Представлен протокол экстракции и предварительного концентрирования эстрадиола из проб воды с использованием автоматизированной и миниатюризированной системы.
Методическая статья
Представлен протокол экстракции и предварительного концентрирования эстрадиола из проб воды с использованием автоматизированной и миниатюризированной системы.
Новый метод для извлечения твердой фазы (SPE) в пробах окружающей среды, водных предлагается. Разработанная прототип является экономически эффективным и удобным, а также позволяет выполнять быстрый, простой и автоматизированной SPE. Предварительно концентрированный раствор совместим с помощью иммунологического анализа, с содержанием низкой органическом растворителе. Описан метод для извлечения и предварительной концентрации естественного гормона 17 -эстрадиола в пробах воды 100 мл. С обращенной фазой НПП выполняется с октадецил-кремнезема сорбента и элюирование проводится с 200 мкл метанола 50% об / об. Элюент разбавляют добавлением ди-воды, чтобы снизить количество метанола. После подготовки вручную столбец SPE, общая процедура выполняется автоматически в течение 1 часа. В конце процесса, концентрация эстрадиола измеряется с использованием коммерческого энзим-связанного иммунного-сорбента анализа (ELISA). 100-кратное предварительно концентрация достигается и содержание метанола в только 10% объем / объем. Полное восстановление молекулыдостигаются с 1 нг / л шипами образцы деионизированной и синтетические морской воды.
Подготовка образца является важным шагом в любом аналитическом процессе. В частности, удаление матричных эффектов, уменьшения помех, и обогащение аналита необходимы для получения точных результатов и достичь низких пределов обнаружения. Эндокринные нарушения соединения (СЭД) имеют особый интерес в связи с их действием на живые организмы, даже когда присутствующие на очень низких уровней в окружающей среде. Естественный гормон эстрадиол 17β-присутствует на загрязнение воды ЕС Наблюдать список и склонны быть добавлены в список приоритетных веществ, регулируемых в рамках Рамочной директивы Европейской Водной. Твердофазная экстракция (ТФЭ) обычно применяется для анализа ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Примечание: Следующий протокол описывает SPE выполнены на 100 мл воды образца с C18 сорбента и элюирование 50% об / об метанол. Обогащенный образец разбавляют, чтобы достичь 10% об / об метанол перед анализом с твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) комплект.
1. Подготовка реагентов
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Воспроизводимость сорбента упаковки оценивали путем сушки и взвешивания пипеткой сорбента в стеклянных флаконах, и результат показан на рисунке 1. Воспроизводимость момент инъекции тестировали на образцах 100 мл, как показано на рисунке 2. Концентрация в начальной и предварительно Концентрированный шипами образцы определяется с использованием коммерческого ELISA комплекта для 17 -эстрадиола и показаны на рисунке 3.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Предложен новый способ получения проб воды с последующим анализом с помощью иммуноферментного анализа. Прибор позволяет выполнять извлечение твердой фазы в автоматизированном и удобный способ.
Фильтрация пробы воды до его введения в систему является критическим. Любые частицы, все еще присутствующие в растворе потенциально вызвать засорение жидкостного сети и препятствуют колонку SPE. Еще одним важным шагом является подготовка колонке SPE. Количество частиц в колонке решающее значение для до.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторам нечего раскрывать.
Эта работа финансировалась Седьмой рамочной программой Европейского Союза FP7/2007-2013 в рамках грантового соглашения No 265721. Авторы благодарят Институт безопасности пищевых продуктов RIKILT (NL) за поддержку в этом проекте.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Фильтрующая мембрана 0,2 мкм; m размер пор | Merck Millipore | GNWP04700 | Для фильтрации проб |
| Нейлоновая мембрана 11 μ m размер пор | Merck Millipore | NY1104700 | Для колонки SPE |
| Одноразовый биопсийный перфоратор 5 мм | Medical Budget | 39302439 | |
| Nucleodur C18 ec | Macherey Nagel | 713550.01 | 50 μ m диаметр частиц |
| Синтетическая морская вода | Sigma Aldrich | SSWS500-500ML | |
| Метанол | VWR | ||
| 17бета-эстрадиол стандарт | Enzo Life Science | 300 нг/мл | |
| 17бета-эстрадиол ИФА набор | Enzo Life Science | ADI-900-008 | 96 лунок, диапазон 30 - 3 000 нг/л |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение