi, S., Rossi, F., Pini, R. Gold nanorods as new nanochromophores for photothermal therapies. J. Biophotonics. (1-2), 4-41 (2011).
  2. Dreaden, E. C., Alkilany, A. M., Huang, X., Murphy, C. J., El-Sayed, M. A. The golden age: gold nanoparticles for biomedicine. Chem. Soc. Rev. 41, 2740-2779 (2012).
  3. Hahn, M. A., Singh, A. K., Sharma, P., Brown, S. C., Moudgil, B. M. Nanoparticles as Contrast Agents for in-Vivo Bioimaging: Current Status and Future Perspectives. Anal. Bioanal. Chem. 399 (1), 3-27 (2011).
  4. Dreaden, E. C., Austin, L. A., Mackey, M. A., El-Sayed, M. A. Size matters: gold nanoparticles in targeted cancer drug delivery. Ther. Deliv. 3 (4), 457-478 (2012).
  5. Manohar, S., Ungureanu, C., Van Leeuwen, T. G. Gold nanorods as molecular contrast agents in photoacoustic imaging: The promises and the caveats. Contrast Media Mol. Imaging. 6 (5), 389-400 (2011).
  6. Cavigli, L., et al. Size Affects the Stability of the Photoacoustic Conversion of Gold Nanorods. J. Phys. Chem. C. 118 (29), 16140-16146 (2014).
  7. Chen, L. -C., et al. Enhanced photoacoustic stability of gold nanorods by silica matrix confinement. J. Biomed. Opt. 15 (1), 016010(2010).
  8. Ratto, F., et al. CW laser-induced photothermal conversion and shape transformation of gold nanodogbones in hydrated chitosan films. J. Nanopart. Res. 13, 4337-4348 (2011).
  9. Mercatelli, R., et al. Quantitative readout of optically encoded gold nanorods using an ordinary dark-field microscope. Nanoscale. 5 (20), 9645-9650 (2013).
  10. Von Maltzahn, G., et al. Computationally guided photothermal tumor therapy using long-circulating gold nanorod antennas. Cancer Res. 69 (9), 3892-3900 (2009).
  11. Jokerst, J. V., Cole, A. J., Van De Sompel, D., Gambhir, S. S. Gold nanorods for ovarian cancer detection with photoacoustic imaging and resection guidance via Raman imaging in living mice. ACS Nano. 6 (11), 10366-10377 (2012).
  12. Huang, X., et al. A reexamination of active and passive tumor targeting by using rod-shaped gold nanocrystals and covalently conjugated peptide ligands. ACS Nano. 4 (10), 5887-5896 (2010).
  13. Alkilany, A. M., Thompson, L. B., Boulos, S. P., Sisco, P. N., Murphy, C. J. Gold nanorods: Their potential for photothermal therapeutics and drug delivery, tempered by the complexity of their biological interactions. Adv. Drug Deliv. Rev. 64, 190-199 (2012).
  14. Centi, S., et al. In vitro assessment of antibody-conjugated gold nanorods for systemic injections. J. Nanobiotechnology. 12, 55(2014).
  15. Jain, P. K., Eustis, S., El-Sayed, M. A. Plasmon coupling in nanorod assemblies: Optical absorption, discrete dipole approximation simulation, and exciton-coupling model. J. Phys. Chem. B. 110 (37), 18243-18253 (2006).
  16. Funston, A. M., Novo, C., Davis, T. J., Mulvaney, P. Plasmon coupling of gold nanorods at short distances and in different geometries. Nano Lett. 9 (4), 1651-1658 (2009).
  17. Mazzoni, M., Ratto, F., Fortunato, C., Centi, S., Tatini, F., Pini, R. Partial Decoupling in Aggregates of Silanized Gold Nanorods. J. Phys. Chem. C. 118 (34), 20018-20025 (2014).
  18. Lapotko, D. O., Lukianova, E., Oraevsky, A. A. Selective laser nano-thermolysis of human leukemia cells with microbubbles generated around clusters of gold nanoparticles. Lasers Surg. Med. 38 (6), 631-642 (2006).
  19. Choi, M. R., et al. A cellular trojan horse for delivery of therapeutic nanoparticles into tumors. Nano Letters. 7 (12), 3759-3765 (2007).
  20. Dreaden, E. C., Mwakwari, S. C., La Austin,, Kieffer, M. J., Oyelere, A. K., El-Sayed, M. A. Small molecule-gold nanorod conjugates selectively target and induce macrophage cytotoxicity towards breast cancer cells. Small. 8 (18), 2819-2822 (2012).
  21. Yang, T. D., et al. Real-time phase-contrast imaging of photothermal treatment of head and neck squamous cell carcinoma: an in vitro study of macrophages as a vector for the delivery of gold nanoshells. J. Biomed. Opt. 17 (12), 128003(2012).
  22. Vigderman, L., Manna, P., Zubarev, E. R. Quantitative Replacement of Cetyl Trimethylammonium Bromide by Cationic Thiol Ligands on the Surface of Gold Nanorods and Their Extremely Large Uptake by Cancer Cells. Angew. Chem. Int. Ed. (English). 51 (3), 636-641 (2012).
  23. Richard, J. P., et al. Cell-penetrating peptides: A reevaluation of the mechanism of cellular uptake. J. Biol. Chem. 278 (1), 585-590 (2003).
  24. Delehanty, J. B., Boeneman, K., Bradburne, C. E., Robertson, K., Bongard, J. E., Medintz, I. L. Peptides for specific intracellular delivery and targeting of nanoparticles: implications for developing nanoparticle-mediated drug delivery. Ther. Deliv. 1, 411-433 (2010).
  25. Nikoobakht, B., El-Sayed, M. A. Preparation and growth mechanism of gold nanorods (NRs) using seed-mediated growth method. Chem. Mater. 15 (10), 1957-1962 (2003).
  26. Ratto, F., Matteini, P., Rossi, F., Pini, R. Size and shape control in the overgrowth of gold nanorods. J. Nanopart. Res. 12 (6), 2029-2036 (2009).
  27. Niidome, T., et al. PEG-modified gold nanorods with a stealth character for in vivo applications. J. Control. Release. 114 (3), 343-347 (2006).
  28. Tatini, F., et al. Size dependent biological profiles of PEGylated gold nanorods. J. Mater. Chem. B. 2, 6072-6080 (2014).
  29. Matteini, P., Ratto, F., Rossi, F., Centi, S., Dei, L., Pini, R. Chitosan films doped with gold nanorods as laser-activatable hybrid bioadhesives. Adv. Mater. 22 (38), 4313-4316 (2010).
  30. Matteini, P., Ratto, F., Rossi, F., de Angelis, M., Cavigli, L., Pini, R. Hybrid nanocomposite films for laser-activated tissue bonding. J. Biophotonics. 5 (11-12), 868-877 (2012).
  31. Matteini, P., Tatini, F., Cavigli, L., Ottaviano, S., Ghini, G., Pini, R. Graphene as a photothermal switch for controlled drug release. Nanoscale. 6, 7947-7953 (2014).
  32. Ratto, F., Witort, E., et al. Plasmonic Particles that Hit Hypoxic Cells. Adv. Funct. Mater. 25 (2), 316-323 (2015).
  33. Chithrani, D. B. Intracellular uptake, transport, and processing of gold nanostructures. Molec. Membrane Biol. 27 (7), 299-311 (2010).
  34. Mitchem, J. B., et al. Targeting tumor-infiltrating macrophages decreases tumor-initiating cells, relieves immunosuppression, and improves chemotherapeutic responses. Cancer Res. 73 (3), 1128-1141 (2013).
  35. Mantovani, A., Allavena, P. The interaction of anticancer therapies with tumor-associated macrophages. J. Exp. Med. 212 (4), 435-445 (2015).
  36. Panni, R. Z., Linehan, D. C., DeNardo, D. G. Targeting tumor-infiltrating macrophages to combat cancer. Immunotherapy. 5 (10), 1075-1087 (2013).
  37. Oh, E., et al. Cellular uptake and fate of PEGylated gold nanoparticles is dependent on both cell-penetration peptides and particle size. ACS Nano. 5 (8), 6434-6448 (2011).
  38. Yuan, H., Fales, A. M., Vo-Dinh, T. TAT peptide-functionalized gold nanostars: Enhanced intracellular delivery and efficient NIR photothermal therapy using ultralow irradiance. J. Am. Chem. Soc. 134 (28), 11358-11361 (2012).
  39. Ladest, S., Fales, A. M., Domard, A. Multi-membrane hydrogels. Nature. 452, 76-79 (2008).
  40. Matteini, P., et al. Photothermally activated hybrid films for quantitative confined release of chemical species. Angew. Chem. Int. Ed. (English). 52, 5956-5960 (2013).
  41. Khor, E., Lim, L. Y. Implantable applications of chitin and chitosan. Biomaterials. 24 (13), 2339-2349 (2003).
  42. Kennedy, L. C., et al. T cells enhance gold nanoparticle delivery to tumors in vivo. Nanoscale Res. Lett. 6 (1), 283(2011).
  43. Pissuwan, D., Valenzuela, S. M., Killingsworth, M. C., Xu, X., Cortie, M. B. Targeted destruction of murine macrophage cells with bioconjugated gold nanorods. J. Nanopart. Res. 9 (6), 1109-1124 (2007).
  44. Jokerst, J. V., Thangaraj, M., Kempen, P. J., Sinclair, R., Gambhir, S. S. Photoacoustic imaging of mesenchymal stem cells in living mice via silica-coated gold nanorods. ACS Nano. 6 (7), 5920-5930 (2012).
  45. Ding, H., et al. Gold nanorods coated with multilayer polyelectrolyte as contrast agents for multimodal imaging. J. Phys. Chem. C. 111 (34), 12552-12557 (2007).
  46. Esposito, G., et al. et al. In vivo laser assisted microvascular repair and end-to-end anastomosis by means of indocyanine green-infused chitosan patches: A pilot study. Lasers Surg. Med. 45 (5), 318-325 (2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

опухоле-ассоциированные макрофагиПЭГилированные золотые наностержнихитозановый гидрогельфотоакустическая микроскопияплазмонные частицыэндоцитозные везикулыпорог изменения формы
Подготовка и Фотоакустическая Анализ клеточных транспортных средств, содержащих Gold наностержней
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.