Методическая статья

Исследование комплексообразования ртути (II) с Dicysteinyl тетрапептидов электрораспылительной ионизации масс-спектрометрии

DOI:

10.3791/53536

⸱

8 января 2016 г.

 , 
1Department of Chemistry and Biochemistry, University of North Carolina at Greensboro, 2Department of Chemistry, Winston-Salem State University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Представлена характеристика комплексов, образованных в различных относительных соотношениях ртути(II) и дицистеинилтетрапептидов с помощью масс-спектрометрии с помощью электрораспыления ионизации орбитрапа.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом исследовании мы оценили метод характеризации комплексов, образованных в различных относительных соотношениях ртути(II) к дицистеинилтетрапептиду, с помощью масс-спектрометрии с помощью ионизации с помощью электрораспыления. Эта стратегия основана на предыдущей успешной характеристике ртутно-дицистеинильных комплексов с участием трипептидов с использованием масс-спектрометрии среди других методов. Хлорид ртути(II) и дицистеинилтетрапептид инкубировали в дегазированной буферной среде при различных стехиометрических соотношениях. Сформированные комплексы в дальнейшем анализировались на масс-спектрометре с электрораспылением, состоящем из гибридного линейного масс-анализатора ионов и орби-ловушек. Спектры ионизационной масс-спектрометрии с помощью электрораспыления (ESI-MS) были получены в положительном режиме, а затем наблюдаемые пики были проанализированы на предмет различных структур распределения изотопов ртути и связанных с ними моноизотопных пиков. Данная работа демонстрирует, что точная стехиометрия ртути и пептида в комплексах, образующихся при определенных условиях ионизации электрораспылением, может быть определена с помощью МС ESI высокого разрешения на основе различных схем распределения изотопов ртути.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Современные клинические препараты, назначаемые для хелатной терапии отравления ртутью1, содержат тиоловую группу(ы), которая отвечает за связывание и секвестрацию ионов ртути2,3. Однако исследования показали, что эти малые тиоловые соединения [димеркаптоянтарная кислота (ДМСА) и димеркаптопропан-сульфоновая кислота (ДМПС)] не являются оптимальными для хелатной терапииртутью 4-6. Таким образом, существует необходимость в понимании ассоциации и тенденций образования комплекса ртути с тиолами для улучшения рационального лекарственного дизайна тиоловых соединений для хелатирования ртути. Недавно мы сообщили, что n-алкильные и арилдицистеинилтрипептиды с дитиоловыми группами могут служить эффективными «двойными якорями» для размещения координационных сайтов ртути(II) с образованием комплексов ртути(II):p эптида и 1:2 ртути(II):(пептида)27. Кроме того, мы изучили влияние увеличения цистеинильных остатков на образования сложного типа8. В этом исследовании мы исследуем ассоциацию ртути(II) с двумя дицистеинилтетрапептидами, где цистеинильные остатки разделены двумя аминокислотными остатками. Для того чтобы оценить влияние вспомогательных групп связывания на ртуть, промежуточными аминокислотами являются либо два (незамещенных) остатка глицина, либо два остатка глутаминовой кислоты (гамма-карбоксилированные).

Реакция цистеинилпептида с ртутью(II) требует условий, которые предотвратят окисление цистеинилтиоловых групп с образованием дисульфидных связей9. Кроме того, ассоциация ртути(II) с цистеинилпептидами с образованием различных типов ртуть-пептидных комплексов зависит от исходного соотношения ртуть(II:пептид) в реакционной смеси7,8. Типы ртутно-пептидных комплексов, образующихся в этих реакционных смесях, могут быть проанализированы с помощью масс-спектроскопии с мягкой ионизацией, которая является чувствительным аналитическим инструментом для определения видовых взаимодействий между ионами металлов и пептидами10-14. Соответственно, он обеспечит профиль различных типов ртутных пептидных аддуктов, которые образуются при заданном условии ионизации электроспреем. Здесь мы покажем, как можно получить цистеинилпептиды и растворы хлоридов ртути(II) в дегазированном буферном растворе формиата аммония, покрытом аргоном, для минимизации окисления. На примере реакции различных молярных эквивалентов ртути(II) с дицистеинилтетрапептидами мы покажем, как исходное соотношение ртути(II):p эптида влияет на типы образующихся комплексов. Мы также покажем, как масс-спектрометрия ионизации электрораспылением (ESI) может быть использована в качестве инструмента характеризации для обеспечения точной стехиометрии превращения ртути в пептид в образующихся комплексах. Соответствующий видеопротокол продемонстрирует экспериментальные условия приготовления комплексов ртути, процедуру анализа реакционных смесей в заданных условиях ионизации электроспреем и характеристику стехиометрии комплексов ртути(II)-дицистеинилтетрапептида на основе различных схем распределения изотопов ртути с использованием программы ChemCal15. Он предназначен для помощи тем, кто заинтересован в использовании орбитальной масс-спектрометрии ESI для анализа различных комплексов, образованных ионами металлов, которые существуют в различных изотопных формах.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Примечание: Пожалуйста, обратитесь все соответствующие паспорта безопасности материала (MSDS) перед использованием. Хлорид ртути является токсичным химическим. Личное защитное оборудование (перчатки, защитные очки и лаборатории пальто) должны носить при передаче ее и все связанные решения. Утилизировать решений в четко обозначенных бутылок химических отходов, предназначенных для тяжелых металлов.

1. Получение 5 мМ формиат аммония дегазированной буфера, рН 7,5

  1. Растворите 0.1576 г формиата аммония буфера в 450 мл воды для ВЭЖХ. Доводят рН указанного выше раствора с 1 М муравьиной кислоты и 1М гидроксидом аммония до 7,5. Передача этого раствора в 500 мл мерную колбу и добавить воду, чтобы ВЭЖХ калибровочной линии, чтобы сделать 5 мМ раствор формиата аммония.
  2. Дегазации 5 мМ формиата аммония буфер под вакуумом системы в течение 10 мин и продувке аргоном. Повторите два раза, и магазин решение в атмосфере аргона. В день применения, фильтруют буферный раствор через 0,2-микронный фильтр BEFORе использование.

2. Подготовка ртути (II) хлорид Solutions

  1. Взвесить 0.2375 г ртути (II), хлорида. Растворите его в 25 мл 5 мМ формиата аммония буфера для получения 0,035 М ртути (II) раствор хлорида.
  2. Добавить 0,214 мл 0,035 М раствора хлорида ртути (II), в 9.785 мл 5 мМ формиата аммония буфера, чтобы создать 7,5 х 10 -4 М раствора. Одеяло на 7,5 х 10 -4 М ртути (II) раствор с газом аргоном.

3. Подготовка CGGC маточного раствора

  1. Растворить 2,0 мг dicysteinyl тетрапептида, CGGC, в 0,118 мл ацетонитрила для ВЭЖХ, а затем добавить 1,0647 мл 5 мМ формиата аммония, рН 7,5 буфере, который был дегазируют аргоном в получая 5 мм CGGC маточного раствора.
  2. Добавить 225 мкл мМ маточного раствора CGGC 5 до 1275 мкл 5 мМ формирования аммония, рН 7,5 буфер с получением раствора М CGGC 7,5 х 10 -4.

4. Подготовкаиз различных смесей реакции ртути (II) и CGGC

  1. Получение 1: 0,5 соотношение ртути (II) Раствор CGGC
    1. Поместите 255 мкл 5 мМ формиата аммония, рН 7,5 буфер в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Добавить 30 мкл 7,5 x10 -4 М раствора хлорида ртути, (II), в 1,5 мл микроцентрифужных трубки с буфером формиата аммония.
    2. Vortex решение в течение 10 сек. Затем добавить 15 мкл 7,5 х 10 -4 М раствора CGGC в микроцентрифуге 1,5 мл. Vortex решение в течение 10 сек. Пусть решение стоять в течение 10 мин до инъекции в масс-спектрометр.
  2. Получение 1: 1 отношение ртути (II): Раствор CGGC
    1. Поместите 240 мкл 5 мМ формиата аммония, рН 7,5 буфер в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Добавить 30 мкл 7,5 x10 -4 М раствора хлорида ртути, (II), в 1,5 мл микроцентрифужных трубки с буфером формиата аммония.
    2. Vortex решение в течение 10 сек. затемдобавить 30 мкл 7,5 х 10 -4 М раствора CGGC в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Повторите таким же образом, как описано в разделе 4.1.
  3. Получение 1: 2 соотношение ртути (II): Раствор CGGC
    1. Поместите 210 мкл 5 мМ формиата аммония, рН 7,5 буфер в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Добавить 30 мкл 7,5 x10 -4 М раствора хлорида ртути, (II), в 1,5 мл микроцентрифужных трубки с буфером формиата аммония.
    2. Vortex решение в течение 10 сек. Затем добавить 60 мкл 7,5 х 10 -4 М раствора CGGC в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Повторите таким же образом, как описано в разделе 4.1.

5. Подготовка ЦВЕ маточного раствора

  1. Растворите 3,5 мг dicysteinyl тетрапептида, ЦВЕ, в 0,145 мл ацетонитрила для ВЭЖХ, чтобы растворить пептид. Затем добавьте 13,067 мл 5 мМ формиата аммония, рН 7,5 буфер, который был в дегазированной аргона, чтобы произвести 0,5 мМ раствора ЦВЕ.
  2. Vortex решение, пока все пептид не растворится. Добавить 1,125 мл 0,5 мМ раствора ЦВЕС и 0,375 мл 5 мМ формиата аммония, рН 7,5 буфер с 1,5 мл микроцентрифужных трубки с получением раствора х 10 -5 М CEEC 7,5. Вихрь, пока не смешано.

6. Подготовка различных смесей реакции ртути (II) и ЦВЕ решения

  1. Получение 1: 0,5 соотношение ртути (II): ЦВЕС решение
    1. Поместите 255 мкл 5 мМ формиата аммония, рН 7,5 буфер в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Добавить 30 мкл 7,5 x10 -4 М раствора хлорида ртути, (II), в 1,5 мл микроцентрифужных трубки с буфером формиата аммония.
    2. Vortex решение в течение 10 сек. Затем добавить 15 мкл 7,5 х 10 -4 М раствора ЦВЕ в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Повторите таким же образом, как описано в разделе 4.1.
  2. Получение 1: 1 отношение ртути (II) Раствор ЦВЕС
    1. Поместите 24081; л 5 мМ формиата аммония, рН 7,5 буфер в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Добавить 30 мкл 7,5 x10 -4 М раствора хлорида ртути, (II), в 1,5 мл микроцентрифужных трубки с буфером формиата аммония.
    2. Vortex решение в течение 10 сек. Затем добавить 30 мкл 7,5 х 10 -4 М раствора ЦВЕ в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Повторите таким же образом, как описано в разделе 4.1.
  3. Получение 1: 2 соотношение ртути (II) Раствор ЦВЕС
    1. Поместите 210 мкл 5 мМ формиата аммония, рН 7,5 буфер в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Добавить 30 мкл 7,5 x10 -4 М раствора хлорида ртути, (II), в 1,5 мл микроцентрифужных трубки с буфером формиата аммония.
    2. Vortex решение в течение 10 сек. Затем добавить 60 мкл 7,5 х 10 -4 М раствора ЦВЕ в 1,5 мл микроцентрифужных трубки. Повторите таким же образом, как описано в разделе 4.1.

7. анаЗин реакционных смесей ртути (II) и CGGC образцов Orbitrap ESI масс-спектрометрии

  1. Подготовка масс-спектрометр ESI 16
    1. Draw 100 мкл калибровочных стандартов в стеклянный шприц 500 мкл.
    2. Поместите шприц в шприце колыбели MS насоса, приложите трубку, и ввести в массовое спектрофотометра.
    3. Настройте имя файла для запуска, выбрав значок файла и введите имя файла.
    4. Выберите кнопку данных приобрести в модуле сбора данных и собрать 150 сканирований.
    5. Анализ хроматограмму для проверки калибровочных стандартов, открыв модуль обработки данных программного обеспечения. Откройте модуль, перейдите к меню файла и выберите "открыть", и выберите файл в диалоговом окне. Убедитесь, что пики на хроматограмме коррелируют с массы к заряду отношения стандартам.
    6. Очистите стеклянный шприц 500 мкл путем составления 500 мкл метанола для ВЭЖХ, а затем дозировать мэтанола в химический стакан.
    7. Составьте 500 мкл ВЭЖХ метанолом в стеклянный шприц и промыть систему как при шаге 7.1.2.
    8. Выберите модуль установки метод программного обеспечения, чтобы установить параметры. Выберите меню режима сканирования и идентификации анализатора как FTMS, а затем нажмите кнопку «ОК». Затем, нажав на различных иконок на реальном времени страницы вид спектра, установите следующие параметры: расход газа оболочка: 10, температура Источник: 0, напряжение в капилляре 37 В, трубки линзы: 95 V, спрей напряжение: 4.20 кВ , скорость потока 10.00 мкл / мин, анализатор: FTMS, число сканирований: 150.
  2. Запуск образцы CGGC на ESI масс-спектрометра
    1. Запустите 5 мм формиата аммония рН 7,5 буфер.
      1. Поместите 500 мкл 5 мм формиата аммония буфера в стеклянный шприц 500 мкл, поместите его в шприц колыбели MS насоса и прикрепите трубки.
      2. Запуск буфер через трубку в течение 1-2 мин.
      3. Настройте имя файла для запускавыбрав значок файла и введите имя файла.
      4. Выберите кнопку данных приобрести в модуле и собирать 150 сканирований.
      5. Нажмите кнопку Выполнить, чтобы остановить сбор после 150 сканирует собираются.
      6. Откройте модуль браузера данных, а затем перейти к меню файл и выберите "Открыть" и выберите файл в диалоговом окне. Убедитесь, что нет пиков при 483, 683, 1163 и 1363 м / г не присутствуют, что напоминают пептид или ртуть (II) -пептидом комплексы.
    2. Запустите 1: 0,5 ртуть (II): CGGC отношение решение.
      1. Поместите 250 мкл 1: 0,5 ртути (II) соотношение CGGC образца в шприц.
      2. Поместите шприц в шприц колыбели MS насоса, приложите трубку, и премьер-аппарат.
      3. Выберите имя файла для запуска, выбрав значок файла и введите имя файла.
      4. Нажмите кнопку получения данных в модуле сбора данных и собрать 150 сканирований и нажмите кнопку Выполнить, чтобы остановить сбор.
      5. Откройте модуль, перейдите к меню файла и выберите "открыть", и выберите файл в диалоговом окне. Убедитесь, что хроматограмма содержит пики в том числе и для только пептида CGGC.
      6. Промыть шприц путем аспирации с 500 мкл буфера формиата аммония и затем раздачи формиат аммония буфер в стакан.
      7. Выберите кнопку отходов на MS и промойте трубки три раза 500 мкл буфера формиат аммония.
      8. Промыть шприц путем аспирации с 500 мкл метанола, а затем метанол дозирования в стакан.
      9. Промойте трубки один раз с 500 мкл метанола.
      10. Выберите кнопку детектора нагрузка на РС.
      11. Добавить 500 мкл буфера формиат аммония в шприц.
      12. Поместите шприц в шприц колыбели MS насоса, приложите трубку, и премьер-аппарат.
      13. Выберите имя файла для буфера запустить, выбрав значок файла и введите имя файла.
      14. Нажмитекнопка данные приобретают и собирать 150 сканирований, а затем нажмите кнопку остановки выполнения.
      15. Откройте модуль браузера данных, перейдите к меню файла и выберите "открыть", и выберите файл в диалоговом окне. Убедитесь, что хроматограмма является недействительным пиков по сравнению с предыдущим рт: CGGC перспективе.
    3. Запустите 1: 1 ртути (II): CGGC отношение решение.
      1. Поместите 250 мкл 1: 1 ртути (II) CGGC соотношение образца в шприц.
      2. Повторите таким же образом, как описано для шага 7.2.2.2 в 7.2.2.15.
    4. Запустите 1: 2 ртуть (II): CGGC отношение решение
      1. Поместите 250 мкл 1: 2 ртути (II) CGGC концентрация образца в шприц.
      2. Повторите таким же образом, как описано для шага 7.2.2.2 в 7.2.2.15.

8. Анализ реакционной смеси ртути и ЦВЕ образцов Orbitrap ESI масс-спектрометрии

  1. Запуск ЦВЕ образцов на ESI масс-спектрометра
    1. Повторите процедуру анализа (Шаги 7.1 до 7,2), используя ЦВЕ образцы и реакционных смесей ртути (II) и в странах ЦВЕ в различных стехиометрических соотношениях.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Исследование было проведено с целью охарактеризовать возможные ртути пептидный комплекс состава в течение двух тетрапептидов, CGGC и в странах ЦВЕ (рисунок 1) по ESI масс-спектрометрии. Комплексы ртути (II) с CGGC или ЦВЕС были исследованы с помощью реакции смеси ртути (II) и пептидные растворы при трех различных молярных соотношениях: 1: 0,5, 1: 1 и 1: 2 (ртути (II) пептида) , Концентрация ртути (II), 7,5 х 10 -6 М, а концентрация пептида измененные соответст...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Гидрофобный dicysteinyl тетрапептид CGGC (C 10 H 18 N 4 O 5 S 2; ММ = 338) (рис 1), образует комплексы с ртутью (II), как показано на рисунке 2 и в таблице 1 Кроме того, она образует пептидные димеры и тримеры. порядке возрастания, как количество пептида увеличивается в реакционной смеси. Как показано значений M / Z ассоциированных димеров [(2M + Н) + = 677] и тримеров [(...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Информация о работе, о которой сообщается, не разглашается.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MN-S подтверждает поддержку от Национального научного фонда, Руи предоставить CHE 1011859. Авторы выражают благодарность Триада масс-спектрометрии фонд в Университете Северной Каролины в Гринсборо для использования масс-спектрометра Thermo Fisher Scientific LTQ Orbitrap XL. Авторы выражают благодарность Даниэль Тодд, Винсент Сика, и Brandie Erhmann в университете Северной Каролины в Гринсборо за полезные комментарии и предложения по этой работе.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Хлорид ртути(II)Sigma-Aldrich429724высокотоксичный
формиат аммонияSigma-Aldrich516961
Муравьиная кислотаSigma-AldrichF0507
Гидроксид аммонияFisherA512-P500
ВЭЖХ водаFisherW5-4
ВЭЖХ АцетонитрилFisherBP2405-1
ВЭЖХ МетанолФишерА452-4

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Clifton, J. C. Mercury exposure and public health. Pediatr. Clin. N. Am. 54, 237-269 (2007).
  2. Andersen, O. Principles and Recent Developments in Chelation Treatment of Metal Intoxication. Chem. Rev. 99, 2683-2710 (1999).
  3. Aposhian, H. V., Maiorino, R. M., Gonzalez-Ramirez, D., Zuniga-Charles, M., Xu, Z., Hurlbut, J. M., Junco-Munoz, P., Dart, R. C., Aposhian, M. M. Mobilization of heavy metals by newer, therapeutically useful chelating agents. Toxicology. 97, 23-38 (1995).
  4. Flora, S. J. S., Pachauri, V. Chelation in Metal Intoxication. Int. J. Environ. Res. Public Health. 7, 2745-2788 (2010).
  5. Campbell, J. R., Clarkson, T. W., Omar, M. D. The therapeutic use of 2,3-dimercaptopropane-1-sulfonate in two cases of inorganic mercury poisoning. JAMA. 256, 3127-3130 (1986).
  6. Rooney, J. P. K. The role of thiols, dithiols, nutritional factors and interacting ligands in the toxicology of mercury. Toxicology. 234, 145-156 (2007).
  7. Lin, X., Brooks, J., Bronson, M., Ngu-Schwemlein, M. Evalution of the association of mercury (II) with some dicysteinyl tripeptides. Bioorg. Chem. 44, 8-18 (2012).
  8. Ngu-Schwemlein, M., Lin, X., Rudd, B., Bronson, M. Synthesis and ESI mass spectrometric analysis of the association of mercury(II) with multi-cysteinyl peptides. J. Inorg. Biochem. 133, 8-23 (2014).
  9. Winther, J. R., Thorpe, C. Quantification of thiols and disulfides. Biochimica et. Biophysica Acta. 1840, 838-846 (2014).
  10. D'Agstino, A., Colton, R., Traeger, J. C., Cantry, A. J. An Electrospray Mass Spectrometric Study of Organomercury (II) and Mercuric Interactions with Peptides Involving Cysteinyl Ligands. Eur. Mass Spectrom. , 273-285 (1990).
  11. Hofstadler, S. A., Sannes-Lowery, K. A. Applications of ESI-MS in drug discovery: interrogation of noncovalent complexes. Nature Reviews Drug Discovery. 5, 585-595 (2006).
  12. Rubino, F. M., Verduci, C., Giampiccolo, R., Pulvirenti, S., Brambilla, G., Columbi, A. Molecular Characterization of Homo- and Heterodimeric Mercury (II)-bis-thiolates of Some Biologically Relevant Thiols by Electrospray Ionization and Triple Quadruple Tandem Mass Spectrometry. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 15, 288-300 (2003).
  13. Krupp, E. M., Milne, B. F., Mestrot, A., Meharg, A. A., Feldmann, J. Investigation into mercury bound to biothiols: structural identification using ESI-ion-trap MS and introduction of a method for their HPLC separation with simultaneous detection by ICP-MS and and ESI-MS. Anal. Bioanal. Chem. 390, 1753-1764 (2008).
  14. Schaumlöffel, D., Tholey, A. Recent directions of electrospray mass spectrometry for elemental speciation analysis. Anal. Bioanal. Chem. 400, 1645-1652 (2011).
  15. Patiny, L., Borel, A. ChemCalc: a building block for tomorrow's chemical infrastructure. J. Chem. Inf. Model. 53, 1223-1228 (2013).
  16. Thermo Scientific. Xcaibur Versions 2.1.0-2.3.0 Data Acquisition and Processing User Guide. Revision E. United States. , Thermo Fisher Scientific Inc. (2012).
  17. Falcone, G., Foti, C., Gianguzza, A., Giuffrè, O., Napoli, A., Pettignano, A., Piazzese, D. Sequestering ability of some chelating agents towards methylmercury(II). Anal. Bioanal. Chem. 405 (2), 881-893 (2013).
  18. Mah, V., Jalilehvand, F. Glutathione Complex Formation with Mercury(II) in Aqueous Solution at Physiological pH. Chem. Res. Toxicol. 23, 1815-1823 (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

IIOrbitrap

Похожие статьи