Трехмерная Биомиметический Технология: Роман Biorubber Создает Определено микро- и макроуровне архитектур в коллагене гидрогелей

Краткое содержание

Инновационная технология биопроизводства была разработана для создания трехмерных конструкций, которые напоминают архитектурные особенности, компоненты и механические свойства тканей in vivo. В этой технике используется недавно разработанный жертвенный материал, каучук BSA, который передает детальные пространственные особенности, воспроизводя in vivo архитектуры самых разных тканей.

Аннотация

Тканевые каркасы играют решающую роль в процессе регенерации тканей. Идеальный каркас должен выполнить ряд требований, таких как наличие надлежащего состава, целевого модуля, и четко определенными архитектурными особенностями. Биоматериалы, которые воспроизводят внутреннюю архитектуру естественных тканей в жизненно важны для изучения заболеваний, а также для облегчения восстановления утерянных и искаженной мягких тканей. Новую технику biofabrication был разработан который сочетает современные изображения, трехмерной печати (3D), и селективной ферментативной активности создать новое поколение биоматериалов для исследований и клинического применения. Разработан материал, бычий сывороточный альбумин каучук, является реакция под давлением в литейную, которая поддерживает конкретные геометрические особенности. Это расходуемый материал позволяет надлежащей передаче архитектурных особенностей к естественному каркасный материал. Прототип состоит из 3D коллагеновой матрицей с 4 до 3 мм каналов, которые ReprESENT разветвленную архитектуру. Эта статья подчеркивает использование этой техники biofabrication для генерации природных конструкций. Этот протокол использует компьютерное программное обеспечение с (CAD), чтобы изготовить прочную форму, которая будет реакция вводили BSA каучука с последующим ферментативным расщеплением резины, оставляя его архитектурные особенности в пределах каркасной материала.

Введение

В тканевой инженерии области возможность изготовления каркасов ткани является жизненно важным. Подходящий каркас ткань имеет 3D структуру, состоит из биосовместимых материалов, и имитирует в архитектуре ткани естественных способствовать росту и ремоделирования клеток и тканей. Это каркас должен позволять транспортировку питательных веществ и удаление отходов ^1-4. Одним из главных препятствий в производстве этих каркасов является способность повторять конкретные геометрические особенности в биосовместимого материала. Несколько методов biofabrication сообщалось контролировать геометрические характеристики этих каркасов, примеры электроформования ^5-8, растворитель литье ^9, стереолитографии ^10, и 3D-печати ^11, среди других. Эти методы лишены в обеспечении относительно легко переносить контролируемых внутренних и внешних архитектурных особенностей, которые дорого, ограничиваются их разрешения и печатными ( например, датчик форсунки, ограничение материал), или требует проведения пост-изготовление которых требует длительного периода времени, чтобы произвести жизнеспособные каркасов ^12.

Во многих коммерческих системах изготовления, создание внутренних пустот, каналов и функций достигается применением песка или других подходящих съемных или жертвенные материалы. Металл или пластик часть формируется вокруг песчаной форме, и как только она затвердевает, песок удаляется. В той же манере, что следующее поколение биоматериалов нуждается в biosand эквивалент. Таким образом, резиновое БСА был разработан в качестве замены для biosand. Резины БСА является недавно сформулированы материал, который состоит из бычьего сывороточного альбумина, сшитой с помощью глутаральдегида. Конечной целью является воссоздание конкретных архитектурных особенностей в биоразлагаемых коллагеновой матрицей. Характеристики жертвенного biorubber который поддерживает и размерную точность с плесенью исходного ткани описаны.

Несколько комбинации BSA и глутарового альдегида концентрациях тестировали с использованием различных растворителей. Этот материал был создан в результате реакции между BSA и глутаральдегид. BSA резина может быть реакцией вводят в запутанных геометрий форм тканей. Сшитый БСА трипсином лабильны и легко переваривается под действием фермента при умеренных рН и температурных условий. И наоборот, нетронутыми тип коллагена очень устойчив к трипсина пищеварения. Эти особенности были капитализированы выборочно удалить BSA резину, оставляя коллаген позади. Настоящая работа состояла в определении идеальные параметры, необходимые для получения лабильный плесени, которые могут доставить определенные архитектурные особенности к биосовместимого эшафот. Конкретные особенности, которые были оценены включены смешиванию, ферментативного расщепления, несущую нагрузку, и способность быть реакция впрыскивается в негативной форме. Сочетание 30% BSA и 3% глутаральдегида отвечает этим требованиям. Этот протокол обеспечивает necessичных руководящих принципов, чтобы создать эти трехмерные каркасы. Прототип состоит из коллагеновой матрицей, которая представляет собой разветвленную архитектуру с одним притоком и два выпускной канал с диаметром 4- и 3-мм соответственно. Этот метод имеет потенциал, чтобы имитировать макро- и микро-сред интересующей ткани. Эта технология обеспечивает жизнеспособную методику для доставки конкретного геометрическую полезно биоразлагаемого материала в относительно легкой и своевременное дело с высокой точностью, которая может быть настроен, чтобы имитировать виво эластичность тканей в и другие характеристики интересующей ткани.

Протокол

1. Определить процент твердых веществ в Batch коллагена

1. Экстракт коллагена следующей ранее опубликованной методике ^13. Оттепель минимум 20 мл коллагена. Определить начальную процент коллагена твердых веществ в партии для того, чтобы манипулировать концентрацию коллагена в образованных гидрогелей.
   1. Нарезать три кусочка алюминиевой фольги (около 6 х 6 см) и форма каждый как на сковороде, используя дно стакана 25 мл. Запишите вес каждого поддона.
   2. Добавьте небольшое количество коллагена в каждую кастрюлю и записывать общий вес алюминиевого поддона и коллагена. Добавить 0,5 - 0,8 г коллагена на каждом алюминиевую кастрюлю.
      Примечание: После этого шага, есть три кастрюли из алюминиевой фольги и каждый из них должен иметь небольшое количество коллагена. Убедитесь, чтобы записать вес каждого (всего 3) пустой алюминиевой посуде и вес поддона после добавления коллагена.
   3. Рассчитывают вес коллагена в каждую чашку с использованием пollowing формулу:
      Коллаген вес = Pan и вес коллаген - вес Pan
   4. Поместите три алюминиевые кастрюли, которые держат коллаген в духовке при температуре 100 ° С в течение 24 ч.
   5. Через 24 часа, записывать вес каждого алюминиевую кастрюлю и обезвоженную коллагена.
   6. Рассчитывают вес обезвоженного коллагена, используя следующее уравнение:
      Высушенные вес коллагена = Pan и обезвоженной массы коллаген - Пан вес
   7. Вычислить процент твердого вещества в течение трех образцах для определения концентрации твердого коллагена, используя формулу ниже:
      
   8. Рассчитывают среднюю коллагена содержание твердого вещества в пакете с использованием процент коллагена твердых для каждого из трех образцов.
      Примечание: Коллаген, который будет использоваться то, что осталось от гидратированного коллагена. не будут использованы Ни один из обезвоженного коллагена.
   9. После определения процентного содержания коллагена твердого вещества (Initial концентрация коллагена) из партии, продолжать использовать оставшееся гашеной коллагена. Используйте калиброванный рН-метр для доведения рН коллагеновой партии к 3.
      1. Добавить небольшое количество (2-5 мкл одновременно) от 12 N соляной кислотой (HCl). Держите на льду во все времена. Не следует добавлять соляную кислоту непосредственно к коллагену - добавить кислоту в стороне трубки. После добавления кислоты, используют шпатель, чтобы подтолкнуть кислоты к коллагену и быстро размешать смесь.
   10. Когда она достигнет рН 3, пусть коллаген сидеть O / N при 4 ° С.

2. Подготовка BSA Резина

1. Приготовьте раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА) в соответствии с процедурой, перечисленных ниже.
   1. Получают раствор 2x фосфатно-солевом буферном (PBS). Добавить две таблетки PBS до 100 мл воды, чтобы сделать 0,02 М раствора PBS.
   2. Объединить BSA с 2x PBS, чтобы создать 30% раствора BSA с помощью приведенной ниже процедуре.
      1. Например, чтобы сделать 30% BSA в 30 мл 2 раза PBS, использовать 12,9 г BSA. Добавить 1/3 2x PBS (например, 10 мл) в колбе с мешалкой. Добавить 1/2 БСА (например, 6,45 г BSA) в колбу и с помощью шпателя, смачивать сухой растворенное вещество.
      2. Повторите этот процесс добавления PBS, а затем BSA, пока все вещества и растворителя в колбе. Используйте лопаточку, чтобы смочить всю растворенное вещество. Это будет выглядеть как смесь некоторой жидкости и сгустки. Пусть сидят в течение примерно 30 мин.
      3. Затем включите мешалку на низкой цикла и убедитесь, что нет скопления вокруг мешалки. Следует принять 90 мин, чтобы все в растворе или он может быть оставлен перемешивании O / N при 4 ° С. После растворенное вещество полного растворения, поместите раствор в 20 мл шприц и закрыты шприцевой фильтр 0,20 мкм. Нажмите на поршень, чтобы изгнать жидкость через фильтр и собирают стерилизованного раствора в новую пробирку. Хранить при 4 ° С.
   3. Подготовьте 3% глутаральдегида Solutiна разбавлением 25% раствора глутаральдегида стерильного отфильтрованного 2x PBS. Например, в течение 10 мл 3% -ного раствора глутарового альдегида, использовать 2 мл 25% глутаральдегида и 8 мл 2 раза PBS. Хранить при 4 ° С.

3. Формы обращения

Примечание: Прототип описано в этой статье использует пользовательский сделал из нержавеющей стали Y формы кусок. Плесень содержит приток и отток два канала 4 и 3 мм соответственно. Во-первых, чистые формы, спрей их с ненасыщенным сала, и стерилизовать их. Подготовьте формы в соответствии с процедурой, описанной ниже.

1. Чистые формы из нержавеющей стали с использованием ультразвукового при частоте 35 кГц. Поместите формочки в ультразвуковом и погрузить их с водой и льдом. Держите формы холодной во все времена во время обработки ультразвуком работает. Запуск ультразвукового течение 2 периодов 90 мин.
   1. После каждого периода, используйте иглу, чтобы убедиться, что нет материала в Luer защелкнулись нержавеющую сталь или бРасс разъем. Используйте мыло и воду, чтобы очистить всю поверхность обеих сторон изложницы. Убедитесь, что нет никаких препятствий в каналах.
2. Поместите формочки, винты и разъем замка Luer в автоклаве сумку и автоклаве.
3. Наполните бутылку, которая крепит к половине пути воздушного распылителя с коммерчески доступного сала (смешанное жирных кислот релиз агента). Замените крышку с регулярной колпачок бутылки. Поместите его в автоклаве сумку и автоклаве.
   Примечание: Сало используется, чтобы облегчить выпуск материала, который будет реакция вводят позже (BSA каучук). Не оставляйте крышку распылитель бутылки в autoclave- это может повредить внутреннюю прокладку.
4. Разминка сало в течение 45 секунд или до его ясным и жидкости в микроволновой печи. Винт воздушный распылитель крышку на бутылку сало. Подключение крышку с распылителя. Присоединить распылитель к источнику воздуха на лабораторном столе. Откройте воздушный клапан, и открыть сопло распылителя пока она не начнет смачивания поверхностииз бумажным полотенцем.
5. Спрей сало перпендикулярно поверхности формы, пока поверхность не полностью покрыта. После каждый кусок был распылен, поместите их в чашку Петри и запечатать его. Поместите формочки при 4 ° С в течение 2 ч.
6. Продолжать стерилизовать формы, подвергая поверхность воздействию УФ света в течение 30 мин. Поместите их обратно при 4 ° С, пока они не готовы быть реакция вводили.

4. Реакция Инъекция BSA Резина

Примечание: Все материалы и решение должно быть держать холод до готовый использовать не для предотвращения преждевременного установку резины BSA в следующих шагах.

1. Подготовьте дозатор для подачи резины BSA к пресс-формам, выполнив следующие действия.
   1. Стерилизовать всех смесительных компонентов (двух уплотнительных колец, шприц крышкой, дважды шприцев, смешать наконечник, и 4: 1 диспенсер), подвергая их ультрафиолетовым светом в течение 30 мин в полимеразной цепной реакции (ПЦР) капот.
      Примечание: ПЦР капот был использован, потому что тего процедура включает фиксаторы. Эти химические вещества не могут быть использованы в капот культуре клеток / тканей из-за риска заражения и токсичностью по отношению к клеткам. Любой другой капот, который содержит ультрафиолетовый свет будет подходящим.
   2. Поместите крышку наконечника на держателе раствора.
   3. Выполните сведение и инъекции в соотношении 4: 1 БСА: Глютаральдегид. Добавьте 30% BSA к двойному шприца камеры, которые будут доставлять наибольшее количество раствора (Это займет приблизительно 4 мл для заполнения). Убедитесь, чтобы оставить достаточно места, чтобы разместить уплотнительное кольцо, чтобы предотвратить перелива и загрязнения прилегающей камере.
   4. Добавить 3% -ный раствор глутарового альдегида в другую камеру (это займет около 1 мл для заполнения). Убедитесь, чтобы оставить достаточно места, чтобы разместить уплотнительное кольцо для предотвращения перелива и загрязнения прилегающей камере.
   5. Поместите двойной шприц на дозатор. Наклоните сборку вертикально, так что шприц колпачок находится на вершине. Замените крышку с наконечником для смешивания.
   6. Южная КаролинаREW два нержавеющих куски стальной формы вместе.
   7. Поместите сборку внутри автоклава сумку.
   8. Чтобы удалить весь воздух в дозаторе, удерживать ее в вертикальном положении и быстро выжимать ручку один раз, чтобы освободить небольшое количество БСА, смешанного с помощью глутаральдегида. Затем быстро прикрепить разъем замка Luer нержавеющей стали Y пресс-формы для наконечника шприца.
   9. Удерживая нержавеющей стали Y форму с левой стороны, и БСА-Глютаральдегид смеси дозатором справа. Альтернативный охватывающих каждую из левой и правой выхлопе выпускных каналов нажатием выхлоп по бокам автоклава пакет, чтобы убедиться, что внутри пустоты заполнены раствором. Затем поместите формочки в горизонтальном и впрыснуть снова.
   10. Отделить формочки из дозатора и место в 25 мм чашки Петри.
   11. Поместите парафином вокруг чашку Петри, чтобы предотвратить дегидратацию резины.
   12. Поместите форму в 4 ° C холодильник O / N.

Примечание: Коллаген должны храниться на льду в течение всего времени процесса.

1. Изменение концентрации коллагена, используя процент коллагена твердых веществ.
   1. Сделать 10 мл 1,75% коллагена, регулируя начальную концентрацию коллагена с холодной водой.
   2. Используя калиброванный рН-метр, доведения рН до 3 с помощью 12 N соляной кислотой. Не следует добавлять соляную кислоту непосредственно к коллагеном добавить кислоту в стороне трубки. После добавления кислоты, использовать лопаточку, чтобы подтолкнуть кислоты в коллагена и быстро размешать смесь.
   3. Взвесить 4 г коллагена в отдельном коническую трубку.
   4. Центрифуга коллаген, чтобы удалить воздух при 4 ° С и 9,343 мкг в течение 20-30 мин.
   5. УФ стерилизации капот культуре клеток в течение 30 мин, и добавить 14 мкл ламинин к 4 мл коллагена. Это приведет к конечной концентрации ламинина 10 мкг / мкл. Примечание: Laminin обеспечивает секtructural целостности, адгезии и способствует развитию различных клеточных реакций.
   6. Поверните ПЦР УФ-светом в течение 20-30 мин до использования капот для стерилизации.
   7. Поместите блокировки колпачок Luer, чтобы прикрепиться к 20 мл шприц, в этаноле в течение 2 ч. Затем дайте ему высохнуть и поместить его в ультрафиолетовом свете.
   8. Гамма облучать коллаген 8,6 мин, чтобы достичь 1200 сГр.
      Примечание: Время будет зависеть от распада источника цезия. Регулировка времени, чтобы достичь той же дозировке.

6.Casting коллаген на БСА Резина

1. Чтобы полимеризовать коллаген, используют 8: 1: 1 соотношение (коллаген: HEPES: MEM). Следующая процедура основана на начальной 4 г подкисленного коллагена (из стадии 5.1.8).
   1. Делают 0,2 н раствора HEPES в воде, и доведени рН до 9 добавлением небольших количеств (1-5 мкл) 1-5 М раствором гидроксида натрия (NaOH). Используя калиброванный рН-метр, мониторинг рН раствора после каждого добавления. Хранить при 4 ° С или кеер на льду.
   2. Включите УФ свете капот культуре ткани в течение 20-30 мин, чтобы стерилизовать капот.
   3. Автоклав щипцы, лопаточки и скальпель для стерилизации.
   4. Смешайте 1,5 мл 0,2 N HEPES (рН 9) и 1,5 мл 10х MEM с использованием тканевой культуры капот. Удостоверьтесь, чтобы держать его на льду и вихря в течение 5 сек до использования. Хранить при 4 ° С или держать на льду.
   5. Для стерилизации капот ПЦР, включите ультрафиолетового света в течение 30 мин.
   6. Поместите 12 пластины также и 20 мл шприц в -20 ° C в течение 10 мин, или до готовый продолжить. Примечание: Держите все материалы на холоде до готовности к использованию. Повышение температуры вызывает преждевременное коллагена фибриллогенез.
   7. Спрей все трубы и луночных, которые собираются находиться в капот с 70% этанола и дайте им высохнуть на стерилизацию. Поместите 20 мл шприц на льду для охлаждения для последующего использования.
   8. В капотом ПЦР, открыть формы из нержавеющей стали, чтобы освободить BSA резины и с помощью скальпеля, разрезать выхлопные каналы БСА гubber плесень.
   9. Под капотом ПЦР, открыть стерильные коллагеновые трубки и добавить 1 мл раствора HEPES-MEM (убедитесь, что перед извлечением решение HEPES-MEM, что это хорошо перемешивается и нет твердых отложений).
   10. Используя стерильный шпатель, тщательно перемешать коллагена и буферный раствор.
   11. Закрыть и вихрь быстро, чтобы обеспечить хорошо перемешанную гидрогель.
   12. Переход к холодной 20 мл шприц.
   13. С одной стороны, провести BSA Резина внутри скважины и, используя другой, обойтись половину раствора коллагена гидрогеля на дне колодца.
   14. Используя стерильные пинцеты, убедитесь, что приток резины и отток концы касаясь стороны скважины.
   15. Налейте раствора коллагена в верхней части каучука, пока не будет полностью покрыт.
   16. Убедитесь, что резиновая БСА подвешен внутри коллагена и что нет никаких пузырей, особенно вблизи концов резины.
   17. Поместите крышку и завернуть парафином вокругокружности скважины.
   18. Поместите в инкубаторе в течение 1 ч при 37 ° С. Держите ПЦР УФ свет.
2. После полимеризации коллагена, УФ сшивания гидрогеля с помощью следующей процедуры.
   Примечание: Сшивание коллагена будет сделано с использованием УФ сшивающего аппарата, в котором количество энергии может быть контролируемой.
   1. Включите УФ сшивателя и использовать настройку энергии облучать пустой камеру с 630000. мкДж / см ^2.
   2. Удалить гели из инкубатора.
   3. Спрей руки с этанолом, и, внутри камеры, снять крышку как можно быстрее.
   4. Закройте камеру и УФ сшивания гидрогели, выбрав настройку энергии и облучение 630000 мкДж ^{/ см 2.}
   5. После цикла сшивки, выключить ультрафиолетовый свет на капот ПЦР
   6. Спрей руки с этанолом и открыть камеру, быстро поставив крышку обратно на луночного планшета. Перемещение луночного планшетак капоту ПЦР.
   7. Используя стерильный шпатель, аккуратно ослабить и удалить гель из колодца. Флип гели под капотом для сшивания дна гидрогеля. Повторите шаг 6.2.3 и 6.2.4.

7. Фермент Расщепление BSA Резина

1. Для того чтобы иметь полую коллагеновой матрицей, удалить BSA Резина таким образом, что не влияет на размеры внедренных в гидрогеле. Эта процедура описана ниже.
   1. Включите УФ-светом в течение 20-30 мин для стерилизации капот культуры ткани.
   2. Сделать 0.25% раствора трипсина рН 7,8. Например, в течение 15 мл воды, добавить 0,0376 г трипсина в 50 мл коническую пробирку. Доводят рН до 7,8 путем добавления небольших количеств (2-5 мкл) 1 М NaCl. Поместите раствор в 20 мл шприц и закрыты шприцевой фильтр 0,20 мкм. Нажмите на поршень, чтобы изгнать жидкость через фильтр и собирают стерильный раствор в новую пробирку.
   3. Включите водяной бане и установить температуру до 30° С.
   4. Через 30 мин выключить ультрафиолетовый свет. Спрей этанол на всех труб и материалов, которые будут использованы в капотом.
   5. Перенести коллагена гидрогель под капотом и место в отдельном коническую трубку.
   6. Добавьте около 3-5 мл (достаточно, чтобы покрыть гели) от 0,25% раствора трипсина при рН 7,8 в каждую пробирку.
   7. Уплотнение трубки парапленкой и вихря слегка в течение приблизительно 1 мин.
   8. Место в ванной С 30 ° С водяной для 15-24 ч. В то время как в водяной бане, слегка вихрь гелей часто, пока резиновая БСА не была переваривается или удалены из гидрогеля.
      Примечание: Для того чтобы определить, является ли резиновая БСА была удалена, либо резиновый плавает в растворе трипсина или есть раздолбанные штук. Там не должно быть никаких видимых темные участки гидрогеля.
2. Чтобы гарантировать, что все БСА резины и трипсин был удален из гидрогелей, промыть его, как описано ниже.
   1. Включите ого ПЦРУльтрафиолетовый свет в день в течение 20-30 мин.
   2. Приготовьте раствор Mosconas. Объединить хлорид калия (KCl, 28,6 мМ), _{(NaHCO 3,} 11,9 мМ), глюкозу (9,4 мм) и _{(NaH 2 PO 4,} 0,08 ммоль) в воде. Регулировка рН до 7,4 с помощью 1 М NaOH или 12 М раствора HCl. Поместите раствор в 20 мл шприц и использовать шприц фильтр 0,20 мкм для стерилизации раствора.
   3. Спрей все с этанолом до размещения их на капот и позволяют этанол высохнуть.
   4. Открыть трубку и перенесите 5-10 мл стерильного раствора Mosconas к новому 50 мл коническую пробирку.
   5. Перенести коллагена гидрогель к конической трубе, содержащей раствор фермента. Убедитесь, что гидрогель полностью покрыта раствором. Оставьте трубку в шейкере в холодильнике при 4 ° С в течение 30 мин.
   6. Аспирируйте решение Mosconas и повторите шаг 7.2.5 вдвое.
   7. Хранить при 4 ° С.

Результаты

Полученные результаты показывают, что эта методика biofabrication эффективен в генерировании 3D каркасов, которые могут имитировать пространственное расположение видно на ин виво ткани. Архитектурные особенности являются жизненно важными параметрами для тканевой инженерии применения, играющие ключевую роль во взаимодействии в естественных клеток и функциональности ткани.

Последовательность и смешиваемость рез...

Обсуждение

Biofabrication является весьма междисциплинарной областью, в которой биологии и инженерных принципов слияния для создания сложных материалов, которые имитируют родной ткани. Для того чтобы добиться этого, существует потребность в разработке методов, которые используют информацию, собранную из ткани в естественных условиях и перевести его в в пробирке эшафот. Таким образом, платформа может быть сконструирована, что напоминает архитектурные, функциональные, и механические свойства в естественных усло...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Коллаген I типа Коллаген			извлеченный из телячьей кожи
Гидрохлорная кислота (HCl)	Sigma-Aldrich	7647-01-0
Фосфатный буферный раствор (таблетки PBS)	MP Biomedical	U5378	1 таблетка на 100 мл составляет 1x
PBS Albumium из бычьей сыворотки (BSA)	Sigma-Aldrich	A9647
Глутаральдегид	Sigma-Aldrich	G5882	Токсичные
поля	сала	3090
Формы			фрезерованные с использованием микролюционной машины
Комплект воздушной щетки Центральный	пневматический	47791
Наконечник для смешивания для двойного шприца	Medmix	ML2.5-16-LLM	Миксер, DN2,5X16, 4:1 коричневый, мед
Маленькое уплотнительное кольцо для двойного шприца	Medmix	PPB-X05-04-02SM	Поршень B, 5 мл, 4:1, PE натуральный
двойной шприцевой колпачок	Medmix	VLX002-SM	Колпачок, 4:1/10:1, PE коричневый, med
Большое уплотнительное кольцо для двойного шприца	Medmix	PPA-X05-04-02SM	Поршень A, 5 мл, 4:1
Двойной шприц	Medmix	SDL X05-04-50M	Двойной шприц, 5 мл, 4:1
Двойной шприц Диспенсер	Medmix	DL05-0400M	, 5 мл, 4:1, мед, простой
Ламиним			3,6 мг/мл - экстрагированный USC lab
20 мл Шприц Luer Lock Tip	BD	302830
Luer Lock Caps	Fisher	JGTCBLLX
HEPES	Sigma -Aldrich	H4034
Gibco Minimum Essential Media 10x (MEM)	Life Technologies	1143-030
Trypsin	Life Technologies	27250-018
UV Crosslinker	Spectroline UV	XLE1000
Sodium Cloride (NaCl)	Fisher	S271-10	Для приготовления Mosconas
Potassium Chloride (KCl)	Sigma -Aldrich	P5405-250	Для приготовления Mosconas
Sodium Bicarbonate (NaHCO3)	Fisher	BP328-500	Для приготовления Mosconas
Glucose	Sigma -Aldrich	G-8270	Для приготовления Mosconas
Sodium Phosphate didasic (2PO4)	Sigma-Aldrich	S-7907	Для приготовления
стерильного фильтра Mosconas для шприцев	Corning	431224