Сообщение Колонка дериватизации с использованием реакции потока высокоэффективной жидкостной хроматографии Колонки

Summary

Представлен протокол использования высокопроизводительных жидкостных хроматографических колонок реакционного потока для методов, использующих дериватизацию после колонки (PCD).

Abstract

Представлен протокол использования высокоэффективных жидкостных хроматографических колонок с реакционным потоком для методов, использующих дериватизацию после колонки (PCD). Основной трудностью в адаптации PCD к современным системам и колонкам ВЭЖХ является необходимость в реакционных катушках большого объема, которые позволяют смешивать реагенты и затем протекать реакцию дериватизации. Этот большой мертвый объем столбцов приводит к расширению полосы, что приводит к потере наблюдаемой эффективности разделения и даже чувствительности обнаружения. При дериватизации реакционного потока после дериватизации колонны (RF-PCD) реагент (реагенты) дериватизации закачивается против потока подвижной фазы в один или два внешних порта колонны реакционного потока, где он смешивается с отходами колонны внутри фритты, расположенной внутри фитинга на конце колонны. Этот метод позволяет более эффективно смешивать сток колонны и дериватизационные реагенты, что означает, что объем реакционных контуров может быть сведен к минимуму или даже полностью исключен. Было обнаружено, что методы RF-PCD работают лучше, чем обычные методы PCD, с точки зрения наблюдаемой эффективности разделения и отношения сигнал/шум. Еще одним преимуществом методов RF-PCD является возможность мониторинга сточных вод, поступающих из центрального порта, в их пониженном состоянии. РФ-ПЦД в настоящее время испытан на относительно небольшом диапазоне постколоночных реакций, однако в настоящее время нет оснований предполагать, что РЧ-ПХД не может быть адаптирован к какой-либо существующей реакции дериватизации после колонки с одним или двумя компонентами (при условии одновременного добавления обоих реагентов).

Introduction

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) в сочетании с пост колонку дериватизации (PCD) является мощным инструментом, который полезен при решении ряда вопросов, в аналитической лаборатории. Он может быть использован для обнаружения соединений, которые в противном случае невозможно обнаружить с набором детекторов , доступных ^1,2, увеличивают сигнал целевого аналита, что позволяет более низкие пределы обнаружения и количественного ^3-5 или селективно дериватизации мишень аналит, чтобы избежать матричные эффекты ^6. Обычно используемые реакции PCD включают реакцию аминов, таких как аминокислоты, с орто-phthaladehyde ^7-9,

Protocol

Внимание: Пожалуйста , обратитесь к паспорте безопасности (MSDS) для всех материалов и реагентов перед использованием (т.е. паспорт безопасности для метанола). Обеспечивать использование всех соответствующих правил безопасности при работе с растворителями и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) элюент. Обеспечить надлежащее использование технических средств контроля ВЭЖХ, аналитического баланса и детектора измерительных приборов, а также обеспечить использование средств индивидуальной защиты (защитные очки, перчатки, лабораторный халат, полные штаны длины, и закрытую обувь).

Примечание: Этот протокол описывает 3 способа реакции потока дериватизации после коло....

Results

Первый метод ПКА , который был адаптирован для использования RF-PCD был дериватизации антиоксидантов с использованием 2,2-дифенил-1-picrylhydrazil радикал (ДФПГ ^{•) 24.} Эта реакция была введена Koleva и др. ²⁵ и широко используется с тех пор. Обнаружение опирается на обесцвечивания ДФПГ ^• радикала в присутствии активных форм кислорода, следовательно, наличие антиоксидантов приводит к уменьшению наблюдаемой поглощательной способности . ДФПГ ^• реакции часто ис.......

Discussion

РЧ-ПКА позволяет эффективное перемешивание дериватизации реагента со сточными водами после ВЭЖХ колонки без использования катушки реакции, сводя к минимуму эффекты уширения полос и повышение эффективности сепарации. методы РЧ-PCD также показали улучшение в ответ сигнала относительно способа обнаружения. Camenzuli и др. ²⁸ был первым , чтобы сообщить использование колонн потока с реакцией ДФПГ ^• для обнаружения ROS в образце кофе эспрессо. Их исследование включало анализ и оптимизацию услов.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Инструмент для ВЭЖХ	Agilent	серии 1290 HPLC
Дополнительный насос(ы) для системы дериватизации	Shimadzu	LC-20A
RF colum			Некоммерческий
трубка PEEK Sigma	Aldrich	Z227307
Стопоры			колонны В комплекте с колонной
PEEK труборез	Sigma Олдрич	Z290882
Аналитические весы Весы			4-точечные аналитические весы
Секундомер			Ненаучное оборудование
Коллекционные флаконы			Подойдет любой маленький флакон с плоским дном, < > например, , флаконы с ВЭЖХ Флаконы
		с ВЭЖХ Будут	зависеть от используемого инструмента
Сосуды для подвижной фазы и дериватизации раствора(ов)	Sigma Aldrich	Z232211
Общая лабораторная посуда			Объемные колбы, пипеты, <> и т.д. Количество и объемы зависят от метода подготовки образца.
Метанол	Сигма Олдрич	34860
DPPH	Сигма Олдрич	D9132
Ацетат аммония	Сигма Олдрич	17836
Аммиак	Сигма Олдрич	320145	Коррозионный
ацетонитрил	Сигма Олдрич	34998
Флуорескамин	Сигма Олдрич	F9015
4- аминоантипирен	Acros Organics BVBA	AC103151000
феррицианид калия	АналаР	B10204-30